【摘要】：目的:通過MDS細胞株和骨髓基質(zhì)細胞共培養(yǎng),研究SPARC過表達對骨髓基質(zhì)細胞的影響,揭示SPARC對骨髓基質(zhì)細胞的作用機制,為臨床靶向治療提供新的線索。方法:1.收集了近4年來在重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院確診為MDS的患者骨髓標本,通過qRT-PCR檢測骨髓中SPARC mRNA的表達;2.構(gòu)建含有SPARC基因的重組慢病毒載體,轉(zhuǎn)染至人MDS細胞株SKM-1細胞,流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR檢測SKM-1細胞中SPARC mRNA表達;3.將SKM-1細胞與骨髓基質(zhì)細胞HS-5細胞直接共培養(yǎng),實驗分為三組(實驗組SKM-1/HBLV-hSPARC+HS-5;空白組SKM-1/HBLV-GFP-puro+HS-5;對照組SKM-1+HS-5)。檢測共培養(yǎng)24h后HS-5細胞生物學的變化:CCK-8法和流式細胞術(shù)檢測HS-5細胞增殖、細胞周期與細胞凋亡;qRT-PCR檢測bcl-2、bax、p53、fas以及caspase-9 mRNA表達;Western blot檢測bcl-2、bcl-w和caspase-8蛋白表達。結(jié)果:1.MDS患者骨髓中SPARC mRNA表達水平相較于健康對照組顯著升高;2.上調(diào)SPARC基因在共培養(yǎng)體系中的表達,可以阻滯細胞周期從而抑制HS-5細胞增殖,促進HS-5細胞凋亡。結(jié)論:1.SPARC在MDS患者中可能作為一個癌基因;2.在共培養(yǎng)中上調(diào)SPARC的表達,抑制骨髓基質(zhì)細胞的增殖,促進細胞凋亡。
【圖文】：

26圖 5 載體酶切產(chǎn)物及重 慢 毒載體陽性克隆鑒定Figure.5 Enzyme products and cloning identificatioA：重 慢病毒載體酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果（1： SPAR增 SPARC 基因電泳結(jié)果（1： Marker ；2： S鑒定（1： Marker ；2-7 ： SPARC 單克隆鑒2.2 流式 胞術(shù)檢測慢 毒載體轉(zhuǎn)染
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R551.3

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