【摘要】：第一部分骨髓增殖性腫瘤JAK2、MPL、CALR基因突變特點及臨床特征分析[研究背景和研究目的]骨髓增殖性腫瘤(MPN)是以骨髓中一系或多系髓系(粒系、紅系、巨核系)細胞持續(xù)異常增殖為特征的一組克隆性造血干細胞疾病。主要包括真性紅細胞增多癥(PV)、原發(fā)性血小板增多癥(ET)、原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)和慢性粒細胞白血病(CML)。臨床表現(xiàn)為一種或多種血細胞的異常導致患者有出血傾向、血栓形成和髓外造血。絕大多數(shù)(85%)的MPN患者攜帶MPN啟動或驅(qū)動基因突變,以JAK2 V617F基因突變最常見,其次為CALR基因突變,MPL基因突變比率最低。MPN亞型不同,突變基因頻率、分布、臨床表型及實驗室指標也不同。JAK2、CALR、MPL等驅(qū)動基因的突變類型和突變負荷在判斷MPN患者的預后方面具有重要的價值。如高JAK2 V617F突變負荷與高白細胞、高血紅蛋白、巨脾及血栓事件發(fā)生率增高等顯著相關(guān),高負荷驅(qū)動基因突變的PV及ET患者進展為骨髓纖維化及白血病的風險增高。本研究旨在觀察比較經(jīng)典骨髓增殖性腫瘤患者驅(qū)動基因JAK2、CALR、MPL的突變特點、臨床特征及實驗室指標之間的差異,分析PV、ET、MF三種疾病的發(fā)病和臨床特征與驅(qū)動基因之間的相互關(guān)系,為該疾病的治療提供更加充分的依據(jù)。[研究方法]本研究采用系統(tǒng)性回顧的方法,通過門診及電話隨訪收集2017年01月至2019年06月期間,在山東大學齊魯醫(yī)院就診的MPN患者,共143例,其中PV 46例,ET49例,MF 48例,收集患者一般資料、臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、JAK2、MPL、CALR基因突變情況,以及疾病相關(guān)預后評分和治療方案,并采用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計學分析,定義p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。[研究結(jié)果]本研究共納入143例患者,其中PV 46例,ET 49例,MF 48例。我們觀察到:1.JAK2 V617F基因總突變率為75.52%,在PV、ET、MF患者中的突變率分別為80.43%、71.43%、75.00%。JAK2 exon12基因突變僅見于3例PV患者。CALR基因總突變率為10.49%,其中ET患者突變率為20.41%,MF突變率為10.42%,PV患者中未檢測到CALR突變。在PV、ET、MF三種疾病中,MPL突變檢測均為陰性。未發(fā)現(xiàn)兩種及以上基因突變共存的病例。2.在PV患者中,JAK2 V617F基因突變陽性與陰性患者相比:陽性患者發(fā)病年齡、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、乳酸脫氫酶,以及脾臟增大和預后積分均明顯高于陰性患者,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05)。3.在ET患者中,JAK2 V617F基因突變陽性與陰性患者相比:JAK2 V617F基因突變陽性患者的紅細胞計數(shù)、血紅蛋白含量和血栓國際預后評分均明顯高于陰性患者,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05);JAK2 V617F基因突變陽性與CALR基因突變陽性患者相比:JAK2V617F基因突變陽性患者血栓預后積分更高,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05);JAK2 V617F基因突變陽性與三陰性患者相比,JAK2 V617F基因突變陽性患者紅細胞計數(shù)、血紅蛋白含量及血栓國際預后評分均高于三陰性患者,纖維蛋白原低于三陰性患者,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05);CALR基因突變陽性與三陰性患者相比,CALR基因突變陽性患者血紅蛋白含量更高,纖維蛋白原更低,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05)。4.在MF患者中,JAK2 V617F基因突變陽性與陰性患者相比:JAK2 V617F基因突變陽性患者白細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白含量均高于突變陰性患者,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05);JAK2 V617F基因突變陽性與CALR基因突變陽性患者相比,白細胞、血紅蛋白、血小板各指標間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);JAK2 V617F基因突變陽性與三陰性患者相比,JAK2 V617F基因突變陽性患者白細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)及血紅蛋白含量更高,具有顯著統(tǒng)計學差異(p0.05);CALR基因突變陽性與三陰性患者相比,各指標間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。[研究結(jié)論]1.在MPN患者中,驅(qū)動基因突變以JAK2 V617F基因突變最常見,其次為CALR基因突變,MPL基因突變比例最低,本研究143例患者,均未發(fā)現(xiàn)MPL突變。2.JAK2 V617F突變、CALR突變、MPL突變?yōu)榛コ馔蛔儭?.在觀察的143例PV、ET及MF患者中,均存在突變基因陰性患者,即“三陰性”患者,約占總數(shù)的11.89%,與文獻報道基本相符。4.在PV患者中,JAK2 V617F基因是否突變與預后積分差異有統(tǒng)計學意義,提示基因突變與預后相關(guān);ET患者中,JAK2 V617F基因突變、CALR基因突變與血栓預后積分差異有統(tǒng)計學意義,提示基因突變與血栓形成風險相關(guān)。5.MPN亞型不同,突變基因頻率、分布、臨床表型及實驗室指標也不同。第二部分 基于二代測序的骨髓增殖性腫瘤基因突變模式分析[研究背景和研究目的]在MPN中,除驅(qū)動基因外,一些非驅(qū)動基因突變對判斷MPN患者的預后亦有一定的價值。ASXL1、SRSF2、EZH2、IDH1/2基因突變被定義為“高危分子遺傳學基因突變(HMR)”,是MPN患者預后不良的標志,攜帶至少1個上述基因突變被定義為高分子風險狀態(tài),患者總生存期(OS)縮短,進展為AML的風險增大。攜帶超過1個高危分子異常的患者預后更差,文獻報道該類患者中位總生存期顯著低于攜帶1個或無突變的患者(分別為2.6年、7.0年和12.2年)。隨著二代測序技術(shù)的廣泛開展,臨床上已逐漸開展MPN患者非驅(qū)動基因突變的檢測,但仍缺乏系統(tǒng)性大宗病例分析,故而非驅(qū)動基因?qū)PN疾病臨床特征、治療、預后的影響有待于深入研究。為了向MPN診斷和分層治療提供更多的分子遺傳學支持,結(jié)合NCCN指南推薦及我院血液病實驗室實際檢測手段,我們對57例MPN患者進行了 38個MDS/AML/MPN相關(guān)基因的靶向二代測序,進一步了解不同驅(qū)動基因及非驅(qū)動基因突變情況與MPN患者的臨床特征、治療、預后以及與生存之間的關(guān)系,以期為我國MPN數(shù)據(jù)庫提供更豐富的數(shù)據(jù)資料,為個體化治療和精準醫(yī)療提供理論支持。[研究方法]本研究采用系統(tǒng)性回顧的方法,通過門診及電話隨訪收集2017年01月至2019年06月期間在山東大學齊魯醫(yī)院就診并進行二代測序的MPN患者,共57例,其中PV 14例,ET 17例,MF 26例。收集患者一般資料、臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、驅(qū)動基因和非驅(qū)動基因突變情況,以及疾病相關(guān)預后評分和治療方案,并采用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計學分析,定義p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。[研究結(jié)果]本研究共納入57例患者,其中PV 14例,ET 17例,MF 26例,我們觀察到:1.PV患者共14例,非驅(qū)動基因突變檢測均為陰性。2.在所觀察的17例ET患者中,有10例患者檢測到非驅(qū)動基因突變,突變頻數(shù)為0-5。ASXL1、TP53突變頻率均為17.65%,TET2、U2AF1、DNMT3A、SF3B1突變頻率均為11.76%,SRSF2突變頻率為5.88%。突變類型以點突變、插入/缺失突變?yōu)橹�。而指南推薦的CSF3R、EZH2、IDH1/2、SH2B3、ABL1、CBL未檢測到突變。3.在所觀察的26例MF患者中,有17例患者檢測到非驅(qū)動基因突變,突變頻數(shù)為0-4。ASXL1突變頻率為46.15%,SF3B1突變頻率為15.38%,TP53、TET2、SRSF2 突變頻率均為 7.69%,CSF3R、IDH1、U2AF1、NRAS、KRAS、CEBPA、ETV6、AML1突變頻率均為3.85%,未檢測到EZH2、SH2B3、ABL1、CBL、DNMT3A基因突變。所檢測到的突變中,突變類型以點突變、插入/缺失突變?yōu)橹�。分析這些發(fā)生非驅(qū)動基因(ASXL1、SF3B1、TET2、SRSF2、TP53、CSF3R、IDH1、U2AF1)突變的MF患者臨床特點,各指標間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。4.26例MF患者中,有4例轉(zhuǎn)化為白血病,二代測序結(jié)果顯示多個非驅(qū)動基因突變或高危分子遺傳學基因,疾病進展快,且對現(xiàn)有治療反應不佳。[研究結(jié)論]1.觀察的14例PV患者,未檢測到非驅(qū)動基因突變;58.82%(10/17)的ET和65.38%(17/26)的MF患者存在至少一個非驅(qū)動基因突變,半數(shù)以上患者只含一個突變。2.17 例 ET 和 26 例 MF 患者中,發(fā)現(xiàn) ASXL1、TET2、SRSF2、TP53、U2AF1、SF3B1等多種重現(xiàn)性基因突變,以ASXL1突變比率為最高,突變類型主要表現(xiàn)為點突變、缺失突變和插入突變,以點突變比例最高。3.非驅(qū)動基因突變與疾病進展及轉(zhuǎn)化相關(guān),依據(jù)MIPSS70/MIPSS70-Plus評分,對新診斷的患者進行預后分層,選擇個體化的治療方案。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R733

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本文編號：2679333