【摘要】：背景:高血壓是一種常見(jiàn)的心血管疾病,主要是由遺傳,自身生活習(xí)慣和環(huán)境等多種因素異常所誘發(fā)。高血壓的特征為動(dòng)脈血壓升高,發(fā)病初期并無(wú)明顯異常,中期出現(xiàn)動(dòng)脈硬化等病理特征,晚期可引起重要器官過(guò)度損傷誘發(fā)多種并發(fā)癥,嚴(yán)重時(shí)易導(dǎo)致病患者死亡。現(xiàn)代生活節(jié)奏不斷加快,工作壓力驟然升高,心理應(yīng)激加劇,機(jī)體做出的非特異性反應(yīng)稱為應(yīng)激,當(dāng)人類身心長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)所導(dǎo)致的高血壓,稱之為應(yīng)激性高血壓(stress-induced hypertension,SIH)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)在應(yīng)激介導(dǎo)的心血管疾病中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用,應(yīng)激性高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展與交感神經(jīng)活動(dòng)亢進(jìn)關(guān)系密切。延髓頭端腹外側(cè)區(qū)(rostral ventrolateral medulla,RVLM)是調(diào)控心血管活動(dòng)的關(guān)鍵中樞核團(tuán)之一,是重要的整合中樞。高血壓發(fā)生時(shí),RVLM內(nèi)交感興奮性神經(jīng)元過(guò)度興奮導(dǎo)致脊髓中間外側(cè)柱交感節(jié)前神經(jīng)元興奮性增強(qiáng),進(jìn)而參與血壓調(diào)控和壓力反射活動(dòng)。電壓門控鈉離子通道(voltage-gate sodium channels,VGSCs)作為可興奮細(xì)胞的分子特征,在動(dòng)作電位的產(chǎn)生和傳導(dǎo)過(guò)程中起到重要作用。Nav1.6大量分布并表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的郎飛節(jié)和軸突始端,對(duì)于控制神經(jīng)元興奮性方面起著至關(guān)重要的作用。高血壓的中樞調(diào)控方面的研究不乏,但中樞RVLM區(qū)神經(jīng)元VGSCs亞型Nav1.6如何參與SIH調(diào)控方面的研究“匱乏”。故,本課題主要研究延髓頭端腹外側(cè)區(qū)神經(jīng)元鈉離子通道亞型Nav1.6表達(dá)上調(diào)介導(dǎo)下游交感神經(jīng)亢進(jìn),進(jìn)一步調(diào)節(jié)應(yīng)激性高血壓的機(jī)制。目的:本課題在課題組已有研究基礎(chǔ)上,制備應(yīng)激性高血壓大鼠模型,通過(guò)整體、電生理、蛋白質(zhì)印跡、免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法研究:1)在應(yīng)激性高血壓大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6區(qū)域性表達(dá)上調(diào);2)應(yīng)激性高血壓大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6在何種細(xì)胞上高表達(dá);3)在應(yīng)激性高血壓大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6與血壓心率間的關(guān)聯(lián)及調(diào)控血壓心率的機(jī)理。方法:應(yīng)激性高血壓大鼠模型是通過(guò)持續(xù)性噪聲刺激同時(shí)伴隨間歇性足底電擊(electrical foot-shocks)正常成年SD雄性大鼠,連續(xù)刺激15天來(lái)制備。將雄性SD大鼠(230 g)隨機(jī)分為四組:正常對(duì)照組(Control)、應(yīng)激性高血壓大鼠組(SIHR)、應(yīng)激+慢病毒GFP組(Stress+Lv-CRISPR-eGFP)、應(yīng)激+慢病毒gRNA組(Stress+Lv-CRISPR-gRNA)。清醒和麻醉狀態(tài)下分別監(jiān)測(cè)收縮壓(SBP)、心率(HR)和體重(weight);麻醉狀態(tài)下在體記錄腎交感神經(jīng)活動(dòng)(RSNA);蛋白印跡和免疫熒光實(shí)驗(yàn)法監(jiān)測(cè)VGSCs亞型Nav1.6表達(dá)變化。結(jié)果:1)應(yīng)激組大鼠與正常對(duì)照組相比,收縮壓(SBP)和心率(HR)在應(yīng)激第5天出現(xiàn)明顯的上升,在應(yīng)激第10天,收縮壓達(dá)到最高值,體重(weight)增加率在應(yīng)激前6天明顯降低,在第12天后開始高于正常對(duì)照組,應(yīng)激組交感神經(jīng)活動(dòng)(RSNA)較空白對(duì)照組顯著增強(qiáng);2)與空白對(duì)照組相比,大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6蛋白水平在應(yīng)激發(fā)生第10天和第15天顯著增加,并且在第10天達(dá)到頂峰,應(yīng)激第10天大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增多;3)與空白對(duì)照相比,應(yīng)激組大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6與神經(jīng)元蛋白標(biāo)記物NeuN大量共標(biāo),與小膠質(zhì)細(xì)胞蛋白標(biāo)記物(Iba1)和星形膠質(zhì)細(xì)胞蛋白標(biāo)記物(GFAP)不共標(biāo)。另外,應(yīng)激性高血壓大鼠RVLM內(nèi)Nav1.6陽(yáng)性和NeuN陽(yáng)性共標(biāo)率顯著高于鄰近RVLM區(qū)域;4)與正常對(duì)照組相比,應(yīng)激第10天時(shí)大鼠收縮壓達(dá)到最大值,大鼠RVLM內(nèi)神經(jīng)元特異性標(biāo)志物NeuN與Nav1.6共標(biāo)率達(dá)到最大;5)應(yīng)激組大鼠RVLM內(nèi)給予慢病毒沉默Nav1.6表達(dá),較應(yīng)激組顯著改善應(yīng)激性高血壓大鼠心血管功能。結(jié)論:應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠RVLM神經(jīng)元VGSCs亞型Nav1.6表達(dá)上調(diào),腎交感神經(jīng)活動(dòng)顯著增強(qiáng),收縮壓和心率明顯升高,參與應(yīng)激性高血壓病理生理的發(fā)生。通過(guò)慢病毒沉默RVLM區(qū)Nav1.6表達(dá)能夠顯著改善應(yīng)激性高血壓大鼠心血管功能。
【學(xué)位授予單位】：上海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R544.1
【圖文】：

上海大學(xué)碩士學(xué)位論文為止已經(jīng)克隆并鑒定出 VGSCs 的 10 種 α 亞基亞型，Nav1.1-Nav1.9 和 Nax 分別由 SCN1A-SCN11A 編碼(20)。根據(jù)對(duì)河豚毒素敏感性的不同可以將 VGSCs 分為河豚毒素敏感型（TTX-S）和河豚毒素不敏感型（TTX-R），其中Nav1.1-Nav1.4，Nav1.6 和 Nav1.7 為河豚毒素敏感型鈉離子通道，主要表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(21)。

圖 1：Control 組和 SIHR 組的血壓和心率隨時(shí)間變化情況，n=8，數(shù)據(jù)以 Mean±S.E.M 表示，*P<0.05，**P<0.01 vs Control 組。3.2應(yīng)激性高血壓大鼠 RVLM 內(nèi) Nav1.6 的動(dòng)態(tài)表達(dá)3.2.1 Nav1.6 蛋白在各組大鼠 RVLM 內(nèi)的表達(dá)變化造模完成后，采用 Western blot 方法檢測(cè)各組大鼠 RVLM 內(nèi) VGSCs 亞型Nav1.6 蛋白動(dòng)態(tài)表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常對(duì)照組和應(yīng)激組大鼠 RVLM 內(nèi)Nav1.6 蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性動(dòng)態(tài)變化。如圖 2 所示，與正常對(duì)照組大鼠相比，應(yīng)激組大鼠 RVLM 內(nèi) Nav1.6 蛋白在應(yīng)激第 10 天和應(yīng)激第 15 天表達(dá)顯著升高，且在應(yīng)激第 10 天達(dá)到峰值，統(tǒng)計(jì)學(xué)上具顯著性差異（*P<0.05）（圖 2 A, B）。

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本文編號(hào)：2740912