【摘要】：目的探討不同濃度膳食鋅干預下HFpEF大鼠心肌中Zn~(2+)濃度變化以及鋅轉(zhuǎn)運體Zip7、Zip10及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子表達變化。方法1.在建立的HFpEF大鼠模型基礎(chǔ)上檢測實驗組及對照組大鼠血清及心肌組織中Zn~(2+)的濃度:本課題組另一成員(張明哲)在前期實驗中已采用達爾鹽敏感性雄性大鼠(DSS大鼠)建立了HFpEF的動物模型。其將DSS大鼠隨機分為5組(每組12只),其中模型組/實驗組分為4組,包括高鹽低鋅飲食組(HL組)、高鹽正常鋅飲食組(HN組)、高鹽高鋅飲食組(HH90組)以及高鹽極高鋅飲食組(HH270組);對照組為正常鹽正常鋅飲食組(NN組)。實驗組的高鹽飼料中氯化鈉的含量均為8%,而各實組飼料中鋅的含量分別為10mg/kg、30mg/kg、90mg/kg以及270mg/kg;對照組飼料中氯化鈉的含量則為0.3%、鋅的含量為30mg/kg;其它飼料組份的含量以及飼養(yǎng)的條件各組間均相同。然后從7周齡飼養(yǎng)至20周齡,通過癥狀體征、超聲心動、濕肺/干肺比值、血清及心肌組織BNP含量等對模型進行評價,并留取心臟及血清標本。在此基礎(chǔ)上,采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICPOES)檢測各大鼠血清及心肌組織中Zn~(2+)的濃度。2.檢測實驗組及對照組大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip10的表達情況:使用實時定量聚合酶鏈鎖反應(yīng)(qPCR)及蛋白免疫印跡(WB)分別檢測各大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip10的mRNA及蛋白表達情況。3.檢測實驗組及對照組大鼠心肌組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激情況:使用qPCR及WB分別檢測各大鼠心肌組織中CHOP、Bip等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子的mRNA及蛋白表達情況。4.檢測實驗組及對照組大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip7的表達情況:使用qPCR及WB分別檢測各大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip7的mRNA及蛋白表達情況。結(jié)果1.ICPOES結(jié)果顯示,實驗組大鼠心肌組織Zn~(2+)濃度明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),各實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);實驗組大鼠血清Zn~(2+)濃度明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.qPCR和WB結(jié)果顯示,實驗組大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip10的mRNA和蛋白表達水平明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),各實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.qPCR和WB結(jié)果顯示,實驗組大鼠心肌組織中CHOP、Bip等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子的mRNA及蛋白表達水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),各實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.qPCR和WB結(jié)果顯示,實驗組大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip7的mRNA和蛋白表達水平略高于對照組,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論1.HFpEF大鼠血清Zn~(2+)濃度降低,心肌組織Zn~(2+)濃度升高,鋅穩(wěn)態(tài)失衡。2.HFpEF大鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體Zip10的mRNA和蛋白表達下調(diào)。3.HFpEF大鼠心肌組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平增高。4.不同濃度膳食鋅干預對HFpEF大鼠心肌組織中Zn~(2+)濃度、鋅轉(zhuǎn)運體Zip7、Zip10表達情況和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平未見影響。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541.6
【圖文】：

A. 實驗組大鼠 B.對照組大鼠圖 1.20 周齡時，實驗組與對照組大鼠的外觀特征1.2.3 心肌組織鋅離子濃度的測定（1）心肌組織的消解①將 5ml 小燒杯經(jīng)泡酸、清水洗凈、高壓滅菌等處理后備用。②用天平稱取約 50mg 的心肌組織并放入到稱量過重量的 1.5ml EP 管中，放入真空干燥箱中在 60℃ 1.5h 條件下烘干心臟組織，再次稱量重量，將烘干的心臟組織放入到小燒杯中，向燒杯中加入 1ml 生理鹽水，用干凈的剪刀將心肌組織剪碎后加入 2ml 65%的濃硝酸，同時將石墨可控溫電熱板放在通風櫥中并將溫度調(diào)至 120℃，將裝有心肌組織的燒杯放在板面上，加熱約 1h，使硝酸完全揮發(fā)為止。③向加熱好的小燒杯中加入 0.6ml 65%濃硝酸及 2.4ml 的超純水，使硝酸濃度變成 13%。④將小燒杯放入超聲波清洗機中（避免水進入燒杯），使燒杯中的物質(zhì)充

天津醫(yī)科大學碩士學位論文結(jié)果大鼠心肌組織中 Zn2+濃度升高，血清中 Zn2+濃度降大鼠心肌組織中 Zn2+濃度升高CPOES 檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組大鼠心肌組織中 Zn2+濃度134.39±53.09 ug/g，HN 139.92±56.55 ug/g，HH90 122.07±.76±31.22 ug/g VS NN 71.43±28.19 ug/g ），差異有統(tǒng)，各實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。（見圖

** vs.對照組 p<0.01，#.兩者相比 p<0.05圖 3.血清 Zn2+相對濃度鼠心肌組織中鋅轉(zhuǎn)運體 Zip10 表達下調(diào)織中鋅轉(zhuǎn)運體 Zip10 mRNA 表達下調(diào)CR 檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組各組大鼠心肌組織 Zip10對照組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），各實驗組之0.05）。（見圖 4）

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