【摘要】：目的:通過建立動脈粥樣硬化小鼠模型,研究紅曲(Red yeast rice)對動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)小鼠腸道炎癥及腸道屏障功能的影響,探討其保護作用。方法:1.動物分組:18只8周齡雄性ApoE~(-/-)小鼠,體重(22±2)g。適應性喂養(yǎng)1周后小鼠按體重隨機分為:空白對照組(CK);動脈粥樣硬化模型組(AS);紅曲組(RYR)。動脈粥樣硬化模型組,紅曲組喂食高脂高膽固醇飼料(含15%豬油+0.25%膽固醇),空白對照組喂食普通飼料。紅曲組每天0.34 g/kg.d紅曲灌胃,其它組在同等時間給予等量生理鹽水灌胃。實驗周期為12周。最后一次灌胃后小鼠禁食12 h,摘取眼球取血,離心,取血清。將小鼠在冰上行心臟灌注,灌注完畢,在冰上取出主動脈、空腸和盲腸內(nèi)容物,根據(jù)實驗要求做相應處理,剩余組織-80℃冰箱保存。2.檢測小鼠主動脈粥樣硬化形成情況:對小鼠主動脈大體行油紅O染色,對動脈粥樣斑塊面積進行定量。3.檢測紅曲對血脂的影響:利用全自動生化分析儀檢測血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(tryglyeride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)。4.蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin eosin,HE)觀察空腸病理變化。5.透射電鏡觀察小鼠空腸組織超微結構的改變。6.蛋白質印跡法(Western Blot,WB)檢測空腸組織中緊密連接蛋白occludin、JAM-1的表達水平。7.蛋白質印跡法檢測空腸組織中腫瘤壞死因子-α(Tummor necrosis factor alpha,TNF-α)、白細胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)的蛋白表達水平。8.16S rDNA高通量測序進行盲腸內(nèi)容物腸道菌群結構分子生態(tài)學分析。結果:1.對小鼠主動脈行油紅O染色后,進行分析統(tǒng)計。模型組與對照組相比斑塊面積顯著增加(P0.05);紅曲干預后與模型組相比斑塊面積顯著減少(P0.05)。2.與空白對照組相比模型組血清總膽固醇顯著升高(P0.05),紅曲組與模型組相比總膽固醇顯著降低(P0.05);紅曲組與空白對照組和模型組相比低密度脂蛋白膽固醇均顯著降低(P0.05)。3.HE染色結果顯示,空白對照組空腸黏膜無病理性改變,絨毛及腺體均完整;與空白對照組相比,動脈粥樣硬化模型組腸黏膜上皮脫失,腸絨毛不清,黏膜充血,空腸絨毛高度與對照組相比降低30.44%(P0.05);紅曲干預后腸絨毛輕度脫失,黏膜基本正常,空腸絨毛高度與模型組相比增加44.21%(P0.05)。4.電鏡結果顯示,空白對照組空腸微絨毛豐富,排列整齊,柱狀上皮細胞結構完整,細胞間連接結構正常。與空白對照組相比,動脈粥樣硬化模型組緊密連接松弛,橋粒連接顯示不清,微絨毛長度縮短了53.52%,差異具有顯著性(P0.05);與模型組相比紅曲組細胞間連接結構基本正常,微絨毛豐富微絨毛長度增長了47.62%,差異具有顯著性(P0.05)。5.與空白對照組相比,動脈粥樣硬化模型組occludin和JAM-1的蛋白表達均顯著降低(P0.05);與模型組相比,紅曲組occludin和JAM-1的蛋白表達均顯著升高(P0.05)。6.動脈粥樣硬化模型組TNF-α和IL-1β與空白對照組相比蛋白表達水平均顯著升高(P0.05);紅曲組與動脈粥樣硬化模型組相比TNF-α和IL-1β蛋白表達水平均顯著降低(P0.05)。7.與對照組相比模型組厚壁菌門(Firmicutes)豐度顯著增加(P0.05),紅曲組中厚壁菌門數(shù)量較模型組顯著減少(P0.05)。LEfSe分析顯示擬桿菌屬(Bacteroides)在紅曲組中具有顯著性差異。Spearman相關分析顯示,Lachnospiracea_incertae_sedis菌屬與斑塊面積呈負相關;Anaeroplasma菌屬與低密度脂蛋白膽固醇呈負相關;紅曲組與模型組相比Anaeroplasma菌屬菌群豐度顯著升高;Alistipes菌屬與總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇呈正相關;紅曲干預后Alistipes菌屬與模型組相比菌群豐度顯著降低。結論:1.紅曲有減輕動脈粥樣硬化形成的作用,該作用可能與降低膽固醇,恢復腸道菌群平衡,保護腸道屏障功能,改善腸道炎癥反應有關。2.紅曲治療特異性地改變了Alistipes菌屬和Anaeroplasma菌屬的豐度,提供了藥物操縱腸道微生物群作為動脈粥樣硬化治療的可能性證據(jù)。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R543.5;TS201.4
【圖文】：

圖 1 小鼠主動脈大體油紅 O 染色觀察CK 空白對照組；AS 動脈粥樣硬化模型組；RYR 紅曲組圖 2 紅曲對小鼠主動脈斑塊面積的影響 空白對照組；AS 動脈粥樣硬化模型組；RYR 紅曲組照組相比，P＜0.05；**與空白對照組相比，P＜0.01；#動脈粥樣硬##與動脈粥樣硬化模型組組相比，P＜0.01。鼠血脂的影響對照組相比動脈粥樣硬化模型組血清 TC 顯著升高（P<0.0

7圖 2 紅曲對小鼠主動脈斑塊面積的影響白對照組；AS 動脈粥樣硬化模型組；RYR 紅曲組照組相比，P＜0.05；**與空白對照組相比，P＜0.01；#動脈粥樣#與動脈粥樣硬化模型組組相比，P＜0.01。鼠血脂的影響照組相比動脈粥樣硬化模型組血清 TC 顯著升高（P<0.模型組相比血清 TC 顯著降低（P<0.05）；動脈粥樣硬對照組相比顯著升高（P<0.05），紅曲組與空白對照組.05），紅曲組與動脈粥樣硬化模型組相比 LDL-C 顯著降低顯著性差異。（圖 3）

圖 3 紅曲對小鼠血脂的影響CK 空白對照組；AS 動脈粥樣硬化模型組；RYR 紅曲組注：*與空白對照組相比，P＜0.05；**與空白對照組相比，P＜0.01；#動脈粥樣硬化模型組組相比，P＜0.05；##與動脈粥樣硬化模型組組相比，P＜0.01。CK 組 n=4;AS 組 n=4;RYR 組 n=6。3 紅曲對小鼠空腸病理的影響HE 染色結果顯示：空白對照組空腸黏膜無病理性改變，絨毛及腺體均完整；與空白對照組相比，動脈粥樣硬化模型組腸黏膜上皮脫失，腸絨毛不清，黏膜充血，空腸絨毛高度與對照組相比降低 30.44%（P<0.05）；紅曲干預后腸絨毛輕度脫失，黏膜基本正常，空腸絨毛高度與模型組相比增加 44.21%（P<0.05）。(圖 4，圖 5)

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

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本文編號：2777638