【摘要】：目的:1、探討乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(Diminazene aceturate,DIZE)做為新型的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)激動劑,是否可以內(nèi)源性的激動ACE2。2、觀察DIZE對糖尿病心肌病大鼠心肌的保護(hù)作用,并探討其可能機(jī)制。方法:1、動物模型建立:健康的雄性Wistar大鼠46只,體重約180-200g。將大鼠隨機(jī)分成正常對照組12只和造模組34只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,予以造模組大鼠禁食12 h處理后腹腔一次性注射鏈脲佐菌素65 mg/kg,正常組大鼠腹腔注射相等劑量的檸檬酸鹽緩沖液做對照處理。注射三天后檢測造模組各只大鼠血糖,血糖大于16.7mmol/L者則造模成功。并將造模成功的大鼠隨機(jī)分成DCM組和DIZE治療組。喂養(yǎng)12周后分別給予治療組DIZE 15mg/kg/d,DCM對照組予以等量生理鹽水處理4周。16周末麻醉后行超聲檢測并摘取心肌組織。2、大鼠血糖及體重測定:分別在造模之前,造模成功后及取材之前對各組大鼠進(jìn)行體重和血糖的測定。3、心功能檢測:16周末予以各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛3ml/kg進(jìn)行麻醉,麻醉后使用超聲檢測各組大鼠的心功能。4、ELISA法檢測大鼠心肌中AngⅡ和Ang(1-7)的含量:應(yīng)用ELISA試劑盒測定各組大鼠心肌組織中AngⅡ和Ang(1-7)含量。5、Masson染色法觀察心肌纖維化情況6、免疫組織化學(xué)染色:將組織進(jìn)行石蠟包埋并切片,進(jìn)行collegenⅠ,collegenⅢ,CTGF,IL-1和IL-6免疫組織化學(xué)染色。7、Real-time PCR:進(jìn)行collegenⅠ,collegenⅢ,CTGF基因的熒光定量檢測。8、免疫印跡法(Western blot):取大鼠心肌組織提取總蛋白,電泳檢測心肌中ACE2蛋白的表達(dá),ERK1/2通路的激活情況。結(jié)果:DIZE治療后糖尿病大鼠心肌中的ACE2蛋白表達(dá)顯著增加,AngⅡ含量降低,Ang(1-7)含量升高。DIZE治療組與糖尿病模型組比較膠原含量及L-1,IL-6顯著下降。與正常組比較,糖尿病心肌病組E/A、EF、FS明顯下降,DIZE治療組較DCM組E/A、EF、FS明顯改善。DCM組與N組比較,ERK的磷酸化明顯增加,治療組則減輕了這一變化。結(jié)論:ACE2內(nèi)源性激動劑乙酰甘氨酸重氮氨苯脒顯著提高了ACE2的活性,并可能通過調(diào)節(jié)ACE2-Ang(1-7)-Mas軸,激活ERK1/2通路進(jìn)而改善糖尿病大鼠心功能,抑制心肌纖維化,炎癥及凋亡的發(fā)展。從而對糖尿病心肌病大鼠心功能起到保護(hù)性作用。
【圖文】：

3 心肌病理改變通過 HE 染色觀測各組大鼠心肌形態(tài)。正常組大鼠的心肌細(xì)胞致密整齊，少見肌纖維溶解。DCM 組大鼠心肌細(xì)胞明顯肥大，，并出現(xiàn)心肌纖維斷裂和壞死。DIZE 組與 DC組比較心肌斷裂、壞死程度減輕，心肌纖維形態(tài)較完整。DCM 組心肌橫截面積明顯大于正常組( P ＜ 0.05)，DIZE 治療組橫截面積與 DCM 組比較明顯減小( P ＜ 0.05)。見圖 1。

Figure 1． Myocyte cross-sectional area. *P ＜ 0. 05 vs N group; #P ＜ 0. 05 vs DCgroup．4 各組大鼠心肌纖維化指標(biāo)檢測4.1 Masson 染色Masson 染色后，切片中心肌纖維呈現(xiàn)紅色，而膠原纖維被染成藍(lán)色。正常組大鼠心肌中藍(lán)色膠原纖維呈少量均勻分布。糖尿病心肌病組大鼠心肌間質(zhì)及血管周圍膠原纖維表達(dá)明顯增加，膠原含量相對于正常組差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P ＜ 0.05) 。DIZ治療組經(jīng)過治療后，心肌間質(zhì)膠原纖維明顯減少( P ＜ 0.05)。見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R542.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2604625