【摘要】：21世紀(jì)以來(lái),隨著各國(guó)居民的生活水平日益提高,生活壓力增加,生活方式變化,心血管疾病成為了威脅國(guó)民生命健康安全的最主要一類疾病。2011年WHO的研究報(bào)道顯示,全球每年約1730萬(wàn)人死于心血管病,而這種死亡率仍呈逐年遞增的趨勢(shì),而居于致人類死亡的疾病譜首位。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(簡(jiǎn)稱冠心病)是其中最常見(jiàn)的心血管疾病,也是人類健康的最大殺手。動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是冠心病的基本病理特征,是由于長(zhǎng)期眾多危險(xiǎn)因素參與,觸發(fā)、促進(jìn)動(dòng)脈管壁發(fā)生的慢性進(jìn)展性炎癥過(guò)程,從脂質(zhì)沉積,內(nèi)膜增厚,脂紋出現(xiàn)到血管狹窄動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成,需要遷延十幾年到幾十年時(shí)間。目前關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化的形成機(jī)制仍不明確,存在許多假說(shuō),包括脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、血栓形成學(xué)說(shuō)、血管內(nèi)皮損傷學(xué)說(shuō)和炎性反應(yīng)學(xué)說(shuō)。目前比較公認(rèn)的是血管內(nèi)皮損傷學(xué)說(shuō)和炎性反應(yīng)學(xué)說(shuō)。即多種因素的刺激,對(duì)血管內(nèi)皮造成損傷,血管內(nèi)皮發(fā)生功能性及器質(zhì)性的改變,加上血脂代謝紊亂,脂質(zhì)經(jīng)破損的血管內(nèi)皮沉積到血管壁、平滑肌細(xì)胞間,引起平滑肌細(xì)胞的增殖。同時(shí),平滑肌細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)成為泡沫細(xì)胞,血小板也會(huì)聚集、沉積在受損的內(nèi)皮,被暴露的膠原激活,釋放血栓素等活性物質(zhì)。而這些異常的成份具有較強(qiáng)的致炎作用,產(chǎn)生多種炎癥因子,導(dǎo)致斑塊內(nèi)發(fā)生慢性炎癥反應(yīng),使斑塊逐漸增大。以上多種因素的復(fù)雜相互作用,觸發(fā)機(jī)制參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成過(guò)程。動(dòng)脈粥樣硬化是一種進(jìn)展性、不可逆的病理過(guò)程,在兒童期,血管即有脂紋等早期的動(dòng)脈粥樣硬化性改變。而直到中年,合并多種危險(xiǎn)因素后才出現(xiàn)癥狀。因此,近年來(lái),早期發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的改變,進(jìn)而早期預(yù)防、早期治療已成為當(dāng)前研究的一大熱點(diǎn)。目前認(rèn)為內(nèi)皮功能障礙及血管重構(gòu)(彈性減弱、僵硬度增加、內(nèi)膜增生)是早期動(dòng)脈粥樣硬化的最主要的病理特征。同時(shí),血管重構(gòu)又能一定程度上反映內(nèi)皮功能障礙,因此,探討血管重構(gòu)的改變,對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化防治有重大的意義。血管重構(gòu)是在血流動(dòng)力學(xué)及體液因子相互作用下引發(fā)的血管結(jié)構(gòu)的慢性改變,是血管為適應(yīng)體內(nèi)外環(huán)境變化而導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)及功能性的動(dòng)態(tài)改變過(guò)程。它既是動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程的病理變化,又是動(dòng)脈粥樣硬化得以持續(xù)及進(jìn)展的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。血管平滑肌細(xì)胞的遷移,增殖與凋亡,細(xì)胞外基質(zhì)的降解與重新分布是血管重構(gòu)的基本病理變化�；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase MMPS)是一種酶活性依賴鋅離子的蛋白酶超家族,根據(jù)結(jié)構(gòu)及底物特異性,可將其分為膠原酶、膠質(zhì)溶解素、膜結(jié)合型MMPS、膠原酶(MMP-2、MMP-9).膠原酶能降解細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix ECM),在動(dòng)脈粥樣硬化和血管重構(gòu)過(guò)程中都發(fā)揮著重大作用。ECM是血管壁的重要組成部分,它處于不斷合成與分解的動(dòng)態(tài)平衡中。MMPS能降解ECM,使新的ECM不斷合成,修復(fù),從而使膠原過(guò)多沉積,管壁增厚,失去彈性。同時(shí)也能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移,導(dǎo)致內(nèi)膜增厚,發(fā)生心血管重構(gòu)。CD147又稱為基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子,是免疫球蛋白超家族成員之一的一種跨膜糖蛋白,廣泛表達(dá)于包括內(nèi)皮細(xì)胞、造血細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的多種生理細(xì)胞及病理細(xì)胞內(nèi)。親環(huán)素A(Cyclophilin A,cyPA)是一種親環(huán)素蛋白,是免疫抑制劑環(huán)孢素在胞內(nèi)的作用靶點(diǎn),除調(diào)節(jié)免疫功能外,還能參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞的生存與凋亡。CD147是CyPA受體,又是基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑,CyPA與CD147形成的復(fù)合物在巨噬細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的作用下,通過(guò)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)和核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)及其抑制劑(IκB)的信號(hào)途徑,促進(jìn)MMPS的釋放,降解細(xì)胞外基質(zhì),引起心血管的重構(gòu)。同時(shí),CyPA-CD147的結(jié)合,還能通過(guò)激活ERK1/2和AK/STAT信號(hào)途徑,活化平滑肌細(xì)胞,引起平滑肌細(xì)胞增殖,進(jìn)一步導(dǎo)致血管重構(gòu)。目前,國(guó)內(nèi)外關(guān)于CyPA-CD147領(lǐng)域的研究多集中于腫瘤及風(fēng)濕領(lǐng)域,在動(dòng)脈粥樣硬化領(lǐng)域的鮮有研究。而就CyPA-CD147的表達(dá)在動(dòng)脈粥樣硬化血管重構(gòu)中尚未有相關(guān)研究報(bào)到。本研究旨在通過(guò)建立兔動(dòng)脈粥樣硬化模型,測(cè)定CyPA-CD147在模型中的表達(dá),探索模型中的血管重構(gòu)情況,并分析二者的相關(guān)性,進(jìn)而早期發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的改變,為早期預(yù)防、早期治療提供理論依據(jù),從而減少急性心血管事件發(fā)生,降低發(fā)病率、致殘率及致死率。目的1、利用液氮凍傷結(jié)合高脂飲食建立兔動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型,探討兔動(dòng)脈粥樣硬化模型血管重構(gòu)情況。2、HE染色、彈力纖維染色及MASSON染色分析兔血管內(nèi)膜及斑塊形態(tài),測(cè)定CD147、CyPA、MMP-9血清學(xué)指標(biāo)變化,免疫組化分析三項(xiàng)指標(biāo)在血管中表達(dá)特點(diǎn)。測(cè)定CD147、CyPA在血管中的mRNA表達(dá)差異。3、采用病理圖像分析系統(tǒng)分析血管重構(gòu)的相關(guān)指標(biāo)變化,將血清CD147、CyPA的表達(dá)與血管重構(gòu)進(jìn)行相關(guān)回歸分析。方法1、構(gòu)建動(dòng)物模型：按簡(jiǎn)單隨機(jī)方法將32只健康雄性新西蘭白兔分為對(duì)照組、液氮凍傷組、高脂飲食組、模型組,每組8只。對(duì)照組持續(xù)普通飲食,不做任何處理；模型組利用液氮凍傷血管內(nèi)膜結(jié)合高脂飲食的方法建立動(dòng)脈粥樣硬化模型；液氮凍傷組予以液氮凍傷血管內(nèi)膜后持續(xù)普通飲食；高脂飲食組持續(xù)高脂飲食,血管不做任何損傷處理。2、血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定：分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前、高脂飲食第13周(實(shí)驗(yàn)結(jié)束前),采集各組兔外周血,利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定各組CD147、CyPA、MMP-9等水平。3、病理組織觀察：4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于術(shù)后13周處死,每組取造模處或相對(duì)應(yīng)血管的一部分(約4cm),常規(guī)石蠟包埋切片,分別作HE染色、彈力纖維染色、Masson染色,普通光鏡下觀察組織病理學(xué)變化,并利用CyPA、CD147、VCAM11單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)血管CD147mRNA和CyPAmRNA的表達(dá)差異。4、計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)(Image-proplus 6.0)分析血管重構(gòu)參數(shù)血管組織切片進(jìn)行彈力纖維染色后,采用病理圖像分析系統(tǒng)分析頸動(dòng)脈外彈力層圍繞面積(EELA)、內(nèi)彈力層圍繞面積(IELA)、管腔面積(LA)、最小管腔直徑(MLD)、最大內(nèi)膜厚度(MIT)、內(nèi)膜面積(IA)、中膜面積(MA)、管腔狹窄度(LS)。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所得數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。多組樣本總體均數(shù)比較采用One-way ANOVA分析。方差齊時(shí)多組樣本均數(shù)間的多重比較運(yùn)用LSD-t檢驗(yàn),方差不齊的樣本均數(shù)間的多重比較運(yùn)用Dunnett'sT3方式檢驗(yàn)。同組樣本間的前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。認(rèn)為P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、兔總體生長(zhǎng)情況兔總體生長(zhǎng)良好,模型組的1只新西蘭白兔因麻醉過(guò)量死亡,液氮凍傷組的1只死于術(shù)中大出血,其余動(dòng)物全部完成實(shí)驗(yàn),所得30只動(dòng)物數(shù)據(jù)參與分析。2、血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定血清CD147測(cè)定：實(shí)驗(yàn)前,4組兔血清CD147水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在對(duì)照組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CD147水平在第13周無(wú)明顯差異(P0.05)；在模型組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CD147水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在液氮凍傷組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CD147水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在高脂飲食組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CD147水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4組間第13周血清CD147水平相比,有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。血清CyPA測(cè)定：實(shí)驗(yàn)前,4組間兔血清CyPA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在對(duì)照組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CyPA水平在第13周無(wú)明顯差異(P0.05)；在模型組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CyPA水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在液氮凍傷組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CyPA水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)：在高脂飲食組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清CyPA水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；4組間第13周血清CyPA水平相比,有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。血清MMP-9測(cè)定：實(shí)驗(yàn)前,4組間兔血清MMP-9水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在對(duì)照組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清MMP-9水平在第13周無(wú)明顯差異(P0.05)；在模型組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清MMP-9水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在液氮凍傷組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清MMP-9水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在高脂飲食組,與實(shí)驗(yàn)前相比,血清MMP-9水平在第13周明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4組第13周血清MMP-9水平相比,有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。3、免疫組化分析對(duì)照組內(nèi)膜光整,可見(jiàn)散在少量巨噬細(xì)胞分布,未見(jiàn)CyPA、CD147、MMP-9抗體的表達(dá)；中膜可見(jiàn)規(guī)整平滑肌細(xì)胞,未見(jiàn)明顯CyPA、CD147、MMP-9及RAM11抗體表達(dá)。模型組增生內(nèi)膜及斑塊內(nèi)可見(jiàn)CyPA、CD147、MMP-9呈片狀分布表達(dá),且表達(dá)具有同區(qū)域分布的特點(diǎn)。與同一血管同一部位的巨噬細(xì)胞抗體染色對(duì)比顯示,CyPA、CD147、MMP-9表達(dá)多集中于巨噬細(xì)胞聚集部位。液氮凍傷組內(nèi)膜輕度增生,中膜光滑規(guī)整,增生內(nèi)膜可見(jiàn)CyPA、CD147、MMP-9的散在表達(dá)。同時(shí),可見(jiàn)三者表達(dá)區(qū)域相同。高脂飲食組CyPA、CD147、MMP-9在增生內(nèi)膜內(nèi)散在少量表達(dá),內(nèi)膜未增生區(qū)域跟對(duì)照組相似,無(wú)表達(dá)。4、RT-PCR檢測(cè)CD147 mRNA的表達(dá)：在模型組、液氮凍傷組及高脂飲食組較對(duì)照組的表達(dá)明顯升高。4組間CD147mRNA表達(dá)對(duì)比有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。CyPA mRNA的表達(dá)：在模型組、液氮凍傷組及高脂飲食組較對(duì)照組的表達(dá)明顯升高。4組間CyPA mRNA表達(dá)對(duì)比有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。5、血管重構(gòu)指標(biāo)測(cè)定模型組、液氮凍傷組、高脂飲食組較對(duì)照組,內(nèi)膜明顯增厚,管腔明顯縮小,中膜面積明顯增厚,管腔狹窄度明顯增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4組內(nèi)膜面積(IA)相比,有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=22.54,P0.05),且在模型組中IA較另外3組明顯增厚；4組管腔面積(LA)相比,有明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.61,P0.05),且在模型組中LA較另外3組明顯縮��；4組管腔狹窄度(LS)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=458.00,P0.05),且在模型組中LS較單純凍傷及高脂飲食明顯增加。結(jié)果表明,動(dòng)脈粥樣硬化的模型組較液氮凍傷組、高脂飲食組和對(duì)照組,IA、LS明顯增大,LA明顯減小。結(jié)論兔動(dòng)脈粥樣硬化模型血管內(nèi)膜明顯增生增厚,管腔明顯狹窄。CD147、CyPA、MMP-9在兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的血清、斑塊及增生內(nèi)膜的表達(dá)明顯升高。且CD147、CyPA的表達(dá)越高,內(nèi)膜增生及血管狹窄越重,血管重構(gòu)越明顯。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5;R-332
【圖文】：

碩±學(xué)位論文逡逑ＣｙＰＡ表達(dá)與ＭＭＰ－９呈正相關(guān)（尸０．７８，尸＜０．０５）；說(shuō)明血清中ＣＤ１４７、ＣｙＰＡ逡逑的表達(dá)越高，ＭＭＰ－９表達(dá)也越高。見(jiàn)表２－１，圖２－１２逡逑表２－１；血清ＣＤ１４７、ＣｙＰＡ及ＭＭＰ－９表達(dá)水平（；±ｓ）逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－１：邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＣＤ邋１４７，邋ＣｙＰＡ邋ａｎｄ邋ＭＭＰ－９邋ｉｎ邋拍ｎｕｎ（邋ｘ邋±邋Ｓ邋）逡逑對(duì)照組（ｎ＝８）模型}D（ｎ＝７）邐液氮凍傷組（ｎ＝７）高脂飲食組（ｎ＝８）逡逑０邋周邋ＣＤＩ４７邋（ｕｇ／Ｌ）￣６２．１４±４．５１邐６７．２２±５．３１邐６５．６６±７．４９邐６０．９６±６．５２逡逑０邋周邋ＣｙＰＡ邋（ｕｇ／Ｌ）邐０．９８±０．０５邐０．７１±０．０８邐１．０１±０．０４邐０．９１±０．１２逡逑０邋周邋ＭＭＰ－９（ｕｇ／Ｌ）邐０．８３±０．０７邐０．７８功．０８邐０．８９±０．０４邐０．９３±０．０７逡逑１３邋周邋ＣＤ１４７邋（ｕｇ／Ｌ）邋６１．５１±５．４４邋１２０．４狂６．９８＊ＭＶ邐８４．２８±６．０２邋＊Ｖ邐９０．９４±７．Ｉ５＊Ｖ逡逑１３邋周邋ＣｙＰＡ邋（ｕｇ／Ｌ）邐１．０１±０．０８邐２．０２功．１２＊＃ＡＶ邐１．７４±０．１２＊Ｖ邐１．化±０．０７邋＊%藉義希保沖逯苠澹停停校梗ǎ酰紓蹋╁危埃梗

本文編號(hào)：2753883