【摘要】：目的探究大鼠梗死心肌miR-499-5p表達量改變和miR-499-5p在大鼠心梗后心肌細胞凋亡中的作用及相關(guān)機制。方法通過結(jié)扎Sprague Dawley大鼠心臟冠狀動脈左前降支建立心肌梗死模型,分別檢測大鼠左前降支冠脈結(jié)扎前、結(jié)扎1h、6h、48h后梗死心肌和非梗死心肌miR-499-5p表達;采用心肌內(nèi)注射miR-499-5p mimics的方法上調(diào)大鼠心肌組織中的miR-499-5p表達水平;大鼠被隨機分為假手術(shù)組(Sham)、心梗組(AMI)、miR-499-5p類似物干預(yù)組(AMI+miR-499-5p mimics)、陰性對照組(AMI+scramble-NC)。TTC染色法測心肌梗死面積;原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL)檢測心肌細胞凋亡;qRT-PCR檢測心肌miR-499-5p、Sox6mRNA表達;Western blot分析組織蛋白Sox6、Bax、Bcl-xl表達;超聲心動圖評估心功能;熒光素酶報告實驗檢測miR-499-5p是否靶向調(diào)控SOX6 3'非編碼區(qū)。結(jié)果1.qRT-PCR:梗死心肌miR-499-5p表達較非梗死心肌降低。與AMI+scramble-NC組比較,AMI+miR-499-5p mimics組mi R-499-5p表達增加(1.068±0.647vs8.292±1.079,P0.01);AMI組Sox6 m RNA較Sham組增高,而AMI+miR-499-5p mimics組Sox6 mRNA表達較AMI+scramble-NC、AMI組降低;2.TTC染色法提示:與AMI+scramble-NC組比較,AMI+miR-499-5p mimics組心肌梗死面積減小(0.658±0.113vs0.381±0.121,P=0.02);3.TUNEL染色提示:與Sham組比較,AMI組心肌細胞凋亡率(%)增高(60.435±6.004),與AMI+scramble-NC、AMI組比較,AMI+miR-499-5p mimics組心肌細胞凋亡率降低(35.643±3.923);4.Western blot檢測結(jié)果:與Sham組比較,AMI組Sox6和Bax蛋白表達增高,Bcl-xl蛋白表達降低;與AMI+scramble-NC、AMI組比較,AMI+miR-499-5p mimics組Sox6和Bax蛋白表達降低,Bcl-xl蛋白表達增加;5.心臟彩超結(jié)果:與Sham組比較,AMI組EF值(%)降低(29.230±4.379)、FS值(%)降低(17.440±3.595)(P均0.05);與AMI+scramble-NC、AMI組比較,AMI+miR-499-5p mimics組EF增加(58.200±8.925),FS值增加(30.310±3.431)(P均0.05)6.熒光素酶報告實驗:miR-499-5p特異性調(diào)控Sox6 3'末端非編碼序列。結(jié)論1.大鼠梗死心肌miR-499-5p表達量下降2.miR-499-5p抑制心梗后心肌細胞凋亡并改善心功能,可能通過靶向抑制Sox6,進一步降低促凋亡蛋白Bax表達并增加抗凋亡蛋白Bcl-xl表達來實現(xiàn)
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R542.22
【圖文】：

圖 1 急性心肌梗死模型的制作2.2.3 大鼠心肌內(nèi)注射短核苷酸序列和實驗分組挑破大鼠心包暴露心臟前壁，按上述方法有效結(jié)扎 LAD 后，參照商家說明書和參考文獻[34]，即用胰島素筆將 miR-499-5p mimics（1.4ug/100g）或Scramble-NC(1.4ug/100g)與 Lipofectamine2000 混合液共 20ul（容積比 1:1）注射到結(jié)扎部位以下左室前壁心肌梗死邊緣區(qū)。擠出胸腔內(nèi)空氣后逐層縫合關(guān)胸。手 術(shù) 大 鼠 隨 機 分 成 4 組 ： Sham 組 ， AMI 組 ， AMI+scramble-NC 組 ，AMI+miR-499-5p mimics 組，每組 20 只。2.2.4 心肌組織取材、病理切片制作2.2.4.1 心臟組織取材10%的水合氯醛腹腔注射重新麻醉大鼠并采用頸椎脫臼法處死，剪取心臟，預(yù)冷 PBS 緩沖液反復沖洗心臟直到無殘血后置于 4%的多聚甲醛固定 24 小時以

圖 2：LAD 結(jié)扎前、后心電圖3.2 梗死心肌 miR-499-5p 表達降低本研究在分組設(shè)計之前比較了大鼠梗死心肌區(qū)和非梗死心肌區(qū) miR-499-5p表達水平，即在 LAD 結(jié)扎 1h、6h、48h 時，大鼠心肌組織梗死區(qū)域 miR-499-5p的表達量較非梗死區(qū)域均下降（圖 3），p 值均<0.05。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 耿傳良;別自東;;微小RNA與心肌梗死后心臟重塑研究進展[J];山西醫(yī)藥雜志;2015年03期

2 王亞靜;吳新華;;心肌梗死后心力衰竭發(fā)生機制的研究進展[J];疑難病雜志;2012年09期

本文編號：2740039