發(fā)布時(shí)間：2020-04-06 06:15

【摘要】：血管增生性疾病是一類嚴(yán)重影響人類健康的疾病,主要包括動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、肺動(dòng)脈高壓和血管術(shù)后再狹窄等,能臨引發(fā)多種臨床并發(fā)癥,如心肌梗塞,中風(fēng)和外周動(dòng)脈疾病等,發(fā)病率和死亡率較高。血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的表型轉(zhuǎn)換和異常增殖是該類疾病的主要病理基礎(chǔ)。因此,探究VSMCs的表型轉(zhuǎn)換的機(jī)制對(duì)于闡明血管增生性疾病的發(fā)病機(jī)理具有重要的理論意義。VSMCs存在合成型和收縮型兩種狀態(tài)。合成型VSMCs內(nèi)線粒體,高爾基體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表達(dá)豐富,具有較強(qiáng)的合成能力。當(dāng)受到外界刺激之后,如機(jī)械損傷、PDGF-BB(platelet derived growth factor-BB)誘導(dǎo)等,正常VSMCs會(huì)激活PI3K、AKT、ERK1/2和MAPK等信號(hào)通路,向合成型VSMCs轉(zhuǎn)換,進(jìn)而引起VSMCs增殖和血管新生內(nèi)膜增生。在正常的生理狀態(tài)下,VSMCs呈收縮型狀態(tài),細(xì)胞呈紡錘形,細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)多種收縮型標(biāo)志基因,如αactin、Mhc11、SM22α和Calponin等,以維持VSMCs的收縮性和血管的彈性。研究表明,VSMCs的表型轉(zhuǎn)換受到血清應(yīng)答因子(serum response factor,SRF)和心肌素(Myocardin)及其結(jié)合的輔因子的共同調(diào)控。血清應(yīng)答因子結(jié)合蛋1(serum response factor binding protein 1,SRFBP1)是SRF的輔因子,有助于調(diào)節(jié)心臟中SRF靶基因的表達(dá),影響心臟的發(fā)育和結(jié)構(gòu)的維持。但是,SRFBP1在VSMCs中的功能及其機(jī)制還不清楚。為探索SRFBP1對(duì)VSMCs表型轉(zhuǎn)換的影響,本課題首先利用大鼠頸動(dòng)脈新生內(nèi)膜形成模型,分析新生內(nèi)膜形成中SRFBP1的表達(dá);進(jìn)而以人主動(dòng)脈VSMCs為研究對(duì)象,利用不同濃度PDGF-BB誘導(dǎo)VSMCs,檢測(cè)SRFBP1以及收縮型VSMCs標(biāo)志蛋白的表達(dá);通過(guò)慢病毒感染的方法構(gòu)建過(guò)表達(dá)或敲低SRFBP1穩(wěn)轉(zhuǎn)VSMCs細(xì)胞系,探究SRFBP1對(duì)VSMCs增殖及收縮型標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響;利用熒光素酶報(bào)告基因法驗(yàn)證SRFBP1對(duì)收縮型VSMCs標(biāo)志基因轉(zhuǎn)錄的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.利用球囊損傷法構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈新生內(nèi)膜形成模型,通過(guò)掃描電鏡和HE染色進(jìn)行鑒定,形態(tài)學(xué)觀察可見手術(shù)組血管內(nèi)膜明顯增生,VSMCs大量增殖。而Western Blotting檢測(cè)結(jié)果表明模型組SRFBP1的表達(dá)較假手術(shù)組有明顯下降,說(shuō)明SRFBP1與VSMCs的增殖呈負(fù)相關(guān),可能參與正常血管收縮表型維持。利用體外培養(yǎng)的人主動(dòng)脈VSMCs,經(jīng)不同濃度PDGF-BB誘導(dǎo),Western Blotting檢測(cè)結(jié)果表明,隨著PDGF-BB濃度的升高,SRFBP1、αactin和SM22α的表達(dá)量均下降。說(shuō)明SRFBP1與收縮型標(biāo)志蛋白的表達(dá)呈正相關(guān),其可能參正常血管收縮表型的維持。2.通過(guò)慢病毒感染的方法,構(gòu)建了陰性對(duì)照(NC)、UP組(SRFBP1過(guò)表達(dá))和DOWN組(SRFBP1敲低)三種穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。MTT法檢測(cè)SRFBP1過(guò)表達(dá)后顯著抑制VSMCs的增殖,而敲低SRFBP1后VSMCs增殖能力顯著增強(qiáng)。Western Blotting結(jié)果顯示:與NC組相比,過(guò)表達(dá)SRFBP1會(huì)使收縮型VSMCs標(biāo)志蛋白SM22α和αactin表達(dá)明顯升高,敲低SRFBP1后顯著降低標(biāo)志蛋白SM22α和αactin的表達(dá)。說(shuō)明SRFBP1可以有效維持VSMCs的收縮表型,抑制VSMCs的增殖。3.構(gòu)建SM22α啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體,將SRFBP1和(或)Myocardin表達(dá)載體與SM22α啟動(dòng)子報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)293T細(xì)胞,分析熒光素酶活性。結(jié)果顯示,Myocardin可以促進(jìn)SM22α的轉(zhuǎn)錄激活,而單獨(dú)SRFBP1并不影響轉(zhuǎn)錄活性,其可以促進(jìn)Myocardin引起的轉(zhuǎn)錄激活。說(shuō)明SRFBP1能協(xié)同Myocardin激活收縮型標(biāo)志基因SM22α的轉(zhuǎn)錄。上述結(jié)果表明,SRFBP1協(xié)同Myocardin激活收縮型標(biāo)志基因轉(zhuǎn)錄,維持VSMCs的收縮型。SRFBP1可能為Myocardin的一種共轉(zhuǎn)錄活性因子,為闡明血管增生性疾病的發(fā)病機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

2圖 1-1 激活 SRF 靶基因的幾種信號(hào)通路[14]ure 1-1 Pathways involes in SRF target gene activat

圖 1-2 Myocardin 結(jié)構(gòu)圖[62]Figure 1-2 Structure map of Myocardin[62]yocardin 在心血管疾病中發(fā)揮的作用究表明，Myocardin 的表達(dá)改變涉及心臟和血管疾病。許多心血管疾病
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Joseph M.Miano;;Myocardin in biology and disease[J];The Journal of Biomedical Research;2015年01期

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本文編號(hào)：2616134