【摘要】：心血管疾病是威脅人類健康的“頭號殺手”,急性心肌梗塞(AMI)是主要的心血管疾病。AMI發(fā)病突然,急性期死亡率高,約為30%,在AMI的常用診斷方式中,對其生化標(biāo)志物的檢測異常重要。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)具有高度的心肌特異性,因而被視為診斷AMI的“金標(biāo)準(zhǔn)”,cTnI的靈敏準(zhǔn)確檢測對于AMI疾病的早期診斷治療具有重大現(xiàn)實意義。同時,肌酸激酶(CK-MB)是心肌酶譜中具有較高心肌特異性的酶,肌紅蛋白(Myo)由于其分子量較小,在AMI發(fā)病初期,血液中Myo的濃度迅速增加,因而其對于AMI的診斷具有很高的靈敏度。將血清中cTnI、CK-MB和Myo的檢測集成于同一芯片,實現(xiàn)三種心肌疾病血清學(xué)標(biāo)志物的同時檢測,可為快速、靈敏、準(zhǔn)確AMI的診斷與治療提供依據(jù)和保障。基于此,本論文構(gòu)建了基于大豆過氧化物酶(SBP)催化魯米諾(luminol)-雙氧水(H_2O_2)體系檢測血清中AMI生化標(biāo)志物的方法,主要包括以下兩部分工作:(1)基于聚乙烯亞胺(PEI)良好的導(dǎo)電性、生物成膜性、以及具有還原性等特性制備了聚乙烯亞胺功能化的還原氧化石墨烯(PEI-RGO),并通過酰胺化反應(yīng)在其表面固定捕獲抗體(Ab_1),利用抗原抗體間的特異性識別作用將cTnI抗原(Ag)和大豆過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體(SBP-Ab_2)依次固定以形成夾心免疫復(fù)合物。在過氧化氫(H_2O_2)的存在下,利用SBP催化氧化luminol產(chǎn)生的電化學(xué)發(fā)光信號實現(xiàn)對cTnI的檢測。檢測的線性范圍為5-30000 pg/mL,檢測限達(dá)到3.3 pg/mL,構(gòu)建的免疫傳感器對cTnI的檢測具有良好的選擇性和重現(xiàn)性,同時,用于實際血漿樣品的檢測時,顯示了較好的準(zhǔn)確性,這為cTnI的檢測提供了選擇。(2)構(gòu)建了一種生物免疫芯片實現(xiàn)對cTnI、CK-MB、Myo三種生化標(biāo)志物的同時檢測。將三種待測抗原對應(yīng)的捕獲抗體固定于硝酸纖維素膜表面,之后依次固定待測抗原和三種對應(yīng)的檢測抗體Ab_2-SiO_2-SBP形成雙抗體夾心免疫結(jié)構(gòu)。在增強劑的存在下,SBP催化luminol-H_2O_2產(chǎn)生很強的化學(xué)發(fā)光信號,采集對應(yīng)位置的發(fā)光信號值從而對三種標(biāo)志物進(jìn)行同時檢測。實驗結(jié)果表明,免疫傳感芯片對cTnI的線性檢測范圍為0.02-80 ng/mL(檢測限為0.006 ng/mL),CK-MB的線性檢測范圍為0.2-120 ng/mL(檢測限為0.067 ng/mL),Myo的線性檢測范圍為0.3-480 ng/mL(檢測限為0.1ng/mL)。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R542.2;O657.3
【圖文】：

AMI發(fā)生后，cTnI釋放動力學(xué)曲線

圖 1-10 SBP（A）和 HRP（B）的三維結(jié)構(gòu)圖[58]辣根過氧化物酶相比，SBP 具有如下優(yōu)勢：一、SBP 來源于廣泛的大豆產(chǎn)種皮經(jīng)過普通的處理之后即可得到具有高效催化性能的大豆過氧化物酶，了精細(xì)純化蛋白的費用[59]。二、相比于 HRP，陰離子的 SBP 具有更好的

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 唐萍;生化指標(biāo)檢測在急性心肌梗死診斷中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2004年16期

本文編號：2735321