【摘要】：背景:高血壓是一種常見的心血管疾病,主要是由遺傳,自身生活習慣和環(huán)境等多種因素異常所誘發(fā)。高血壓的特征為動脈血壓升高,發(fā)病初期并無明顯異常,中期出現動脈硬化等病理特征,晚期可引起重要器官過度損傷誘發(fā)多種并發(fā)癥,嚴重時易導致病患者死亡�，F代生活節(jié)奏不斷加快,工作壓力驟然升高,心理應激加劇,機體做出的非特異性反應稱為應激,當人類身心長期處于應激狀態(tài)所導致的高血壓,稱之為應激性高血壓(stress-induced hypertension,SIH)。中樞神經系統(tǒng)在應激介導的心血管疾病中發(fā)揮著關鍵性作用,應激性高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展與交感神經活動亢進關系密切。延髓頭端腹外側區(qū)(rostral ventrolateral medulla,RVLM)是調控心血管活動的關鍵中樞核團之一,是重要的整合中樞。高血壓發(fā)生時,RVLM內交感興奮性神經元過度興奮導致脊髓中間外側柱交感節(jié)前神經元興奮性增強,進而參與血壓調控和壓力反射活動。電壓門控鈉離子通道(voltage-gate sodium channels,VGSCs)作為可興奮細胞的分子特征,在動作電位的產生和傳導過程中起到重要作用。Nav1.6大量分布并表達在中樞神經系統(tǒng)神經元的郎飛節(jié)和軸突始端,對于控制神經元興奮性方面起著至關重要的作用。高血壓的中樞調控方面的研究不乏,但中樞RVLM區(qū)神經元VGSCs亞型Nav1.6如何參與SIH調控方面的研究“匱乏”。故,本課題主要研究延髓頭端腹外側區(qū)神經元鈉離子通道亞型Nav1.6表達上調介導下游交感神經亢進,進一步調節(jié)應激性高血壓的機制。目的:本課題在課題組已有研究基礎上,制備應激性高血壓大鼠模型,通過整體、電生理、蛋白質印跡、免疫熒光等實驗方法研究:1)在應激性高血壓大鼠RVLM內Nav1.6區(qū)域性表達上調;2)應激性高血壓大鼠RVLM內Nav1.6在何種細胞上高表達;3)在應激性高血壓大鼠RVLM內Nav1.6與血壓心率間的關聯及調控血壓心率的機理。方法:應激性高血壓大鼠模型是通過持續(xù)性噪聲刺激同時伴隨間歇性足底電擊(electrical foot-shocks)正常成年SD雄性大鼠,連續(xù)刺激15天來制備。將雄性SD大鼠(230 g)隨機分為四組:正常對照組(Control)、應激性高血壓大鼠組(SIHR)、應激+慢病毒GFP組(Stress+Lv-CRISPR-eGFP)、應激+慢病毒gRNA組(Stress+Lv-CRISPR-gRNA)。清醒和麻醉狀態(tài)下分別監(jiān)測收縮壓(SBP)、心率(HR)和體重(weight);麻醉狀態(tài)下在體記錄腎交感神經活動(RSNA);蛋白印跡和免疫熒光實驗法監(jiān)測VGSCs亞型Nav1.6表達變化。結果:1)應激組大鼠與正常對照組相比,收縮壓(SBP)和心率(HR)在應激第5天出現明顯的上升,在應激第10天,收縮壓達到最高值,體重(weight)增加率在應激前6天明顯降低,在第12天后開始高于正常對照組,應激組交感神經活動(RSNA)較空白對照組顯著增強;2)與空白對照組相比,大鼠RVLM內Nav1.6蛋白水平在應激發(fā)生第10天和第15天顯著增加,并且在第10天達到頂峰,應激第10天大鼠RVLM內Nav1.6陽性細胞數顯著增多;3)與空白對照相比,應激組大鼠RVLM內Nav1.6與神經元蛋白標記物NeuN大量共標,與小膠質細胞蛋白標記物(Iba1)和星形膠質細胞蛋白標記物(GFAP)不共標。另外,應激性高血壓大鼠RVLM內Nav1.6陽性和NeuN陽性共標率顯著高于鄰近RVLM區(qū)域;4)與正常對照組相比,應激第10天時大鼠收縮壓達到最大值,大鼠RVLM內神經元特異性標志物NeuN與Nav1.6共標率達到最大;5)應激組大鼠RVLM內給予慢病毒沉默Nav1.6表達,較應激組顯著改善應激性高血壓大鼠心血管功能。結論:應激誘導大鼠RVLM神經元VGSCs亞型Nav1.6表達上調,腎交感神經活動顯著增強,收縮壓和心率明顯升高,參與應激性高血壓病理生理的發(fā)生。通過慢病毒沉默RVLM區(qū)Nav1.6表達能夠顯著改善應激性高血壓大鼠心血管功能。
【學位授予單位】：上海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1
【圖文】：

上海大學碩士學位論文為止已經克隆并鑒定出 VGSCs 的 10 種 α 亞基亞型，Nav1.1-Nav1.9 和 Nax 分別由 SCN1A-SCN11A 編碼(20)。根據對河豚毒素敏感性的不同可以將 VGSCs 分為河豚毒素敏感型（TTX-S）和河豚毒素不敏感型（TTX-R），其中Nav1.1-Nav1.4，Nav1.6 和 Nav1.7 為河豚毒素敏感型鈉離子通道，主要表達在中樞神經系統(tǒng)(21)。

圖 1：Control 組和 SIHR 組的血壓和心率隨時間變化情況，n=8，數據以 Mean±S.E.M 表示，*P<0.05，**P<0.01 vs Control 組。3.2應激性高血壓大鼠 RVLM 內 Nav1.6 的動態(tài)表達3.2.1 Nav1.6 蛋白在各組大鼠 RVLM 內的表達變化造模完成后，采用 Western blot 方法檢測各組大鼠 RVLM 內 VGSCs 亞型Nav1.6 蛋白動態(tài)表達變化。實驗結果顯示：正常對照組和應激組大鼠 RVLM 內Nav1.6 蛋白表達呈時間依賴性動態(tài)變化。如圖 2 所示，與正常對照組大鼠相比，應激組大鼠 RVLM 內 Nav1.6 蛋白在應激第 10 天和應激第 15 天表達顯著升高，且在應激第 10 天達到峰值，統(tǒng)計學上具顯著性差異（*P<0.05）（圖 2 A, B）。

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本文編號：2740912