【摘要】：【研究背景】高血壓是一種以體循環(huán)動脈壓升高為主要特點,由基因遺傳、環(huán)境及多種危險因素相互作用所導致的全身性疾病,它是最常見的慢性病,也是心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)最主要的危險因素,作為冠心病、心力衰竭、腦卒中及慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD)的主要并發(fā)癥,不但致殘、致死率高,且嚴重消耗醫(yī)療和社會資源,給家庭和社會造成沉重負擔。高血壓性心臟病是指長期血壓控制不佳而引起的左心室肥厚和左心室舒張功能減退,進而進展為心力衰竭的疾病。高血壓性左心室肥厚(Hypertensive left ventricular hypertrophy,HTN-LVH)是高血壓性心臟病的特征性表現(xiàn)之一。左心室肥厚的發(fā)生、發(fā)展常引起心臟傳導系統(tǒng)障礙,甚至引起猝死。因此,及早發(fā)現(xiàn)、及時診斷治療在高血壓性心臟病患者的預后中顯得十分重要[1]。臨床上一般使用心臟超聲作為其首要診斷措施,雖然它能基本滿足人們的診療需求,但在正確率和檢出率的限制性上仍然促使人們?nèi)ヌ剿鞲_的診療方法。近年來,研究者發(fā)現(xiàn)血液中微小RNA對其診斷有重要參考價值,微小RNA(microRNA,miRNA)是一類內(nèi)源性的非編碼單鏈小RNA,它包含20-25個核苷酸序列,具有時間、空間特異性和器官特異性,通一系列核酸酶剪切與加工而產(chǎn)生,隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體,通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA,并根據(jù)互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。有大量動物和實驗研究文獻報道,miRNA的調(diào)控在血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、腫瘤等眾多領域的研究取得了突破性進展,同樣,在心臟發(fā)育、心律失常以及心肌肥厚等病理和生理過程中同樣發(fā)揮著重要的作用。例如,Fish等研究發(fā)現(xiàn)miRNA-166表達不僅與血管發(fā)育的過程有關,而且與血管完整性的保持和血管生成息息相關。Schneider等研究指出在胚胎時期的心肌細胞中miR-1分子特異性表達,而心臟瓣膜和血管的形成則與miR-199有關。Thum等實驗結果示,mir-21通過抑制SH1基因激活ERK-MAP信號通路導致生長因子的分泌和成纖維細胞的活化,擴大心臟纖維化。同樣在心肌肥厚方面,有報道指出miRNA-27b可通過作用于靶分子MMP13(金屬基質(zhì)蛋白酶13)使心肌肥厚,同時上調(diào)心臟組織中膠原分子COLI和COLIII表達。有也研究發(fā)現(xiàn)miR-27b能直接靶向作用于過氧化物酶體增殖物激活受體--γ(PPARγ)抑制其表達,導致心肌肥大和心功能障礙等。雖然對于具體促進心肌肥大機制并沒有達到共識,但在細胞實驗中發(fā)現(xiàn),人為加入miR-27b共培養(yǎng)的心肌細胞明顯比沒有加入miR-27b培養(yǎng)的心肌細胞肥大。在探索miRNA與心肌肥厚關系的同時,人們對miRNA的運載方式研究也日益深入。大量報道指出,miRNA的轉(zhuǎn)運是以一種特殊的方式進行---外泌體(exosome)。exosome是由細胞分泌的具有脂質(zhì)雙分子層膜結構的直徑約30-100nm的微囊泡,幾乎所有的細胞都能分泌外泌體,其內(nèi)部攜帶著不同狀態(tài)下細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和長鏈非編碼RNA(lncRM)等物質(zhì)。研究表明,它們可以介導一定距離細胞間物質(zhì)交換。這一交換是以細胞內(nèi)遺傳物質(zhì)mRNA或miRNA(信使RNA或微小RNA)被包裹入外泌體并向細胞外環(huán)境中釋放為基礎的[2]。外泌體的脂質(zhì)雙分子層結構可以保護其內(nèi)容物不被循環(huán)中的蛋白酶以及核酸酶降解[3],比血漿中存在的miRNA更穩(wěn)定。近年來,研究者們對外泌體的分泌和轉(zhuǎn)導機制進行了深入探索,以求阻斷其致使心肌肥厚的途徑[2-4]�；谝陨习l(fā)現(xiàn),本課題組推測外泌體中的miR-27b表達量的升高可能提示存在高血壓左心室肥厚的風險。本實驗在動物實驗的基礎上,收集人類血液標本,去探索高血壓患者中外泌體中miR-27b與心肌肥厚之間的關系�！狙芯磕康摹刻接懲饷隗w中miR-27b在高血壓患者中表達水平以及對診斷HTN-LVH的參考價值�！狙芯糠椒ā�1.收集標本本研究嚴格按照納入標準和剔除標準,收集2015年4月至2017年1月期間就診于廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院內(nèi)科住院部的患者,一共收集到94例符合本研究的患者,將其分為HTN-LVH組(n=38)和高血壓無肥厚的對照組(n=56)兩組。入院后收集所有患者的年齡、性別、體重、吸煙、飲酒、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、糖化血紅蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、總甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、血肌酐、乳酸脫氫酶、B型腦鈉肽、左室內(nèi)徑、右室內(nèi)徑、左心室后壁厚度、室間隔厚度和左室射血分數(shù)。并于次日清晨空腹抽取患者的靜脈血,用裝有枸櫞酸鈉抗凝劑的試管裝載。2.保存和提取于采集到病人血液后2小時內(nèi)離心,去掉紅細胞、血小板和一些大碎片物質(zhì),將離心后的血漿置于-80℃冰箱凍存,待最后一起解凍。將每個樣品分成兩組,一組為200ul血漿檢測其中總miRNAs,另一組取2000ul后提取外泌體,再測其miRNAs。3.逆轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR將全部樣本一起逆轉(zhuǎn)錄,采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(Quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分別檢測每個樣本中miR-27b的相對表達量。4.統(tǒng)計學分析運用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,分別進行方差齊性和正態(tài)性檢驗,符合方差齊性和正態(tài)齊性分布的計量資料可用均數(shù)±標準差表示結果,對于不符合者則可運用中位數(shù)表示。HTN-LVH組和高血壓無肥厚組間miR-27b相對表達量差異比較可以運用t檢驗統(tǒng)計,外泌體所占血漿的比值在兩者間的區(qū)別同樣運用t檢驗進行分析。使用Pearson相關分析法探究外泌體中miRNA-27b與室壁厚度的關系。使用受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve,ROC曲線)評估外泌體中miR-27b對心肌肥厚的診斷價值。所有分析檢驗方法中統(tǒng)計學結果均以P0.05為差異具有意義�！窘Y果】1.高血壓性左心室肥厚組血漿和外泌體中miR-27b的相對表達量較對照組顯著增高(P0.05)。2.在HTN-LVH組,外泌體中miR-27b表達水平與IVSd和LVPWd呈正相關(P0.05),相關系數(shù)(r)分別為0.55和0.60。3.外泌體中miRNA-27b表達量曲線下面積(AUC)為0.96,敏感度為86.7%,特異度為96.7%;血漿中AUC則為0.86,敏感度為73.3%,特異度80%�！窘Y論】1.血漿及外泌體中miR-27b的相對表達量與高血壓性左心室肥厚成正相關,血漿或外泌體中miR-27b升高提示存在高血壓性左心室肥厚的風險。2.外泌體中miR-27b比血漿中的靈敏度和特異度更高。
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【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R541.3

【參考文獻】

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1 吳菊清;歐陽偉;馮會娟;孫云鋼;李師思;陳盼;冼嘉朗;黃柳華;;miRNA-208b在SD大鼠腹主動脈縮窄心肌肥厚中的表達[J];廣東醫(yī)學;2014年14期

2 胡玉萍;袁建平;張舸洋;王曉娜;;替米沙坦與硝苯地平聯(lián)合應用治療高血壓性心臟病的療效觀察[J];吉林醫(yī)學;2010年30期

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本文編號：2467901