【摘要】：動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病和退行性疾病,是心血管疾病最常見的病因,而平滑肌細胞在血管閉塞性疾病中起到重要作用。在健康情況下,炎癥是一種正常的穩(wěn)態(tài)反應(yīng),但在炎癥長期存在的條件下,它從一種保護機制轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N有害反應(yīng),并可能導(dǎo)致進一步損害。在病理條件下產(chǎn)生大量一氧化氮的關(guān)鍵酶是iNOS(inducible nitric oxide synthase,誘導(dǎo)型一氧化氮合酶),在病理條件下,iNOS被認(rèn)為是一種有害的酶。iNOS產(chǎn)生的大量一氧化氮與O_2~-反應(yīng)生成ONOO~-,發(fā)生硝化反應(yīng),對組織造成損傷,從而參與動脈粥樣硬化的形成。目的:本研究的目的是探討過表達的iNOS對平滑肌細胞在參與動脈粥樣硬化過程中的作用。方法:本研究中實驗分為兩個部分:人冠狀動脈組織(狹窄程度小于百分之五十)實驗和人主動脈平滑肌細胞實驗。在人冠狀動脈組織試驗中,把人冠狀動脈分成了兩組,一組是正常無病變的組織,另一組是有動脈粥樣硬化斑塊且管腔狹窄程度小于百分之五十的血管,兩組血管取材時都避開分叉處,對兩組組織進行了western blot、pcr、免疫組化、HE染色、彈力纖維染色、Griess試劑盒檢測實驗,在人主動脈平滑肌細胞實驗中,將細胞分成了兩組,一組為正常的細胞組,另一組為加入LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)的細胞組,對細胞進行了western blot、pcr、免疫熒光、CCK8、細胞劃痕、細胞遷移、Griess試劑盒檢測實驗,另外本實驗還下調(diào)了iNOS,分成了四組:iNOS下調(diào)組、i NOS下調(diào)加脂多糖組、iNOS下調(diào)陰性對照組、iNOS下調(diào)陰性對照加脂多糖組,檢測平滑肌細胞的遷移能力,本實驗中還下調(diào)了NF-κB信號通路里的p65,也分成四組:p65下調(diào)組、p65下調(diào)加脂多糖組、p65下調(diào)陰性對照組、p65下調(diào)陰性對照加脂多糖組,用western blot檢測iNOS的表達量。結(jié)果:實驗結(jié)果顯示組織組western blot、pcr中iNOS表達量在動脈粥樣硬化組比正常血管組高,免疫組化顯示了iNOS在平滑肌源性的泡沫細胞中表達量多,且在細胞質(zhì)表達,彈力纖維染色顯示彈性纖維從中膜穿過了內(nèi)彈力板到內(nèi)膜,Griess試劑盒檢測的動脈粥樣硬化組NO的表達量比正常組多。細胞組western blot、pcr中iNOS的表達量在脂多糖組中比正常組中高,免疫熒光顯示iNOS在脂多糖組表達多且在細胞質(zhì)表達,CCK8、細胞劃痕、細胞遷移顯示脂多糖組細胞的增殖和遷移能力增強,Griess試劑盒檢測的脂多糖組NO表達量比正常組多。結(jié)論:細胞實驗結(jié)果表明動脈粥樣硬化血管中iNOS表達增多,各種刺激因子如脂多糖通過NF-κB信號通路產(chǎn)生過量的i NOS,進而促進平滑肌細胞的增殖、遷移,使中膜的平滑肌細胞遷移到內(nèi)膜,但是沒有侵襲能力,從而參與動脈粥樣硬化的形成。
【圖文】：

表明了動脈粥樣硬化的血管表達的 iNOS 比正常血管多，，且 iNOS 主要是在動脈粥樣 硬 化 血 管 壁 的 平 滑 肌 細 胞 的 細 胞 質(zhì) 中 表 達 增 多 。圖1 血管組織中 iNOS 的表達情況 A 圖為western blot 檢測的正常血管和動脈

16圖 2 平滑肌細胞的增殖和 iNOS 的表達情況 A 圖為 CCK8 檢測不同濃度、不同時間脂多糖對細胞的增殖作用 B 圖為免疫熒光檢測正常細胞和加入脂多糖的細胞中 iNOS 的表達 C 圖為 western blot 檢測正常細胞和加入脂多糖的細胞中 iNOS 的表達（*p<0.05） D 圖為 pcr 檢測正常細胞和加入脂多糖的細胞中 iNOS 的表達（*p<0.05）
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R543.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ning Shi;Shi-You Chen;;Mechanisms simultaneously regulate smooth muscle proliferation and differentiation[J];The Journal of Biomedical Research;2014年01期

本文編號：2695154