【摘要】：動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)的發(fā)生發(fā)展表現(xiàn)為動脈對內(nèi)膜損傷導(dǎo)致的纖維增生性反應(yīng),低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(End MT)且為As進(jìn)程中重要的生物學(xué)過程,但其調(diào)控機(jī)制尚不清楚。研究表明DNA羥甲基化酶TET2為剪切應(yīng)力敏感基因,TET2缺失或突變促進(jìn)As進(jìn)程。目的:本文將探討TET2對低剪切應(yīng)力下End MT的影響。方法:1、采用頸總動脈局部結(jié)扎apo E-/-小鼠模型,動物實(shí)驗(yàn)分組如下:(1)頸總動脈局部結(jié)扎;(2)頸總動脈局部結(jié)扎+TET2過表達(dá)慢病毒載體(LV-TET2)感染組;2、采用人重組TGFβ1誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEs)發(fā)生End MT,使用TET2過表達(dá)慢病毒載體(LV-TET2)、TET2干擾慢病毒載體(TET2 sh RNA)轉(zhuǎn)染技術(shù),從細(xì)胞分子水平檢測TET2對End MT的影響,分組如下:(1)空白對照組,(2)TGFβ1處理組,50ng/ml,(3)TET2 sh RNA轉(zhuǎn)染組,(3)LV-TET2轉(zhuǎn)染+TGFβ1處理組。結(jié)果:動物實(shí)驗(yàn),HE、油紅O染色結(jié)果顯示,對照組apo E-/-小鼠As病變嚴(yán)重,TET2過表達(dá)明顯抑制局部狹窄apo E-/-小鼠As病變;免疫熒光顯示TET2過表達(dá)組血管內(nèi)皮細(xì)胞VE-Cadherin,CD31表達(dá)高于對照組,間質(zhì)細(xì)胞抗原(如α SMA)以及Wnt/β catenin信號通路下游靶基因MYC、ID1、AXIN2低于對照組。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對照組相比,經(jīng)TGFβ1處理后的HUVEs形態(tài)及細(xì)胞骨架發(fā)生改變,VE-Cadherin蛋白表達(dá)減少,而α-SMA、FAP等間質(zhì)標(biāo)記蛋白表達(dá)上調(diào);與對照組相比,TET2干擾組中VE-Cadherin蛋白質(zhì)表達(dá)減少,而α-SMA蛋白質(zhì)表達(dá)量增多,FAP蛋白質(zhì)表達(dá)量無明顯改變;而與TGFβ1處理組相比,LV-TET2+TGFβ1組細(xì)胞形態(tài)保持鵝卵石形,細(xì)胞骨架無明顯變化,VE-Cadherin蛋白表達(dá)上調(diào)、α-SMA、FAP等蛋白表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:TET2通過下調(diào)Wnt/β-catenin信號途徑抑制低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,抑制As。
【圖文】：

A.左頸總動脈（LCA）部分結(jié)扎的示意圖.LCA 的三個分支頸外動脈（ECA）動脈（ICA）和枕動脈（OA）結(jié)扎 、甲狀腺上動脈（STA）開放;右頸總動脈（不做結(jié)扎術(shù); B.手術(shù)組高脂喂養(yǎng) 4 周后體視顯微鏡觀察頸總動脈 As 病變 （C.HE 染色觀察局部結(jié)扎對 apoE-/-小鼠頸動脈As斑塊的影響(n=10，Scale bar=D.病變面積統(tǒng)計分析（n=10,****P<0.0001 vs RCA group）

18圖 3.1 A.左頸總動脈（LCA）部分結(jié)扎的示意圖.LCA 的三個分支頸外動脈（ECA）、頸內(nèi)動脈（ICA）和枕動脈（OA）結(jié)扎 、甲狀腺上動脈（STA）開放;右頸總動脈（RCA）不做結(jié)扎術(shù); B.手術(shù)組高脂喂養(yǎng) 4 周后體視顯微鏡觀察頸總動脈 As 病變 （×1.0）；C.HE 染色觀察局部結(jié)扎對 apoE-/-小鼠頸動脈As斑塊的影響(n=10，Scale bar=50μm)；D.病變面積統(tǒng)計分析（n=10,****P<0.0001 vs RCA group）
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 張晶晶;游詠;李熠;桂慶軍;馮聚玲;尹凱;;內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化與心血管疾病的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2015年07期

2 危當(dāng)恒;王貴學(xué);唐朝君;劉錄山;任重;;局部狹窄血管遠(yuǎn)心端流場數(shù)值模擬和PIV測定[J];南華大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

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本文編號：2654976