【摘要】：背景和目的肺動脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺循環(huán)阻力進行性升高、肺動脈重構(gòu)為特征,最終導(dǎo)致右心功能衰竭和死亡的一種致命性疾病。肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)異常增殖和遷移是肺動脈重構(gòu)的主要機理;肺動脈高壓研究的熱點和難點就是抑制PASMC異常增殖,促進其凋亡,從而預(yù)防和逆轉(zhuǎn)肺血管重構(gòu)。血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是介導(dǎo)PASMCs異常增殖的重要機制。解整合素樣金屬蛋白酶17(A Disintergrin And Metallo proteinase 17,ADAM17),又名腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶,具有調(diào)控細胞相互作用(如細胞粘附和聚集)以及重要的細胞因子、細胞因子受體和其他靶標的水解活化。研究已揭示ADAM17的促壓力超負荷介導(dǎo)的血管重構(gòu)效應(yīng),但目前尚未闡明其在PASMC增殖、肺動脈重構(gòu)中的作用。研究表明其機制是通過兩個主要ADAM17依賴效應(yīng):MAPK/ERK1/2激活和增強細胞糖酵解,課題組前期研究還顯示,PDGF可促進大鼠肺動脈平滑肌細胞中Akt/m TOR信號通路的激活。但目前尚未揭示ADAM17在肺動脈平滑肌細胞增殖、肺動脈重構(gòu)中的作用。我們推測ADAM17可能參與PDGF誘導(dǎo)的PASMC增殖,促進肺動脈重構(gòu)。本研究擬闡明ADAM17在PDGF介導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細胞增殖中的作用并探討其下游機理。方法(1)以人肺動脈平滑肌細胞為研究對象,使用免疫細胞染色法對平滑肌α-肌動蛋白(α-actin)進行鑒定。(2)CCK8測定PASMCs增殖率:用不同濃度(0、5、10、15 ng/m L)PDGF處理PASMCs不同時間(0、6、12、24 h)后,采用Western blot檢測增殖細胞核抗原(PCNA)蛋白水平評估細胞增殖。(3)采用Western blot檢測ADAM17、ADAM33表達水平以及Akt和ERK1/2的磷酸化水平。(4)ADAM17抑制劑TAPI-1對PDGF誘導(dǎo)的細胞增殖過程中Akt和ERK1/2信號通路的影響。結(jié)果:(1)形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)染色法鑒定表明:培養(yǎng)的細胞為PASMCs。(2)PASMCs的增殖率、PCNA蛋白表達量隨PDGF處理濃度增加而增加(P0.05);PASMCs的增殖率、PCNA蛋白表達量隨PDGF處理時間增加而增加(P0.05)。(3)ADAM17蛋白表達量隨PDGF處理濃度增加而增加,在10ng/ml有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),在15ng/ml濃度達到峰值(P0.001),ERK1/2和Akt的磷酸化水平在10ng/ml達到峰值;ADAM17蛋白表達量隨PDGF處理時間增加而增加,在24小時達到峰值(P0.05);ERK1/2和Akt的磷酸化水平隨PDGF處理時間增加而增加,在6小時達到峰值(P0.05)。ADAM33表達水平無明顯變化(P0.05)。(4)同PDGF組比較,用ADAM17抑制劑TAPI-1預(yù)處理的組顯著抑制細胞增殖,并且明顯降低ERK1/2的磷酸化水平(P0.001),但對Akt的磷酸化水平?jīng)]有顯著影響(P0.05)。結(jié)論1.ADAM17可能在PDGF刺激的人肺動脈血管平滑肌細胞增殖中發(fā)揮重要作用。2.其機制其可能與ERK1/2信號通路有關(guān),與Akt信號通路關(guān)系不明顯。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1
【圖文】：

酶 1( MT1-MMP) 致使腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力顯著增強。當應(yīng)用 PI3K/ Akt途徑靶向小干擾 RNA 可顯著抑制卵巢癌細胞的增殖、遷移及侵襲[28]。最近的一項研究也報道了 PI3K / Akt 在胃癌中的重要作用，當將小 RNA-196b( miR-196b)轉(zhuǎn)染胃癌細胞后，細胞 PI3K/PKB 蛋白水平和 G0/G1 期比值可被上調(diào)，同時細胞的增殖、克隆形成及遷移能力也明顯增強[29]。綜上所述，本研究擬以人肺動脈平滑肌細胞為研究對象，闡明 ADAM17 在PDGF 介導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細胞增殖中的作用以及 ERK1/2 和 Akt 信號通路調(diào)控 ADAM17 介導(dǎo)的促增殖效應(yīng)，并探討其下游機理，為將 ADAM17 作為肺動脈高壓的潛在治療靶點提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李玉潔;馬科;張海娟;王海燕;;天麻鉤藤飲對視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用及其機制[J];中華實驗眼科雜志;2018年02期

2 盧尚卓;;淺談用天麻鉤藤飲治療肝陽上亢型高血壓的研究進展[J];當代醫(yī)藥論叢;2015年24期

3 張敏敏;趙恒強;周思多;王岱杰;王曉;劉代成;耿巖玲;牟玉柱;;牛膝中齊墩果酸和β-蛻皮甾酮的HPLC法含量測定及指紋圖譜研究[J];山東科學(xué);2015年05期

4 郭茜;陳永華;鄧穎;楊娟;王小星;;黃芪聯(lián)合川芎嗪加中藥熏洗治療糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)療效觀察[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2015年09期

5 李紹平;吳定濤;趙靜;;糖譜及其在中藥多糖質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J];中國中藥雜志;2015年17期

6 徐邦杰;符德玉;周訓(xùn)杰;桂明泰;姚磊;鄧中龍;金露;王世紅;戴健;衛(wèi)洪昌;;活血潛陽方對高血壓血瘀陽亢痰濁型患者胰島素抵抗及頸動脈斑塊的干預(yù)作用[J];上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2015年04期

7 季鋒;汪忠鎬;韓新巍;李治仝;王利;陳建華;白林鋒;崔強;高翔;張成超;;腹腔鏡胃底折疊術(shù)治療胃食管反流相關(guān)性高血壓病臨床研究[J];臨床誤診誤治;2015年07期

8 蔣榮華;候小利;王碩;周小雷;龔小妹;繆劍華;;甜茶多酚對自發(fā)性高血壓大鼠的影響[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2015年07期

9 李向陽;高潔;張留記;張格艷;;RP-HPLC法測定懷牛膝中β-蛻皮甾酮和牛膝皂苷II的含量[J];中醫(yī)研究;2015年06期

10 王同興;程肖蕊;周文霞;張永祥;曾常青;;基于網(wǎng)絡(luò)分析的天麻鉤藤飲防治高血壓的關(guān)鍵靶標挖掘[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報;2015年03期

本文編號：2733054