【摘要】：【研究背景】高血壓是一種以體循環(huán)動(dòng)脈壓升高為主要特點(diǎn),由基因遺傳、環(huán)境及多種危險(xiǎn)因素相互作用所導(dǎo)致的全身性疾病,它是最常見的慢性病,也是心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)最主要的危險(xiǎn)因素,作為冠心病、心力衰竭、腦卒中及慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD)的主要并發(fā)癥,不但致殘、致死率高,且嚴(yán)重消耗醫(yī)療和社會(huì)資源,給家庭和社會(huì)造成沉重負(fù)擔(dān)。高血壓性心臟病是指長期血壓控制不佳而引起的左心室肥厚和左心室舒張功能減退,進(jìn)而進(jìn)展為心力衰竭的疾病。高血壓性左心室肥厚(Hypertensive left ventricular hypertrophy,HTN-LVH)是高血壓性心臟病的特征性表現(xiàn)之一。左心室肥厚的發(fā)生、發(fā)展常引起心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)障礙,甚至引起猝死。因此,及早發(fā)現(xiàn)、及時(shí)診斷治療在高血壓性心臟病患者的預(yù)后中顯得十分重要[1]。臨床上一般使用心臟超聲作為其首要診斷措施,雖然它能基本滿足人們的診療需求,但在正確率和檢出率的限制性上仍然促使人們?nèi)ヌ剿鞲_的診療方法。近年來,研究者發(fā)現(xiàn)血液中微小RNA對(duì)其診斷有重要參考價(jià)值,微小RNA(microRNA,miRNA)是一類內(nèi)源性的非編碼單鏈小RNA,它包含20-25個(gè)核苷酸序列,具有時(shí)間、空間特異性和器官特異性,通一系列核酸酶剪切與加工而產(chǎn)生,隨后組裝進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體,通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA,并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。有大量動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)報(bào)道,miRNA的調(diào)控在血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、腫瘤等眾多領(lǐng)域的研究取得了突破性進(jìn)展,同樣,在心臟發(fā)育、心律失常以及心肌肥厚等病理和生理過程中同樣發(fā)揮著重要的作用。例如,Fish等研究發(fā)現(xiàn)miRNA-166表達(dá)不僅與血管發(fā)育的過程有關(guān),而且與血管完整性的保持和血管生成息息相關(guān)。Schneider等研究指出在胚胎時(shí)期的心肌細(xì)胞中miR-1分子特異性表達(dá),而心臟瓣膜和血管的形成則與miR-199有關(guān)。Thum等實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,mir-21通過抑制SH1基因激活ERK-MAP信號(hào)通路導(dǎo)致生長因子的分泌和成纖維細(xì)胞的活化,擴(kuò)大心臟纖維化。同樣在心肌肥厚方面,有報(bào)道指出miRNA-27b可通過作用于靶分子MMP13(金屬基質(zhì)蛋白酶13)使心肌肥厚,同時(shí)上調(diào)心臟組織中膠原分子COLI和COLIII表達(dá)。有也研究發(fā)現(xiàn)miR-27b能直接靶向作用于過氧化物酶體增殖物激活受體--γ(PPARγ)抑制其表達(dá),導(dǎo)致心肌肥大和心功能障礙等。雖然對(duì)于具體促進(jìn)心肌肥大機(jī)制并沒有達(dá)到共識(shí),但在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),人為加入miR-27b共培養(yǎng)的心肌細(xì)胞明顯比沒有加入miR-27b培養(yǎng)的心肌細(xì)胞肥大。在探索miRNA與心肌肥厚關(guān)系的同時(shí),人們對(duì)miRNA的運(yùn)載方式研究也日益深入。大量報(bào)道指出,miRNA的轉(zhuǎn)運(yùn)是以一種特殊的方式進(jìn)行---外泌體(exosome)。exosome是由細(xì)胞分泌的具有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的直徑約30-100nm的微囊泡,幾乎所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,其內(nèi)部攜帶著不同狀態(tài)下細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和長鏈非編碼RNA(lncRM)等物質(zhì)。研究表明,它們可以介導(dǎo)一定距離細(xì)胞間物質(zhì)交換。這一交換是以細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)mRNA或miRNA(信使RNA或微小RNA)被包裹入外泌體并向細(xì)胞外環(huán)境中釋放為基礎(chǔ)的[2]。外泌體的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)可以保護(hù)其內(nèi)容物不被循環(huán)中的蛋白酶以及核酸酶降解[3],比血漿中存在的miRNA更穩(wěn)定。近年來,研究者們對(duì)外泌體的分泌和轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行了深入探索,以求阻斷其致使心肌肥厚的途徑[2-4]。基于以上發(fā)現(xiàn),本課題組推測(cè)外泌體中的miR-27b表達(dá)量的升高可能提示存在高血壓左心室肥厚的風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,收集人類血液標(biāo)本,去探索高血壓患者中外泌體中miR-27b與心肌肥厚之間的關(guān)系。【研究目的】探討外泌體中miR-27b在高血壓患者中表達(dá)水平以及對(duì)診斷HTN-LVH的參考價(jià)值�！狙芯糠椒ā�1.收集標(biāo)本本研究嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn),收集2015年4月至2017年1月期間就診于廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院內(nèi)科住院部的患者,一共收集到94例符合本研究的患者,將其分為HTN-LVH組(n=38)和高血壓無肥厚的對(duì)照組(n=56)兩組。入院后收集所有患者的年齡、性別、體重、吸煙、飲酒、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、糖化血紅蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、總甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、血肌酐、乳酸脫氫酶、B型腦鈉肽、左室內(nèi)徑、右室內(nèi)徑、左心室后壁厚度、室間隔厚度和左室射血分?jǐn)?shù)。并于次日清晨空腹抽取患者的靜脈血,用裝有枸櫞酸鈉抗凝劑的試管裝載。2.保存和提取于采集到病人血液后2小時(shí)內(nèi)離心,去掉紅細(xì)胞、血小板和一些大碎片物質(zhì),將離心后的血漿置于-80℃冰箱凍存,待最后一起解凍。將每個(gè)樣品分成兩組,一組為200ul血漿檢測(cè)其中總miRNAs,另一組取2000ul后提取外泌體,再測(cè)其miRNAs。3.逆轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR將全部樣本一起逆轉(zhuǎn)錄,采用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分別檢測(cè)每個(gè)樣本中miR-27b的相對(duì)表達(dá)量。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,分別進(jìn)行方差齊性和正態(tài)性檢驗(yàn),符合方差齊性和正態(tài)齊性分布的計(jì)量資料可用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示結(jié)果,對(duì)于不符合者則可運(yùn)用中位數(shù)表示。HTN-LVH組和高血壓無肥厚組間miR-27b相對(duì)表達(dá)量差異比較可以運(yùn)用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì),外泌體所占血漿的比值在兩者間的區(qū)別同樣運(yùn)用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。使用Pearson相關(guān)分析法探究外泌體中miRNA-27b與室壁厚度的關(guān)系。使用受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve,ROC曲線)評(píng)估外泌體中miR-27b對(duì)心肌肥厚的診斷價(jià)值。所有分析檢驗(yàn)方法中統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果均以P0.05為差異具有意義�！窘Y(jié)果】1.高血壓性左心室肥厚組血漿和外泌體中miR-27b的相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組顯著增高(P0.05)。2.在HTN-LVH組,外泌體中miR-27b表達(dá)水平與IVSd和LVPWd呈正相關(guān)(P0.05),相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.55和0.60。3.外泌體中miRNA-27b表達(dá)量曲線下面積(AUC)為0.96,敏感度為86.7%,特異度為96.7%;血漿中AUC則為0.86,敏感度為73.3%,特異度80%。【結(jié)論】1.血漿及外泌體中miR-27b的相對(duì)表達(dá)量與高血壓性左心室肥厚成正相關(guān),血漿或外泌體中miR-27b升高提示存在高血壓性左心室肥厚的風(fēng)險(xiǎn)。2.外泌體中miR-27b比血漿中的靈敏度和特異度更高。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳菊清;歐陽偉;馮會(huì)娟;孫云鋼;李師思;陳盼;冼嘉朗;黃柳華;;miRNA-208b在SD大鼠腹主動(dòng)脈縮窄心肌肥厚中的表達(dá)[J];廣東醫(yī)學(xué);2014年14期

2 胡玉萍;袁建平;張舸洋;王曉娜;;替米沙坦與硝苯地平聯(lián)合應(yīng)用治療高血壓性心臟病的療效觀察[J];吉林醫(yī)學(xué);2010年30期

，

本文編號(hào)：2467901