【摘要】：背景:高血壓已經(jīng)成為全球重要的健康問(wèn)題之一,全球約1/3成年人患高血壓病,據(jù)估計(jì),僅在2000年時(shí),全球已有約9.72億高血壓人群,而到2025年時(shí)將增長(zhǎng)至15.6億。高血壓可導(dǎo)致全身多個(gè)靶器官損害,而腎臟既是引起高血壓的靶器官,也是高血壓損害的靶器官,高血壓可損傷腎組織的各個(gè)結(jié)構(gòu),包括腎血管、腎小球、腎小管間質(zhì)。同時(shí)可引起足細(xì)胞的損傷與丟失、上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化、腎小管間質(zhì)的纖維化。因此高血壓與腎損傷緊密聯(lián)系,相互影響。近年來(lái)高血壓腎病人發(fā)病率逐年上升,僅次于糖尿病腎病。研究表明高血壓的發(fā)生發(fā)展除與傳統(tǒng)高危因素有關(guān),還與自身交感神經(jīng)活動(dòng)過(guò)度激活、氧化應(yīng)激、RAS系統(tǒng)激活有重要關(guān)系。而去腎交感神經(jīng)術(shù)(RDN)是近年來(lái)治療高血壓的重要手段之一,尤其對(duì)于頑固性高血壓,常規(guī)藥物治療無(wú)效,RDN可產(chǎn)生一定的降壓作用。因此本研究通過(guò),探討RDN術(shù)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的高血壓和腎功能影響及其可能的機(jī)制。為后續(xù)臨床研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:第一部分探討苯酚的合適劑量建立去腎交感神經(jīng)大鼠模型將12周齡SHR大鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組:生理鹽水擦拭腎動(dòng)脈。手術(shù)組:分別用10%苯酚0.5 ml,1ml,1.5ml擦拭腎動(dòng)脈。每周無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)血壓,4周后,處死大鼠,收集血漿測(cè)去甲腎上腺素含量。腎動(dòng)脈、腎神經(jīng)行HE、Masson、PAS染色以及TH、NF200免疫組織化學(xué)染色。第二部分觀察RDN對(duì)交感神經(jīng)活性和氧化應(yīng)激的影響以及RDN術(shù)后高血壓和腎纖維化的變化情況。將12周齡SHR、WKY大鼠隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(SHR sham group)和手術(shù)組(SHR-RDN group、WKY-RDN group),術(shù)前及術(shù)后監(jiān)測(cè)血壓,20周后,處死大鼠,留取血漿、尿液、腎動(dòng)脈、腎組織、下丘腦組織作進(jìn)一步檢測(cè)。第三部分:觀察RDN對(duì)中樞ACE2表達(dá)影響,給予中樞ACE2激動(dòng)劑DIZE和拮抗劑MLN-4760后,觀察ACE2-Ang(1-7)-Mas軸變化情況,探討高血壓及腎纖維化的可能機(jī)制。將12周齡SHR大鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(Sham group)和單純RDN組(RDN group)、ACE2激動(dòng)劑組(RDN+DIZE group)、ACE2抑制劑組(RDN+MLN-4760 group),在第13周時(shí)行RDN術(shù)和側(cè)腦室灌注ACE2激動(dòng)劑和拮抗劑,每周測(cè)動(dòng)脈血壓,4周后,處死大鼠,留取血漿、腎組織下丘腦組織作進(jìn)一步檢測(cè)。結(jié)果:第一部分:1.5ml苯酚組死亡1只大鼠,與腸梗阻有關(guān)。術(shù)后一月內(nèi),與對(duì)照組相比,1.5ml苯酚組收縮壓逐漸增高(P0.01),而1ml苯酚組收縮壓顯著降低(P0.01),0.5ml組與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。腎組織NE含量:對(duì)照組、0.5ml組、1.5ml組比較無(wú)差異(P0.05),而1ml組明顯降低(P0.01)。病理檢查:對(duì)照組腎交感神經(jīng)正常,0.5ml苯酚組輕度損傷,而1ml組、1.5ml組出現(xiàn)中度至重度損傷伴中度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化,核空泡化,核萎縮,同時(shí)部分神經(jīng)細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)消失,腎動(dòng)脈損傷評(píng)分分別為0.44±0.3 vs 3.46±0.3 vs 3.66±0.2,P0.01。表明1ml苯酚能夠有效腐蝕腎交感神經(jīng),降低血壓,降低腎組織中NE含量,成功建立RDN模型,對(duì)腎動(dòng)脈無(wú)顯著損傷。第二部分:與對(duì)照組相比,SHR-RDN組在術(shù)后第17周、21周、25周、29周時(shí)收縮壓顯著降低(P0.05),但第33周時(shí)血壓逐漸升高,比較無(wú)差異(P0.05)。血漿PRA、Ang II、ALD、NADPH顯著降低(P0.05),e NOS、NO、顯著升高(P0.05)。24h蛋白尿顯著降低(P0.001)。病理檢測(cè):SHR-RDN組較對(duì)照組腎小球硬化顯著減輕,腎小球評(píng)分GS明顯降低(P0.01);腎小管間質(zhì)纖維化顯著減輕,間質(zhì)纖維化面積百分比降低(P0.01);下丘腦室旁核TH陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著降低(P0.001)。表明采用1ml苯酚化學(xué)消融RDN術(shù)不能完全降低血壓,只能延緩血壓進(jìn)展,同時(shí)RDN顯著降低中樞及外周循環(huán)內(nèi)交感神經(jīng)活性和氧化應(yīng)激。這可能是RDN延緩高血壓進(jìn)展,改善腎小球硬化小管間質(zhì)纖維化的機(jī)制之一。第三部分:與對(duì)照組相比,RDN組收縮壓顯著降低。而與RDN組相比,RDN+DIZE組收縮壓則進(jìn)一步降低(168±8.1 vs 151.8±13.6,P0.05),RDN+MLN-4760組收縮壓顯著升高(168±8.1 vs 182.6±7.1,P0.05)。免疫熒光和WB:與對(duì)照組相比,RDN術(shù)后下丘腦PVN中ACE2、Mas明顯表達(dá)上調(diào)(P0.05),而ACE1、AT1R明顯下調(diào)(P0.05)。在給予中樞DIZE后,與RDN組相比,RDN+DIZE組下丘腦PVN中ACE2、Mas表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)(1.58±0.026 vs 1.76±0.027;1.57±0.026 vs 2.313±0.037,P0.05),而ACE1、AT1R進(jìn)一步下調(diào)(P0.05);在RDN+MLN-4760組中,下丘腦PVN中ACE2、Mas表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)(1.58±0.026 vs 0.5±0.021;1.57±0.026 vs 1.195±0.015,P0.05),ACE1、AT1R表達(dá)上調(diào)。病理檢測(cè):與RDN組相比,RDN-DIZE組腎小球硬化顯著減輕,GS明顯下降(1.42±0.25 vs0.44±0.27,P0.05)。而RDN-MLN-4760腎小球硬化加重,GS明顯增高(1.42±0.25 vs 1.65±0.30,P0.05)表明中樞激活A(yù)CE2能夠降低血壓,緩解腎小球硬化進(jìn)展。結(jié)論:采用苯酚腐蝕神經(jīng)法建立RDN大鼠模型,且RDN術(shù)可延緩SHR大鼠高血壓進(jìn)展,改善腎功能。其機(jī)制主要與抑制中樞交感神經(jīng)活性、減輕氧化應(yīng)激、上調(diào)下丘腦室旁核內(nèi)ACE2表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

若符合正態(tài)分布且方差齊，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單方差分析，組間多重比較采用 LSD-t 檢驗(yàn)，，等級(jí)資料比較采用非參數(shù)檢ruskal-Wallis H 法，P<0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。.5 結(jié)果.5.1 存活率1.5ml 苯酚組術(shù)后第 9 天死亡 1 只大鼠，死因?yàn)楦骨桓腥�，腸梗阻；其他無(wú)死亡。.5.2 各組大鼠收縮壓 RDN 術(shù)前與術(shù)后的變化術(shù)前，SHR 大鼠基線血壓各組間無(wú)顯著差異（P > 0.05），RDN 術(shù)后 1 周術(shù)組包括 0.5ml、1ml、1.5ml 苯酚組，較對(duì)照組明顯降低（P < 0.01）。術(shù)后內(nèi)，1.5ml 苯酚組較對(duì)照組收縮壓逐漸增高（P < 0.01），而 1ml 苯酚組顯著（P < 0.01），0.5ml 苯酚組與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。（見(jiàn)圖 1

圖 1-2 不同劑量苯酚 RDN 術(shù)對(duì)腎組織 NE 含量的影響1-2 Effect of RDN with different dose of phenol on renal NE in * P < 0.01 vs sham group對(duì)腎動(dòng)脈損傷評(píng)估左側(cè)腎動(dòng)脈進(jìn)行HE，Masson，PAS染色后發(fā)現(xiàn)：對(duì)組動(dòng)脈內(nèi)膜未見(jiàn)明顯增生，血管內(nèi)皮及內(nèi)膜下彈力膜明顯增厚并向管腔突出，血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，平滑，中膜平滑肌增生，血壁破壞伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)圖5ml苯酚組中重度損傷，其余各組正常至輕度損傷。（腎交感神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化色下，對(duì)照組為腎交感神經(jīng)正常，0.5ml 苯酚組腎交潤(rùn)，神經(jīng)束外膜破裂不完整，而 1ml 組、1.5ml 組腎浸潤(rùn)及纖維化，核空泡化，核萎縮，同時(shí)部分神經(jīng)細(xì)
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 王鳴;韓文正;關(guān)韶峰;翟馨蓉;方唯一;曲新凱;;不同劑量苯酚去腎交感神經(jīng)術(shù)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響[J];中國(guó)心血管病研究;2017年11期

本文編號(hào)：2598505