【摘要】：研究背景：慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)患者室性心律失常(ventricular arrhythmia, VA)和心臟性猝死(sudden cardiac death, SCD)的發(fā)生具有明顯的晝夜節(jié)律特征。該現(xiàn)象是由中樞生物鐘通過自主神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控的,直至近年有證據(jù)提示心臟生物鐘能夠調(diào)控離子通道和心律失常的發(fā)生,但這些研究都是基于正常或轉(zhuǎn)基因動物,并沒有在慢性心力衰竭的病理狀態(tài)下進(jìn)行研究。目的：本研究旨在探討心臟生物鐘在慢性心衰VA發(fā)生中的作用及分子機制,為尋找慢性心衰VA和SCD新的治療方式與干預(yù)靶點提供依據(jù)。方法：(1)通過主動脈縮窄的方法構(gòu)建慢性心衰豚鼠模型。采用RT-PCR方法檢測CHF時心臟生物鐘(CLOCK、BMAL1、PER1、NR1D2和DBP)的節(jié)律特征。(2)通過程序性電刺激(programmed electrical stimulation,PES)及異丙腎上腺素(isoprenaline,ISO)誘發(fā)VA的發(fā)生,觀察CHF豚鼠VA的節(jié)律性由哪個β-AR介導(dǎo)?(3)使用RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測CHF時β-AR的節(jié)律特征及其與心臟生物鐘節(jié)律的聯(lián)系。(4)使用腺病毒轉(zhuǎn)染、電場刺激及膜片鉗技術(shù)觀察心肌細(xì)胞CLOCK-BMAL1對豚鼠心肌細(xì)胞動作電位時程及心律失常的作用。(5)使用腺病毒轉(zhuǎn)染、染色質(zhì)免疫共沉淀及熒光素酶報告基因的方法來證實CLOCK-BMAL1在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控β-AR的表達(dá)。結(jié)果：(1) CLOCK(周期為24,相位為18,振幅為0.29)、BMAL1(周期為24,相位為16,振幅為1.34)和PER1(周期為24,相位為4,振幅為0.24)等心臟生物鐘因子均表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性(P0.05),并且在CHF時仍然維持節(jié)律性。(2)灌流ISO時及ISO+選擇性p2-AR阻滯劑(ICI118551)時,心衰組CT3(豚鼠睡眠期)的VA發(fā)生率明顯高于心衰組CT15(豚鼠活動期)(P0.05；ISO組HF-CT3:HF-CT15=100%:60%;ISO+ICI組HF-CT3:HF-CT15 =80%:40%);使用選擇性p1-AR阻滯劑(CGP-20712A)時,心衰組CT3及CT15間VA發(fā)生率沒有顯著差異(P0.05,HF-CT3:HF-CT15=26.7%: 26.7%).(3) β 1-AR表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性(P0.05,周期為24,相位為20,振幅為0.18),此外,心衰組β 1-AR的平均表達(dá)量顯著降低(P0.05)。(4) CLOCK-BMALl高表達(dá)組的VA發(fā)生率顯著升高(P0.05),APD顯著延長(P0.05), β1-AR的蛋白表達(dá)量顯著增高(P0.05)。(5) CLOCK-BMAL1能夠結(jié)合到β 1-AR上游的啟動子(-741bp和-806bp)誘導(dǎo)其表達(dá)。結(jié)論：(1)CHF時豚鼠的心臟生物鐘仍保持正常心臟生物鐘的晝夜節(jié)律特征。(2) CLOCK-BMAL1能夠在轉(zhuǎn)錄水平增強β 1-AR的功能,從而調(diào)控慢性心力衰竭時的室性心律失常發(fā)生。
【圖文】：

圖１必臟塵物鐘的運行機制逡逑ＢＭＡＬ１和ＣＬＯＣＫ被轉(zhuǎn)錄并翻譯為蛋白后形成二聚體結(jié)合到Ｅ－ｂｏｘX椙孔由洗馘義轄妹瘢�、ＰＥuⅲ危遙保模保埠推淥鎦涌刂蘋潁ǎ悖歟鎰牽悖錚睿簦潁錚歟歟澹洌紓澹睿澹�，，ＣＣ咯。辶x希茫遙俸停校牛業(yè)鞍自詘詒粁鎪嶧笠貧槳四諞種疲攏停粒蹋焙停茫蹋希茫擻斟義系嫉淖�。辶x希遙牛鄭牛遙洛澹幔鸞岷希遙遙乓種疲攏停粒盞淖跡魑恢侄鍆獾母悍蠢』莆皺義獻(xiàn)毆顯嗌鎦酉低車奈榷�。辶x鮮塹ヒ壞撓芍惺嗌鎦油ü災(zāi)魃窬低車骺氐模校�，直謨牲年昌嬓证据提示屯、脏辶x仙鎦櫻ǎ茫蹋埃茫耍攏停粒蹋保┠芄壞骺贗�、脏也聣劎常的发生，首淆x眩約淦誑冢罰蕁㈠義媳厥矣行Р揮ζ冢校櫻歟準(zhǔn)案骼嗬胱油ǖ賴謀澩錛襖胱擁緦鰨校祝保本硐殖雒饗緣膩義蟎鲆菇諑桑黃浯�，屯、肌细胞特异性n停粒蹋鼻貿(mào)∈螅ǎ悖幔潁洌椋錚恚錚悖簦澹螅穡澹悖椋媯椋沐義

本文編號：2567976