【摘要】：目的:通過(guò)MDS細(xì)胞株和骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng),研究SPARC過(guò)表達(dá)對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的影響,揭示SPARC對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的作用機(jī)制,為臨床靶向治療提供新的線索。方法:1.收集了近4年來(lái)在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診為MDS的患者骨髓標(biāo)本,通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)骨髓中SPARC mRNA的表達(dá);2.構(gòu)建含有SPARC基因的重組慢病毒載體,轉(zhuǎn)染至人MDS細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR檢測(cè)SKM-1細(xì)胞中SPARC mRNA表達(dá);3.將SKM-1細(xì)胞與骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS-5細(xì)胞直接共培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)分為三組(實(shí)驗(yàn)組SKM-1/HBLV-hSPARC+HS-5;空白組SKM-1/HBLV-GFP-puro+HS-5;對(duì)照組SKM-1+HS-5)。檢測(cè)共培養(yǎng)24h后HS-5細(xì)胞生物學(xué)的變化:CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HS-5細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡;qRT-PCR檢測(cè)bcl-2、bax、p53、fas以及caspase-9 mRNA表達(dá);Western blot檢測(cè)bcl-2、bcl-w和caspase-8蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.MDS患者骨髓中SPARC mRNA表達(dá)水平相較于健康對(duì)照組顯著升高;2.上調(diào)SPARC基因在共培養(yǎng)體系中的表達(dá),可以阻滯細(xì)胞周期從而抑制HS-5細(xì)胞增殖,促進(jìn)HS-5細(xì)胞凋亡。結(jié)論:1.SPARC在MDS患者中可能作為一個(gè)癌基因;2.在共培養(yǎng)中上調(diào)SPARC的表達(dá),抑制骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

26圖 5 載體酶切產(chǎn)物及重 慢 毒載體陽(yáng)性克隆鑒定Figure.5 Enzyme products and cloning identificatioA：重 慢病毒載體酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果（1： SPAR增 SPARC 基因電泳結(jié)果（1： Marker ；2： S鑒定（1： Marker ；2-7 ： SPARC 單克隆鑒2.2 流式 胞術(shù)檢測(cè)慢 毒載體轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R551.3

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本文編號(hào)：2638747