【摘要】：目的:使用長距離PCR(long-distance polymerase chain reaction,LD-PCR)及巢式PCR(reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-NPCR)方法檢測山西地區(qū)血友病(hemophilia A,HA)患者內(nèi)含子22(intron 22 inversion,Inv22),使用雙管多重PCR方法檢測內(nèi)含子1倒位(intron 1 inversion,Inv1),了解其發(fā)生率,并改進和完善實驗方法。方法:選取在山西省血友病管理中心登記的HA患者,使用LD-PCR方法對105例HA患者進行Inv22檢測,RT-NPCR方法對39例HA患者進行Inv22檢測;使用雙管多重PCR方法對77例HA患者進行Inv1檢測。結(jié)果:使用LD-PCR檢測HA患者105例,其中30例(28.6%)擴增成功,Inv22陽性者16例(53.3%);使用RT-NPCR檢測HA患者39例,其中30例擴增成功(76.9%),Inv22陽性者9例(30.0%),其中有7例同時使用LD-PCR及RT-PCR檢測,兩種方法檢測結(jié)果一致;使用雙重多管PCR檢測HA患者77例,全部擴增成功(100.0%),其中Inv1陽性者2例(2.5%)。以本課題組前期已確診Inv22和Inv1陽性的患者做為陽性對照,以正常人作為陰性對照。結(jié)論:(1)山西地區(qū)HA患者Inv22及Inv1發(fā)生率基本與國內(nèi)外研究報道符合;(2)目前LD-PCR為檢測Inv22的標準方法之一,但擴增效率較低。RT-NPCR與LD-NPCR方法檢測相同HA患者,結(jié)果一致,但RT-NPCR成功率更高,且耗時短,更經(jīng)濟,很有可能成為檢測Inv22更有效的方法之一。
【圖文】：

arker； 陰性對照h1 體系，A2:inth2 體系； 陽性對照h1 體系，B2:inth2 體系； 陰性h1 體系，，C2:inth2 體系； 陽性h1 體系，D2:inth2 體系圖 3：雙管多重 PCR 檢測 Inv1 凝膠電泳圖DNA 測序驗證 RT-NPCR 擴增位置結(jié)果-NPCR 野生型體系測序結(jié)果見圖 4，結(jié)果顯示，擴增位置為 FⅧ基因編碼區(qū)；突變型體系測序結(jié)果見圖 5，結(jié)果顯示，擴增位置為 FⅧ基因 Inv22 后的部分 22 號內(nèi)含子。兩體系擴增位置均正確。

RT-NPCR野生型體系測序結(jié)果
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R554.1

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本文編號：2637055