【摘要】：目的探討沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)對(duì)氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相關(guān)的分子機(jī)制。方法用組織貼塊法體外培養(yǎng)原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成。檢測(cè)SIRT1在ox-LDL刺激不同時(shí)間(24、48、72 h)的表達(dá)變化。SIRT1的活性調(diào)控分別應(yīng)用SIRT1激動(dòng)劑(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制劑(nicotinamide,Nic,100μmol/L)進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)24 h后采用Western blot檢測(cè)VSMC過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、�；o酶A:膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶1(A-cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)的蛋白表達(dá),干預(yù)48 h后采用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞形成情況。應(yīng)用PPARγ激動(dòng)劑(Rosiglitazone,RSG,50μmol/L)和抑制劑(GW9662,10μmol/L)調(diào)控PPARγ的表達(dá),Western blot檢測(cè)VSMC中ACAT1的表達(dá)。結(jié)果 1ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC泡沫細(xì)胞中,SIRT1蛋白表達(dá)在48 h降低約47%(P0.01);油紅O染色顯示,SRT可以抑制VSMC泡沫細(xì)胞形成,而Nic可逆轉(zhuǎn)SRT的抑制作用;2ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC泡沫細(xì)胞中ACAT1的表達(dá)顯著增加[(2.77±0.70),P0.01],SIRT1激動(dòng)劑SRT可顯著抑制ACAT1的表達(dá)[(0.90±0.27),P0.01],而SIRT1抑制劑Nic可阻斷這一作用,升高ACAT1的表達(dá)[(2.25±0.37),P0.05];3ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC泡沫細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)減少[(0.73±0.12),P0.05],SIRT1激動(dòng)劑SRT可上調(diào)VSMC中PPARγ的表達(dá)[(0.98±0.16),P0.05],SIRT1抑制劑Nic抑制PPARγ的表達(dá)[(0.47±0.13),P0.01];4PPARγ激動(dòng)劑RSG可抑制ACAT1的表達(dá)[(0.73±0.09),P0.01],而PPARγ抑制劑GW9662則上調(diào)ACAT1表達(dá)[(1.68±0.09),P0.01]。結(jié)論 SIRT1通過上調(diào)VSMC中PPARγ表達(dá)而抑制ACAT1表達(dá),從而抑制ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC泡沫樣變。
【圖文】：

。1．2．4油紅O染色VSMC以2×105/孔定量接種于24孔板中，無血清DMEM饑餓24h，再將VSMC分為空白對(duì)照組、ox-LDL組、SRT+ox-LDL組、SRT+Nic+ox-LDL組，培養(yǎng)48h。取出后，用PBS液漂洗2次，4%多聚甲醛固定30min，油紅O避光染色，蒸餾水清洗，，倒置顯微鏡下觀察。1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS18．0統(tǒng)計(jì)軟件，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以xs

本文編號(hào)：2533532