【摘要】：背景與目的免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是一種以血小板破壞增多及生成不足為特征的自身免疫性出血性疾病。既往認(rèn)為血小板自身抗體介導(dǎo)的體液免疫在ITP的發(fā)病過(guò)程中起著重要的作用。近年來(lái),隨著研究的深入,細(xì)胞免疫,尤其是T細(xì)胞免疫的異常在ITP發(fā)病中的作用也越來(lái)越受到關(guān)注。調(diào)節(jié)T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)是近年來(lái)受到重視的一類細(xì)胞,在維持機(jī)體免疫平衡方面起重要作用。有研究表明,ITP患者的骨髓、脾臟、和外周血中都有不同程度的CD4+Tregs數(shù)量明顯減少,及其免疫抑制功能也顯著下降。實(shí)驗(yàn)表明CD8+Tregs數(shù)量減少和功能缺陷也和自身免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)。但在ITP患者中CD8+Tregs各亞群的數(shù)量及功能的變化,及其相應(yīng)的CD8+CD28+T淋巴細(xì)胞,即細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)細(xì)胞水平的變化,尚未有詳細(xì)報(bào)道。目前認(rèn)為,細(xì)胞因子通過(guò)和免疫細(xì)胞的相互作用,在維持機(jī)體免疫平衡方面發(fā)揮重要作用。輔助T細(xì)胞可以分泌細(xì)胞因子來(lái)介導(dǎo)機(jī)體的一系列免疫反應(yīng)。如:Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要為IL-2、IFN-γ、TNF-α等,Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要為IL-4、IL-5、IL-10等,Th17特異性分泌IL-17。另外,抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell,APC)、濾泡輔助性T細(xì)胞(T follicular helper cells,Tfh細(xì)胞)等多種T細(xì)胞還可以分泌眾多的細(xì)胞因子如IL-12、IL-23、IL-27等等。這些細(xì)胞因子在ITP發(fā)生中的作用尚待進(jìn)一步證實(shí)明確。研究目的:(1)檢測(cè)ITP患者和正常對(duì)照者外周血循環(huán)中CD4+Tregs(CD4+CD25+Foxp3+)、CD8+Tregs(CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs)各亞群細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞(CTL)數(shù)量比例,探討CD4+Tregs、CD8+Tregs各亞群及CTL在ITP患者發(fā)病中的作用;(2)檢測(cè)ITP患者及正常對(duì)照者體內(nèi)不同細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、TNF,IL-10、IL-17A、IL-12以及IL-21的含量水平,探討ITP免疫失衡機(jī)制;(3)采用HD-DXM對(duì)ITP患者進(jìn)行治療,檢測(cè)患者治療前后CD4+Tregs、CD8+Tregs各亞群及CTL細(xì)胞數(shù)量比例的變化及各種細(xì)胞因子水平的變化,探討激素治療改善ITP患者細(xì)胞免疫異�？赡艿臋C(jī)制。研究方法收集2015年4月-2016年9月份安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科住院的新確診ITP的患者30例。同時(shí)入組20例健康成人作為正常對(duì)照。1.EDTA抗凝血分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及血漿。以單克隆抗體標(biāo)記PBMCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ITP患者及正常對(duì)照淋巴細(xì)胞中的CD4+CD25+Foxp3、CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs以及CD8+CD28+T細(xì)胞(CTL)的數(shù)量比例。2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ITP患者和正常對(duì)照外周血血清中細(xì)胞因子IL-2、TNF、IFN-γ、IL-10、IL-17A、IL-12、IL-21的水平。3.所有ITP患者均接受四天的連續(xù)大劑量地塞米松方案治療(HD-DXM 40mg/d),治療前留取患者EDTA抗凝外周血,治療開(kāi)始后第7天和第14天復(fù)查血常規(guī),根據(jù)第14天血常規(guī)檢測(cè)的血小板計(jì)數(shù)進(jìn)行臨床療效評(píng)價(jià),副反應(yīng)評(píng)價(jià),治療后第14天留取EDTA抗凝外周血標(biāo)本。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)治療前后上述調(diào)節(jié)T細(xì)胞和CTL的數(shù)量比例變化和各種細(xì)胞因子水平的變化。研究結(jié)果1.ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴細(xì)胞的比例為1.500+0.813%,而正常對(duì)照組為3.42+0.752%,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);患者組CD8+CD25+占淋巴細(xì)胞的比例為0.213+0.106%,正常對(duì)照組為3.16+0.566%;患者組CD8+CD103+占淋巴細(xì)胞的比例為2.127+0.858%,正常對(duì)照組為4.329+0.817%,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);患者組CD8+CD28-細(xì)胞(CTL)占CD8+T淋巴細(xì)胞的比例為4.832+0.531%,而正常對(duì)照組為8.313+0.841%,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);患者組CD8+CD28+占淋巴細(xì)胞的比例為40.853+12.178%,而正常對(duì)照組為4.765+1.000%,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.ITP患者血清中IL-2含量為3.460+1.323pg/ml,TNF的含量為37.494+8.013pg/ml;IFN-γ的含量為12.371+2.875 pg/ml;IL-12P70的含量為27.106+7.364pg/ml,IL-17A的含量為51.319+9.329 pg/ml,IL-21的含量為34.280+5.838pg/ml,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而IL-10的含量為1.647+0.566 pg/ml,患者組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.大劑量地塞米松治療后第14天進(jìn)行療效評(píng)估,分為完全反應(yīng)(complete response,CR)、反應(yīng)(response,R)、無(wú)反應(yīng)(no response,NR),其CR、R、NR比率分別為60.00%、33.33%,6.67%,均未出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥和副反應(yīng)。4.大劑量地塞米松治療后,ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴細(xì)胞的比例為2.287+0.834%,CD8+CD25+Tregs占淋巴細(xì)胞的比例為2.702+0.748%,CD8+CD103+Tregs占CD8+T淋巴細(xì)胞的比例為3.64+1.058%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而CD8+CD28-Tregs占淋巴細(xì)胞的比例為6.560+0.704%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而CD8+CD28+(CTL)占CD8+T淋巴細(xì)胞的比例為11.052+2.549%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.大劑量地塞米松治療后,IL-2的水平為1.363+0.649pg/mL、TNF的水平為15.383+7.132 pg/mL,IFN-γ的水平為3.705+1.447 pg/mL,IL-12P70的水平為13.495+2.961 pg/mL,IL-17A的水平為19.430+5.310 pg/mL,IL-21的水平為9.208+1.505 pg/mL,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但仍高于正常對(duì)照組;IL-10的水平為5.437+0.978 pg/mL,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),仍低于正常對(duì)照組。結(jié)論1.ITP患者外周血CD4+CD25+Foxp3+和CD8+Tregs各亞群與對(duì)照組相比有顯著性差異,上述調(diào)節(jié)T細(xì)胞以及CTL在ITP疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能參與其發(fā)病;2.ITP患者的多種細(xì)胞因子改變與對(duì)照組有顯著性差異,多種細(xì)胞因子參與ITP的發(fā)病過(guò)程;3.HD-DXM能顯著改善調(diào)節(jié)T細(xì)胞和多種細(xì)胞因子水平,參與細(xì)胞免疫,維持免疫平衡,可能是其治療ITP的治療機(jī)制之一。
【圖文】：

表 4 : ITP 患者 CTL 細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果(%)Tab.4 ：Subsets of CTL in ITP patients (%)治療前（n=30） 對(duì)照（n=20） t（X2）值 P 值年齡（Y） 39.167 + 15.394 39.300 + 12.687 -0.032 0.975血小板（×109） 8.200 + 0.015 213.000 + 44.916 -20.327 0.001CD8+CD28+（％） 40.853 + 12.178 4.765 + 1.000 16.150 0.000性別男 7 928.395 0.000女 23 11

Tab.6: The levels of various cytokines in patients with ITP (pg/mL)對(duì)照組（n=20）ITP 患者組（n=30）t 值 p 值IL-2 1.270 + 0.858 3.460 + 1.323 7.098 0.001IL-10 9.380 + 1.186 1.647 + 0.566 -27.176 0.001TNF 1.419 + 1.529 37.494 + 8.013 24.012 0.001 -干擾素 1.207+ 1.028 12.371+ 2.875 19.482 0.000IL-12P70 2.888 + 1.520 27.106 + 7.364 17.464 0.000IL-17A 6.558 + 1.105 51.319 + 9.329 26.008 0.000IL-21 2.142 + 1.109 34.280 + 5.838 29.367 0.000
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R558.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2704583