【摘要】：隨著近年來生活方式的改善,靜脈血栓(Venous thrombosis VT)的發(fā)病狀況越來越普遍,給個人健康和家庭經(jīng)濟帶來負擔。隨著干細胞療法的興起,越來越多的研究開始關注內(nèi)皮祖細胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)在血栓再通方面發(fā)揮的作用及其潛在臨床應用價值。EPCs是一種存在于骨髓中的多能祖細胞,在血栓病理條件下被募集到VT病灶位點,通過修復損傷的血管發(fā)揮溶解血栓的作用。隨著對EPCs回輸療法研究的深入,越來越多的研究開始關注在EPCs聯(lián)合治療策略的探索。纖溶酶原激活物抑制劑1(Plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)是纖溶系統(tǒng)中纖溶酶驅(qū)動蛋白水解的主要負調(diào)控因子,在纖維蛋白溶解過程中通過抑制組織型纖溶酶原激活蛋白和尿激酶纖溶酶原激活蛋白的作用抑制纖溶酶原向纖溶酶的激活,是潛在的VT治療的靶點。目前,PAI-1在EPCs介導的血栓再通過程中所扮演的角色尚沒有完全闡釋清楚。為了探討靶向抑制PAI-1對EPCs介導靜脈血栓再通作用的影響及其機制,我們在大鼠下腔靜脈狹窄法VT模型中,利用慢病毒感染體系對回輸?shù)腅PCs進行PAI-1抑制,并通過4,5-二甲基噻唑-2-基-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)實驗、傷口愈合實驗以及基質(zhì)膠(matrigel)EPCs管腔形成實驗體外檢測抑制PAI-1對EPCs增殖、遷移和管腔形成能力的影響。同時,我們還通過免疫組化實驗和熒光標記EPCs體內(nèi)追蹤實驗檢測PAI-1對EPCs回輸VT緩解血栓能力的影響。另外,我們還通過RT-qPCR和Western blot實驗,探討靶向抑制PAI-1影響EPCs回輸VT緩解的分子機制。首先,我們通過密度梯度離心和EPCs誘導培養(yǎng)基(EGM-2MV)培養(yǎng)獲得有表型和功能的EPCs;并利用293T細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染慢病毒包裝體系獲得PAI-1-siRNA和NC-siRNA慢病毒。其次,MTT實驗結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染24小時后,EPCs的增殖能力增強。而且,傷口愈合實驗結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染后,EPCs的遷移能力增強。Martigel實驗結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染后,EPCs的管腔形成能力增強。另外,EPCs回輸對血栓部位EPCs檢測實驗的結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能促進EPCs在VT位點的歸巢(homing)。血栓病灶的免疫組化實驗結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能促進EPCs介導的血栓再通。同時,血栓病灶新血管形成情況分析的結果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能增加EPCs回輸導致的血栓部位微血管形成數(shù)量增加。最后,RT-qPCR和Western blot實驗結果表明,回輸PAI-1-siRNA慢病毒感染的EPCs能促進血栓病灶組織中血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的轉(zhuǎn)錄水平表達以及蛋白水平表達。通過以上研究我們發(fā)現(xiàn),靶向抑制PAI-1能促進EPCs的增殖;靶向抑制PAI-1能增強EPC的遷移和歸巢能力;靶向抑制PAI-1能增強EPCs體外和體內(nèi)的管腔形成能力;靶向抑制PAI-1的EPCs回輸能增加血栓橫截面的毛細血管數(shù)量;靶向抑制PAI-1的EPCs回輸能促進血栓病灶部位VEGF的表達。本研究對于深入了解PAI-1在EPCs介導的VT再通反應中發(fā)揮的作用及機制具有重要意義。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R543
【圖文】：

圖 1.1 VT 形成過程中的凝血級聯(lián)反應，引自 Bruce Furie[29]循環(huán)中的許多血細胞也與 VT 的形成有關（圖 1.2）。血小板能夠促進凝血的增加、纖維蛋白血塊的形成和被中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophilextracellultraps，NETs）捕獲[33]。在人和小鼠的 VT 模型下，血小板通過招募多種固有免

圖 1.2 VT 形成過程中各種血細胞的作用，引自 Roger J. S. Preston[55]1.1.1 血流速度異常改變與 VT血流速度的過緩或過急都會引發(fā) VT。一項研究檢測了 76 名偏癱病人雙腿

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