【摘要】：第一部分硫化氫改善同型半胱氨酸誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮舒張功能障礙目的:同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種具有細(xì)胞毒性的含硫氨基酸,可誘導(dǎo)內(nèi)皮功能失調(diào),其機(jī)制與激活NOD-like receptor protein 3(NLRP3)炎性小體,促進(jìn)炎癥反應(yīng)有關(guān)。硫化氫(hydrogen sulfide,H_2S)作為繼一氧化氮(nitric oxide,NO)和一氧化碳(carbon monoxide,CO)之后的第三類氣體信號(hào)分子,具有抗炎抗氧化等心血管保護(hù)作用。本部分的研究應(yīng)用Hcy孵育的大鼠胸主動(dòng)脈,探討外源性給予H_2S是否可改善Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能失調(diào),其機(jī)制是否與抑制NLRP3炎性小體激活有關(guān)。方法:1.實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)選取8周齡雄性Wistar大鼠,體重280±10g,取大鼠胸主動(dòng)脈,隨機(jī)分為8組:對(duì)照(Control)組,Hcy(50μmol/L)組,Hcy(50μmol/L)+NaHS(50μmol/L)組,Hcy(50μmol/L)+MCC950(NLRP3抑制劑,1μmol/L)組,Hcy(50μmol/L)+VX765(caspase-1抑制劑,10μmol/L)組,NaHS(50μmol/L)組,MCC950(1μmol/L)組,VX765(10μmol/L)組。2.無菌分離大鼠胸主動(dòng)脈,二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育24h,行血管張力測(cè)定,檢測(cè)內(nèi)皮依賴性血管舒張功能和非內(nèi)皮依賴性血管舒張功能。3.Western blot檢測(cè)大鼠胸主動(dòng)脈NLRP3、caspase-1及IL-1β蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.Hcy組胸主動(dòng)脈乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張較Control組明顯減小,外源性給予MCC950、VX765及H_2S的供體NaHS后,可顯著改善ACh介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性血管舒張。硝普納(sodium nitroprusside,SNP)介導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性血管舒張各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.Western blot結(jié)果顯示,NLRP3、caspase-1、IL-1β的蛋白表達(dá)在Hcy組明顯下調(diào),NaHS外源性給予可上調(diào)上述炎癥通路蛋白的表達(dá)。結(jié)論:外源性給予H_2S可改善Hcy誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性血管舒張受損,其機(jī)制可能與抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β炎癥信號(hào)通路有關(guān)。第二部分硫化氫通過抑制TXNIP改善Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷目的:硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)是一種多功能的誘導(dǎo)蛋白,參與多種生物學(xué)過程的調(diào)節(jié)。研究表明,TXNIP可激活NLRP3炎性小體,促進(jìn)caspase-1及IL-1β等炎性因子的產(chǎn)生。TXNIP是否參與了Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷尚未見報(bào)道。本部分研究應(yīng)用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),體外孵育Hcy,探討外源性給予H_2S是否可通過抑制TXNIP-NLRP3信號(hào)通路,改善Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。方法:1.實(shí)驗(yàn)分組HUVECs隨機(jī)分為6組分別為:Control組,Hcy(50μmol/L)組,Hcy(50μmol/L)+NaHS(50μmol/L)組,NaHS(50μmol/L)組,Hcy(50μmol/L)+Verapamil(TXNIP抑制劑,50μmol/L),Verapamil組(50μmol/L)。2.應(yīng)用CCK-8法測(cè)定HUVECs的活性。3.Western blot測(cè)定HUVECs中TXNIP、NLRP3、caspase-1及IL-1β的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.Hcy可降低HUVECs的活性,外源性給予H_2S可改善受損細(xì)胞的活性。2.HUVECs體外孵育Hcy可顯著上調(diào)TXNIP、NLRP3、caspase-1及IL-1β蛋白的表達(dá)。給予Verapamil阻斷TXNIP后,TXNIP和NLRP3在HUVECs中的表達(dá)下調(diào)。外源性給予NaHS可下調(diào)TXNIP及NLRP3/caspase-1/IL-1β炎癥通路蛋白的表達(dá)。結(jié)論:Hcy可通過TXNIP-NLRP3途徑損傷HUVECs。H_2S可抑制TXNIP,阻斷NLRP3/caspase-1/IL-1β炎癥通路,保護(hù)Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R589;R54
【圖文】：

18圖 1 Hcy 損傷大鼠 ACh 介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性的血管舒張，NLRP3 抑制劑MCC950和caspase-1抑制劑VX765可改善Hcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮舒張功能障礙Fig.1 Hcy abolishes ACh-induced endothelium-dependent relaxation in ratthoracic aorta (a), which are restored by MCC950 (c) or VX765 (eincubation.The SNP-induced endothelium-independent relaxation shows ndifference among these groups (b,d,f). Data is shown as means±SEM.*P<0.0vs. Control,#P<0.05 vs. Hcy. n=6 for each group

圖 2 H2S 可改善 Hcy 誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性血管舒張受損Fig.2 Supplementation with H2S donor NaHS significantly improves Hcyinduced endothelial dysfunction (a). SNP-induced vasodilation shows ndifference among these groups (b). Data is shown as means±SEM.*P<0.05 vControl,#P<0.05 vs. Hcy. n=6 for each group

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王惠穎,魏文樹,史道華;胰島素抵抗與內(nèi)皮功能失調(diào)[J];海峽藥學(xué);2004年05期

2 原巧靈;血管內(nèi)皮功能失調(diào)的評(píng)價(jià)與治療[J];實(shí)用心腦肺血管病雜志;2003年06期

3 莫新玲,趙水平;內(nèi)皮功能失調(diào)與動(dòng)脈粥樣硬化[J];臨床薈萃;2000年24期

4 盧建敏,高恩民;冠心病血管內(nèi)皮功能失調(diào)與檢測(cè)[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2000年06期

5 李小燕;血管內(nèi)皮功能失調(diào)與冠心病[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;1998年05期

6 張湘瑜,趙水平;內(nèi)皮功能失調(diào)與動(dòng)脈粥樣硬化[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;1999年04期

7 丁國(guó)林;;內(nèi)皮功能失調(diào)和胰島素抵抗在心臟X綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2007年06期

8 嚴(yán)江濤;同型半胱氨酸與血管內(nèi)皮功能失調(diào)的關(guān)系及其分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];臨床心血管病雜志;2004年04期

9 李江,趙水平;血管內(nèi)皮依賴性舒張功能失調(diào)的檢測(cè)及臨床意義[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1997年02期

10 劉麗娟;唐智奇;郭予潔;;載脂蛋白E基因敲除小鼠血管內(nèi)皮功能失調(diào)模型的建立[J];廣西醫(yī)學(xué);2015年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前8條

1 李娟;楊智偉;趙施皓;裴建明;;κ-阿片受體在低氧性肺動(dòng)脈高壓中的作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2013年

2 王廣;于婕;王琛;李衛(wèi)虹;安慧杰;徐援;洪天配;;初發(fā)2型糖尿病誘導(dǎo)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能失調(diào)及膽固醇等危險(xiǎn)因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

3 朱秋毓;丁峰;顧勇;林善錟;;非氧化作用機(jī)制參與AOPPs生成過程的證據(jù)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 鄭煦f

本文編號(hào)：2717576