【摘要】：背景和目的肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺循環(huán)阻力進(jìn)行性升高、肺動(dòng)脈重構(gòu)為特征,最終導(dǎo)致右心功能衰竭和死亡的一種致命性疾病。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)異常增殖和遷移是肺動(dòng)脈重構(gòu)的主要機(jī)理;肺動(dòng)脈高壓研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)就是抑制PASMC異常增殖,促進(jìn)其凋亡,從而預(yù)防和逆轉(zhuǎn)肺血管重構(gòu)。血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是介導(dǎo)PASMCs異常增殖的重要機(jī)制。解整合素樣金屬蛋白酶17(A Disintergrin And Metallo proteinase 17,ADAM17),又名腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶,具有調(diào)控細(xì)胞相互作用(如細(xì)胞粘附和聚集)以及重要的細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體和其他靶標(biāo)的水解活化。研究已揭示ADAM17的促壓力超負(fù)荷介導(dǎo)的血管重構(gòu)效應(yīng),但目前尚未闡明其在PASMC增殖、肺動(dòng)脈重構(gòu)中的作用。研究表明其機(jī)制是通過兩個(gè)主要ADAM17依賴效應(yīng):MAPK/ERK1/2激活和增強(qiáng)細(xì)胞糖酵解,課題組前期研究還顯示,PDGF可促進(jìn)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中Akt/m TOR信號(hào)通路的激活。但目前尚未揭示ADAM17在肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、肺動(dòng)脈重構(gòu)中的作用。我們推測(cè)ADAM17可能參與PDGF誘導(dǎo)的PASMC增殖,促進(jìn)肺動(dòng)脈重構(gòu)。本研究擬闡明ADAM17在PDGF介導(dǎo)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用并探討其下游機(jī)理。方法(1)以人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為研究對(duì)象,使用免疫細(xì)胞染色法對(duì)平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(α-actin)進(jìn)行鑒定。(2)CCK8測(cè)定PASMCs增殖率:用不同濃度(0、5、10、15 ng/m L)PDGF處理PASMCs不同時(shí)間(0、6、12、24 h)后,采用Western blot檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白水平評(píng)估細(xì)胞增殖。(3)采用Western blot檢測(cè)ADAM17、ADAM33表達(dá)水平以及Akt和ERK1/2的磷酸化水平。(4)ADAM17抑制劑TAPI-1對(duì)PDGF誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖過程中Akt和ERK1/2信號(hào)通路的影響。結(jié)果:(1)形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)染色法鑒定表明:培養(yǎng)的細(xì)胞為PASMCs。(2)PASMCs的增殖率、PCNA蛋白表達(dá)量隨PDGF處理濃度增加而增加(P0.05);PASMCs的增殖率、PCNA蛋白表達(dá)量隨PDGF處理時(shí)間增加而增加(P0.05)。(3)ADAM17蛋白表達(dá)量隨PDGF處理濃度增加而增加,在10ng/ml有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在15ng/ml濃度達(dá)到峰值(P0.001),ERK1/2和Akt的磷酸化水平在10ng/ml達(dá)到峰值;ADAM17蛋白表達(dá)量隨PDGF處理時(shí)間增加而增加,在24小時(shí)達(dá)到峰值(P0.05);ERK1/2和Akt的磷酸化水平隨PDGF處理時(shí)間增加而增加,在6小時(shí)達(dá)到峰值(P0.05)。ADAM33表達(dá)水平無明顯變化(P0.05)。(4)同PDGF組比較,用ADAM17抑制劑TAPI-1預(yù)處理的組顯著抑制細(xì)胞增殖,并且明顯降低ERK1/2的磷酸化水平(P0.001),但對(duì)Akt的磷酸化水平?jīng)]有顯著影響(P0.05)。結(jié)論1.ADAM17可能在PDGF刺激的人肺動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用。2.其機(jī)制其可能與ERK1/2信號(hào)通路有關(guān),與Akt信號(hào)通路關(guān)系不明顯。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R544.1
【圖文】：

酶 1( MT1-MMP) 致使腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)。當(dāng)應(yīng)用 PI3K/ Akt途徑靶向小干擾 RNA 可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲[28]。最近的一項(xiàng)研究也報(bào)道了 PI3K / Akt 在胃癌中的重要作用，當(dāng)將小 RNA-196b( miR-196b)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后，細(xì)胞 PI3K/PKB 蛋白水平和 G0/G1 期比值可被上調(diào)，同時(shí)細(xì)胞的增殖、克隆形成及遷移能力也明顯增強(qiáng)[29]。綜上所述，本研究擬以人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為研究對(duì)象，闡明 ADAM17 在PDGF 介導(dǎo)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用以及 ERK1/2 和 Akt 信號(hào)通路調(diào)控 ADAM17 介導(dǎo)的促增殖效應(yīng)，并探討其下游機(jī)理，為將 ADAM17 作為肺動(dòng)脈高壓的潛在治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2733054