【摘要】：背景與目的已明確腎血管性高血壓發(fā)病與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)密切相關,同時也發(fā)現(xiàn)腎血管性高血壓大鼠血清基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)明顯增高,但MMP-9在腎血管性高血壓發(fā)病中的作用尚不清楚。本研究通過JNJ0966特異抑制腎血管性高血壓大鼠模型MMP-9的表達,觀察MMP-9表達的抑制對模型的血壓水平和心血管重構(gòu)的影響,探討MMP-9在腎性高血壓發(fā)病機制中的作用。實驗方法造模:44只SPF級8周齡雄性Sprague Dawley大鼠隨機分成假手術(shù)(8只),雙腎雙夾腎血管性高血壓造模(36只)。術(shù)前禁食12小時,不禁水,行無創(chuàng)尾動脈測血壓、稱重、10%水合氯醛麻醉、開腹。造模組采用銀夾縮窄雙側(cè)腎動脈,假手術(shù)組不縮窄雙側(cè)腎動脈。術(shù)后連續(xù)肌肉注射青霉素3天預防感染。術(shù)后第14天,再次尾動脈測壓,以血壓水平確定造模是否成功。2.實驗分組:將造模成功的大鼠隨機分3組:模型組、低劑量組、高劑量組,取同等數(shù)量的假手術(shù)大鼠作為假手術(shù)組。從造模失敗的大鼠中選取伴腎固縮的大鼠作為造模失敗組。3.實驗方法:假手術(shù)組和模型組大鼠每天給予溶劑(20%的β-羥丙基-環(huán)糊精)lml灌胃,每天1次;低劑量組和高劑量組分別以10mg/kg和30mg/kg的JNJ0966溶于溶劑中1ml灌胃,每天1次。在干預的第8天,重測血壓,然后處死大鼠。取左心室,計算左室重量指數(shù)(LVWI=左室重量/體重);左室心肌組織切片HE染色觀察心肌間質(zhì)和心肌細胞的改變;取腸系膜上動脈和腹主動脈切片HE染色觀察并計算動脈壁腔比,馬松三色染色法(Masson)觀察內(nèi)膜中層膠原纖維面積占比(即膠原容積分數(shù),CVF)。免疫印跡法(Western blotting)檢測心肌組織MMP-9水平;酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測血清MMP-9、AngⅡ水平;尿素酶-谷氨酸脫氫酶法測定血清尿素氮,肌氨酸氧化酶法測血肌酐,酶循環(huán)法測血清半胱氨酸。結(jié)果1.造模及分組情況:術(shù)后第2周末,假手術(shù)組的8只大鼠血壓值[(112.094±8.189)mmHg],雙腎雙夾組有18只血壓值升高[(149.45±8.340)mmHg],達到高血壓診斷標準,造模成功;其余11只造模失敗的血壓值為[(109.369±9.227)mmHg],其中6只伴有腎固縮的造模失敗大鼠血壓為[(108.536±6.412)mmHg。有7只大鼠分別于術(shù)中術(shù)后死亡。分組結(jié)果是:假手術(shù)組、模型組、低劑量組、高劑量組、造模失敗組(伴有腎固縮的造模失敗大鼠)各6只。2.MMP-9特異性抑制劑明顯降低腎血管性高血壓大鼠的血壓水平與模型組[(171.107±15.61)mmHg]比,低劑量組[(138.961±2.741)mmHg]、高劑量組[(133.882±10.54)mmHg]血壓明顯下降(P0.05),但仍明顯高于假手術(shù)組[(114.189±8.495)mmHg](P0.05),高劑量組與低劑量組之間則無顯著性差異(P0.05)。3.MMP-9特異性抑制劑明顯改善腎血管性高血壓大鼠的心室重構(gòu)模型組 LVWI[(2.7678±0.401)mg/g]、心肌細胞橫截面積(3294.17±520.53)明顯高于假手術(shù)組[分別為(1.844±0.129)mg/g、(1653.50±261.37)](P0.05),心肌纖維斷裂。與模型組比低劑量組[分別為(2.278±0.243)mg/g、(1848.83±293.83)]、高劑量組[分別為(2.219±0.233)mg/g、(1656.17±324.61)]這兩項指標明顯下降(P0.05),心肌纖維破壞明顯改善,但低劑量組和高劑量組兩者間差異不顯著(P0.05)。造模失敗組LVMI[(2.086±0.206)mg/g]與假手術(shù)組無明顯差異(P0.05)。4.MMP-9特異性抑制劑明顯改善腎血管性高血壓大鼠的血管重構(gòu)與假手術(shù)組比模型組腸系膜上動脈壁腔比明顯增大[(0.876±0.197)vs(1.127±0.275)],腹主動脈膠原容積分數(shù)明顯減小[(55.103±13.663)vs(41.491 ± 7.603)%](P0.05)。與模型組比,低劑量組(0.825±0.215)和高劑量組(0.853±0.053)腸系膜上主動脈壁腔比明顯減小(P0.05),腹主動脈膠原容積分數(shù)明顯回升[分別為:54.083±5.154)%,(60.072±11.731)%],但低劑量組和高劑量組兩者間差異不顯著(P0.05)。腸系膜上動脈CVF和腹主動脈壁腔比在各組之間差異不顯著(P0.05)。5.腎血管性高血壓大鼠心肌組織MMP-9蛋白水平升高,MMP-9特異性抑制劑明顯降低MMP-9的表達量與假手術(shù)組比,模型組心肌組織中MMP-9蛋白水平明顯增高[(0.120±0.230)vs(3.941±1.904)](P0.05)。經(jīng)干預后,與模型組比,低劑量組(0.153±0.127)和高劑量組(0.003±0.005)心肌組織中MMP-9蛋白水平均明顯降低(P0.05),而與假手術(shù)組相似(P0.05),其中高劑量組也比低劑量組明顯低(P0.05)。6.腎血管性高血壓大鼠血清MMP-9、AngⅡ水平升高,MMP-9特異性抑制劑明顯減低其水平與假手術(shù)組比,模型組血清MMP-9、AngⅡ水平均明顯增高[分別為:(20.036±5.989)vs(37.831± 16.703)ng/ml,(21.575±4.746)vs(27.567±4.716)pg/ml](P0.05)。經(jīng)干預后,與模型組比,低劑量組和高劑量組血清中MMP-9[分別為:(21.715±4.660),(21.890±9.029)ng/ml]、AngⅡ[分別為:(22.032±5.180),(19.151±3.347)pg/ml]水平均明顯降低(P0.05)而與假手術(shù)組相似(P0.05)。低劑量組和高劑量組之間則差異不明顯(P0.05)。7.腎血管性高血壓大鼠血清血肌酐、尿素氮、同型半胱氨酸無明顯異常與假手術(shù)組比,模型組血肌酐、尿素氮以及同型半胱氨酸無明顯差異,低劑量組、高劑量血尿素氮和血肌酐與假手術(shù)組比有所增高[分別為:(6.843±1.820);(6.634± 1.100)vs(4.587±0.808)mmol/L,(38.333±6.218);(39.00±3.00)vs(28.667±6.408)umol/L](P0.05)。而伴腎固縮的造模失敗組大鼠血尿素氮、肌酐和同型半胱氨酸比假手術(shù)組及模型組均明顯增高[分別為:(7.670±0.963)vs(4.587±0.808)和(5.595± 1.222)mmol/L;(40.33±4.590)vs(28.667±6.408)和(30.333±6.831)umol/L;(10.275±1.142)vs(8.010±1.602)和(8.022±0.713)μmol/L](P0.05)。結(jié)論特異性抑制MMP-9的表達可以明顯降低腎血管性高血壓大鼠的血壓及改善心血管系統(tǒng)的重構(gòu),MMP-9升高可能是腎血管性高血壓的發(fā)病機制之一。
【圖文】：

實驗流程圖

分別以假手術(shù)組、造模成功組、和造模失敗組命名。各組術(shù)前基礎血壓、逡逑術(shù)后血壓、術(shù)前術(shù)后血壓差值平均值見下表。各組大鼠血壓在造模前無明顯差異逡逑（Ｐ＞0．0５）。造模成功組血壓在術(shù)后明顯高于假手術(shù)組ＣＰ＜０．０５，表１，圖２）。逡逑表１各組大鼠的收縮壓水平（Ｓ±ｓ，，ｍｍＨｇ）逡逑Ｔａｂｌｅ邋１邋ｓｙｓｔｏｌｉｃ邋ｂｌｏｏｄ邋ｐｒｅｓｓｕｒｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｒａｔｓ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ（邋ｘ±ｓ，ｍｍＨｇ邋）逡逑ｍ＼邋例數(shù)（只）￣￣術(shù)前血壓邐術(shù)后血壓邐差值平均值逡逑邐（術(shù)后－術(shù)前）逡逑假手術(shù)組邐８邐１１１．０９３±１０．３４０邐１１２．０９牡８．１８９邐１．００１逡逑造模成功組邐１８邐１１０．３８３±１０．０９５邐１４９．４５±８．３４０ａｂ邐３９．０７３逡逑造模失敗組邐６邐１０６．７０１±７．８５５邐１０８．５３６±６．４１２邐１．８３５逡逑６逡逑
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R544.1

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本文編號：2602418