本文關(guān)鍵詞：生物鐘基因Per2、Bmal1在腫瘤細(xì)胞系Raji、Hut、OCI-LY8及HL-60中的晝夜表達(dá)規(guī)律，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的 探索血液系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系中生物鐘基因Bmal1及Per2在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)情況，明確體外培養(yǎng)條件下的血液系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系中是否存在生物鐘基因轉(zhuǎn)錄水平上的晝夜波動(dòng)，并對(duì)其轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行以時(shí)間為變量的余弦函數(shù)擬合，以預(yù)測(cè)體外培養(yǎng)條件下生物鐘基因轉(zhuǎn)錄的高峰和低谷時(shí)段，為進(jìn)一步研究血液系統(tǒng)腫瘤發(fā)生、發(fā)展與鐘基因的關(guān)系提供理論基礎(chǔ)。 研究對(duì)象和方法 1研究對(duì)象 1）人伯基特淋巴瘤Raji細(xì)胞系；2）人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤Hut-78細(xì)胞系；3）彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY8細(xì)胞系；4）髓系白血病HL-60細(xì)胞系。 2方法 2.1細(xì)胞培養(yǎng) 四種細(xì)胞系分別接種于含10%胎牛血清的RIPA1640培養(yǎng)基，并在C02、37℃培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，間隔2-3天換液。 2.2生物鐘基因節(jié)律表達(dá)的同步誘導(dǎo) 細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定時(shí)(對(duì)數(shù)期內(nèi))更換含0.5%胎牛血清的RIPA1640培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓培養(yǎng)2天，饑餓培養(yǎng)后更換培養(yǎng)基為50%胎牛血清的PIRA1640培養(yǎng)基培養(yǎng)進(jìn)行血清休克誘導(dǎo)同步節(jié)律的產(chǎn)生，并將此時(shí)刻時(shí)間記為ZT0，2小時(shí)后更換無(wú)血清培養(yǎng)基。按照時(shí)間順序，將ZT0時(shí)刻后4小時(shí)計(jì)為ZT4，8小時(shí)后計(jì)為ZT8，以此類推。 2.3測(cè)定mRNA含量 在ZT（0、4、8、12、16、20、24）時(shí)刻分別使用Trizol提取不同細(xì)胞系的總RNA，檢測(cè)RNA純度和完整性；使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA；應(yīng)用Real-timePCR定量測(cè)定Per2、Bmal1mRNA的表達(dá)。 2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 將目的基因的Ct值與內(nèi)參基因Ct值的差值△Ct作為基因的相對(duì)表達(dá)水平。對(duì)同種細(xì)胞同種基因在不同時(shí)間點(diǎn)的△Ct值進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)符合條件的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)采用Mean±SD表示，P0.05為差異具有顯著性。通過(guò)方差分析判定差異有顯著性的基因則進(jìn)行余弦節(jié)律擬合。應(yīng)用余弦分析軟件和CronoLab軟件獲取節(jié)律性參數(shù)，用于擬合的余弦函數(shù)方程為F（t）=M+Acos(ωt+φ)其中M為中值；A為節(jié)律震蕩的振幅；φ為峰值相位，是震蕩達(dá)到峰值的時(shí)刻所換算出的角度，根據(jù)ω角度（360°/24h）可將其換算成ZT時(shí)點(diǎn) 結(jié)果 1.血清休克法節(jié)律誘導(dǎo)的Raji細(xì)胞中生物鐘基因Bmal1在一天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），認(rèn)為無(wú)法通過(guò)血清休克法誘導(dǎo)Raji細(xì)胞內(nèi)Bmal1基因的節(jié)律性表達(dá)；血清休克法可誘導(dǎo)的OCI-LY8、Hut-78、HL-60細(xì)胞中生物鐘基因Bmal1與Per2及Raji細(xì)胞中生物鐘基因Per2在一天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)mRNA轉(zhuǎn)錄水平存在晝夜節(jié)律性，且這種細(xì)胞內(nèi)生物鐘基因表達(dá)的節(jié)律性可用余弦函數(shù)來(lái)進(jìn)行的大致描述； 2.應(yīng)用余弦分析軟件及CronoLab軟件進(jìn)行余弦方程擬合，，將同種細(xì)胞同種基因轉(zhuǎn)錄mRNA的量在一天內(nèi)的相對(duì)變化情況擬合為以時(shí)間t（小時(shí)）為變量的余弦函數(shù)，可得余弦方程為：OCI-LY8細(xì)胞轉(zhuǎn)錄Bmal1可擬合為F（t）=13.9+5.4cos（15t），轉(zhuǎn)錄Per2可擬合為F（t）=9.6+4.1cos（22.5t+90）；Hut-78細(xì)胞轉(zhuǎn)錄Bmal1可擬合為F（t）=10.6+6.0cos（45t+180），轉(zhuǎn)錄Per2可擬合為F（t）=7.5+5.0cos（15t+180）；HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)錄Bmal1可擬合為F（t）=18.9+3.5cos（22.5t+180），轉(zhuǎn)錄Per2可擬合為F（t）=7.0+3.6cos（15t+240）；Raji細(xì)胞轉(zhuǎn)錄Per2可擬合為F（t）=9.6+3.6cos（15t+180）； 3.通過(guò)余弦函數(shù)可知OCI-LY8的Bmal1基因轉(zhuǎn)錄水平大致以24小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT0和ZT12，Per2基因的轉(zhuǎn)錄水平大致以16小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT12和ZT4；Hut-78細(xì)胞的Bmal1基因轉(zhuǎn)錄水平大致以8小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT4和ZT8，Per2基因的轉(zhuǎn)錄水平大致以24小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT12和ZT0；HL-60細(xì)胞Bmal1基因的轉(zhuǎn)錄水平大致以16小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT0和ZT8，Per2基因的轉(zhuǎn)錄水平大致以24小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT8和ZT20；Raji細(xì)胞Per2基因的轉(zhuǎn)錄水平大致以24小時(shí)為波動(dòng)周期，其峰值時(shí)段和谷值時(shí)段分別位于ZT12和ZT0； 結(jié)論 1.體外培養(yǎng)條件下可通過(guò)血清休克法誘導(dǎo)生物鐘基因Bmal1和Per2在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY8細(xì)胞系、人皮膚T淋巴瘤Hut-78細(xì)胞系、髓系白血病HL-60細(xì)胞系中轉(zhuǎn)錄水平上的節(jié)律性表達(dá)及Per2在人伯基特淋巴瘤Raji細(xì)胞系中轉(zhuǎn)錄水平的節(jié)律性表達(dá),而不能誘導(dǎo)Bmal1在人伯基特淋巴瘤Raji細(xì)胞系中轉(zhuǎn)錄水平的節(jié)律性表達(dá)。 2.生物鐘基因Bmal1與Per2在多種血液系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄水平上的節(jié)律性表達(dá)規(guī)律依細(xì)胞種類不同而有差異。但均可用余弦函數(shù)進(jìn)行大致的描述。
【關(guān)鍵詞】：生物鐘基因 晝夜節(jié)律 Bmal1 Per2
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R733
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫一覽表11-12
• 引言12-15
• 材料和方法15-21
• 結(jié)果21-27
• 討論27-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述 生物鐘基因晝夜節(jié)律表達(dá)規(guī)律的研究進(jìn)展43-64
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65
• 致謝65

  本文關(guān)鍵詞：生物鐘基因Per2、Bmal1在腫瘤細(xì)胞系Raji、Hut、OCI-LY8及HL-60中的晝夜表達(dá)規(guī)律，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：254766