【摘要】：隨著近年來(lái)生活方式的改善,靜脈血栓(Venous thrombosis VT)的發(fā)病狀況越來(lái)越普遍,給個(gè)人健康和家庭經(jīng)濟(jì)帶來(lái)負(fù)擔(dān)。隨著干細(xì)胞療法的興起,越來(lái)越多的研究開始關(guān)注內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)在血栓再通方面發(fā)揮的作用及其潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。EPCs是一種存在于骨髓中的多能祖細(xì)胞,在血栓病理?xiàng)l件下被募集到VT病灶位點(diǎn),通過(guò)修復(fù)損傷的血管發(fā)揮溶解血栓的作用。隨著對(duì)EPCs回輸療法研究的深入,越來(lái)越多的研究開始關(guān)注在EPCs聯(lián)合治療策略的探索。纖溶酶原激活物抑制劑1(Plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)是纖溶系統(tǒng)中纖溶酶驅(qū)動(dòng)蛋白水解的主要負(fù)調(diào)控因子,在纖維蛋白溶解過(guò)程中通過(guò)抑制組織型纖溶酶原激活蛋白和尿激酶纖溶酶原激活蛋白的作用抑制纖溶酶原向纖溶酶的激活,是潛在的VT治療的靶點(diǎn)。目前,PAI-1在EPCs介導(dǎo)的血栓再通過(guò)程中所扮演的角色尚沒(méi)有完全闡釋清楚。為了探討靶向抑制PAI-1對(duì)EPCs介導(dǎo)靜脈血栓再通作用的影響及其機(jī)制,我們?cè)诖笫笙虑混o脈狹窄法VT模型中,利用慢病毒感染體系對(duì)回輸?shù)腅PCs進(jìn)行PAI-1抑制,并通過(guò)4,5-二甲基噻唑-2-基-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)實(shí)驗(yàn)、傷口愈合實(shí)驗(yàn)以及基質(zhì)膠(matrigel)EPCs管腔形成實(shí)驗(yàn)體外檢測(cè)抑制PAI-1對(duì)EPCs增殖、遷移和管腔形成能力的影響。同時(shí),我們還通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)和熒光標(biāo)記EPCs體內(nèi)追蹤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PAI-1對(duì)EPCs回輸VT緩解血栓能力的影響。另外,我們還通過(guò)RT-qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn),探討靶向抑制PAI-1影響EPCs回輸VT緩解的分子機(jī)制。首先,我們通過(guò)密度梯度離心和EPCs誘導(dǎo)培養(yǎng)基(EGM-2MV)培養(yǎng)獲得有表型和功能的EPCs;并利用293T細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染慢病毒包裝體系獲得PAI-1-siRNA和NC-siRNA慢病毒。其次,MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染24小時(shí)后,EPCs的增殖能力增強(qiáng)。而且,傷口愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染后,EPCs的遷移能力增強(qiáng)。Martigel實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染后,EPCs的管腔形成能力增強(qiáng)。另外,EPCs回輸對(duì)血栓部位EPCs檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能促進(jìn)EPCs在VT位點(diǎn)的歸巢(homing)。血栓病灶的免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能促進(jìn)EPCs介導(dǎo)的血栓再通。同時(shí),血栓病灶新血管形成情況分析的結(jié)果表明,PAI-1-siRNA慢病毒感染能增加EPCs回輸導(dǎo)致的血栓部位微血管形成數(shù)量增加。最后,RT-qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,回輸PAI-1-siRNA慢病毒感染的EPCs能促進(jìn)血栓病灶組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)以及蛋白水平表達(dá)。通過(guò)以上研究我們發(fā)現(xiàn),靶向抑制PAI-1能促進(jìn)EPCs的增殖;靶向抑制PAI-1能增強(qiáng)EPC的遷移和歸巢能力;靶向抑制PAI-1能增強(qiáng)EPCs體外和體內(nèi)的管腔形成能力;靶向抑制PAI-1的EPCs回輸能增加血栓橫截面的毛細(xì)血管數(shù)量;靶向抑制PAI-1的EPCs回輸能促進(jìn)血栓病灶部位VEGF的表達(dá)。本研究對(duì)于深入了解PAI-1在EPCs介導(dǎo)的VT再通反應(yīng)中發(fā)揮的作用及機(jī)制具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R543
【圖文】：

圖 1.1 VT 形成過(guò)程中的凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引自 Bruce Furie[29]循環(huán)中的許多血細(xì)胞也與 VT 的形成有關(guān)（圖 1.2）。血小板能夠促進(jìn)凝血的增加、纖維蛋白血塊的形成和被中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophilextracellultraps，NETs）捕獲[33]。在人和小鼠的 VT 模型下，血小板通過(guò)招募多種固有免

圖 1.2 VT 形成過(guò)程中各種血細(xì)胞的作用，引自 Roger J. S. Preston[55]1.1.1 血流速度異常改變與 VT血流速度的過(guò)緩或過(guò)急都會(huì)引發(fā) VT。一項(xiàng)研究檢測(cè)了 76 名偏癱病人雙腿

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本文編號(hào)：2736399