【摘要】：背景與目的免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是一種以血小板破壞增多及生成不足為特征的自身免疫性出血性疾病。既往認為血小板自身抗體介導的體液免疫在ITP的發(fā)病過程中起著重要的作用。近年來,隨著研究的深入,細胞免疫,尤其是T細胞免疫的異常在ITP發(fā)病中的作用也越來越受到關(guān)注。調(diào)節(jié)T細胞(regulatory T cell,Treg)是近年來受到重視的一類細胞,在維持機體免疫平衡方面起重要作用。有研究表明,ITP患者的骨髓、脾臟、和外周血中都有不同程度的CD4+Tregs數(shù)量明顯減少,及其免疫抑制功能也顯著下降。實驗表明CD8+Tregs數(shù)量減少和功能缺陷也和自身免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)。但在ITP患者中CD8+Tregs各亞群的數(shù)量及功能的變化,及其相應的CD8+CD28+T淋巴細胞,即細胞毒T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)細胞水平的變化,尚未有詳細報道。目前認為,細胞因子通過和免疫細胞的相互作用,在維持機體免疫平衡方面發(fā)揮重要作用。輔助T細胞可以分泌細胞因子來介導機體的一系列免疫反應。如:Th1細胞分泌的細胞因子主要為IL-2、IFN-γ、TNF-α等,Th2細胞分泌的細胞因子主要為IL-4、IL-5、IL-10等,Th17特異性分泌IL-17。另外,抗原提呈細胞(antigen presenting cell,APC)、濾泡輔助性T細胞(T follicular helper cells,Tfh細胞)等多種T細胞還可以分泌眾多的細胞因子如IL-12、IL-23、IL-27等等。這些細胞因子在ITP發(fā)生中的作用尚待進一步證實明確。研究目的:(1)檢測ITP患者和正常對照者外周血循環(huán)中CD4+Tregs(CD4+CD25+Foxp3+)、CD8+Tregs(CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs)各亞群細胞、CD8+CD28+T細胞(CTL)數(shù)量比例,探討CD4+Tregs、CD8+Tregs各亞群及CTL在ITP患者發(fā)病中的作用;(2)檢測ITP患者及正常對照者體內(nèi)不同細胞因子IL-2、IFN-γ、TNF,IL-10、IL-17A、IL-12以及IL-21的含量水平,探討ITP免疫失衡機制;(3)采用HD-DXM對ITP患者進行治療,檢測患者治療前后CD4+Tregs、CD8+Tregs各亞群及CTL細胞數(shù)量比例的變化及各種細胞因子水平的變化,探討激素治療改善ITP患者細胞免疫異�？赡艿臋C制。研究方法收集2015年4月-2016年9月份安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院血液科住院的新確診ITP的患者30例。同時入組20例健康成人作為正常對照。1.EDTA抗凝血分離外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及血漿。以單克隆抗體標記PBMCs,流式細胞術(shù)檢測ITP患者及正常對照淋巴細胞中的CD4+CD25+Foxp3、CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs以及CD8+CD28+T細胞(CTL)的數(shù)量比例。2.采用流式細胞術(shù)檢測ITP患者和正常對照外周血血清中細胞因子IL-2、TNF、IFN-γ、IL-10、IL-17A、IL-12、IL-21的水平。3.所有ITP患者均接受四天的連續(xù)大劑量地塞米松方案治療(HD-DXM 40mg/d),治療前留取患者EDTA抗凝外周血,治療開始后第7天和第14天復查血常規(guī),根據(jù)第14天血常規(guī)檢測的血小板計數(shù)進行臨床療效評價,副反應評價,治療后第14天留取EDTA抗凝外周血標本。流式細胞術(shù)檢測治療前后上述調(diào)節(jié)T細胞和CTL的數(shù)量比例變化和各種細胞因子水平的變化。研究結(jié)果1.ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴細胞的比例為1.500+0.813%,而正常對照組為3.42+0.752%,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);患者組CD8+CD25+占淋巴細胞的比例為0.213+0.106%,正常對照組為3.16+0.566%;患者組CD8+CD103+占淋巴細胞的比例為2.127+0.858%,正常對照組為4.329+0.817%,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);患者組CD8+CD28-細胞(CTL)占CD8+T淋巴細胞的比例為4.832+0.531%,而正常對照組為8.313+0.841%,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);患者組CD8+CD28+占淋巴細胞的比例為40.853+12.178%,而正常對照組為4.765+1.000%,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2.ITP患者血清中IL-2含量為3.460+1.323pg/ml,TNF的含量為37.494+8.013pg/ml;IFN-γ的含量為12.371+2.875 pg/ml;IL-12P70的含量為27.106+7.364pg/ml,IL-17A的含量為51.319+9.329 pg/ml,IL-21的含量為34.280+5.838pg/ml,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而IL-10的含量為1.647+0.566 pg/ml,患者組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。3.大劑量地塞米松治療后第14天進行療效評估,分為完全反應(complete response,CR)、反應(response,R)、無反應(no response,NR),其CR、R、NR比率分別為60.00%、33.33%,6.67%,均未出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥和副反應。4.大劑量地塞米松治療后,ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴細胞的比例為2.287+0.834%,CD8+CD25+Tregs占淋巴細胞的比例為2.702+0.748%,CD8+CD103+Tregs占CD8+T淋巴細胞的比例為3.64+1.058%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而CD8+CD28-Tregs占淋巴細胞的比例為6.560+0.704%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而CD8+CD28+(CTL)占CD8+T淋巴細胞的比例為11.052+2.549%,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。5.大劑量地塞米松治療后,IL-2的水平為1.363+0.649pg/mL、TNF的水平為15.383+7.132 pg/mL,IFN-γ的水平為3.705+1.447 pg/mL,IL-12P70的水平為13.495+2.961 pg/mL,IL-17A的水平為19.430+5.310 pg/mL,IL-21的水平為9.208+1.505 pg/mL,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),但仍高于正常對照組;IL-10的水平為5.437+0.978 pg/mL,治療后與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),仍低于正常對照組。結(jié)論1.ITP患者外周血CD4+CD25+Foxp3+和CD8+Tregs各亞群與對照組相比有顯著性差異,上述調(diào)節(jié)T細胞以及CTL在ITP疾病發(fā)生發(fā)展過程中可能參與其發(fā)病;2.ITP患者的多種細胞因子改變與對照組有顯著性差異,多種細胞因子參與ITP的發(fā)病過程;3.HD-DXM能顯著改善調(diào)節(jié)T細胞和多種細胞因子水平,參與細胞免疫,維持免疫平衡,可能是其治療ITP的治療機制之一。
【圖文】：

表 4 : ITP 患者 CTL 細胞的檢測結(jié)果(%)Tab.4 ：Subsets of CTL in ITP patients (%)治療前（n=30） 對照（n=20） t（X2）值 P 值年齡（Y） 39.167 + 15.394 39.300 + 12.687 -0.032 0.975血小板（×109） 8.200 + 0.015 213.000 + 44.916 -20.327 0.001CD8+CD28+（％） 40.853 + 12.178 4.765 + 1.000 16.150 0.000性別男 7 928.395 0.000女 23 11

Tab.6: The levels of various cytokines in patients with ITP (pg/mL)對照組（n=20）ITP 患者組（n=30）t 值 p 值IL-2 1.270 + 0.858 3.460 + 1.323 7.098 0.001IL-10 9.380 + 1.186 1.647 + 0.566 -27.176 0.001TNF 1.419 + 1.529 37.494 + 8.013 24.012 0.001 -干擾素 1.207+ 1.028 12.371+ 2.875 19.482 0.000IL-12P70 2.888 + 1.520 27.106 + 7.364 17.464 0.000IL-17A 6.558 + 1.105 51.319 + 9.329 26.008 0.000IL-21 2.142 + 1.109 34.280 + 5.838 29.367 0.000
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R558.2

【參考文獻】

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10 郭薇;朱s，

本文編號：2704583