【摘要】：目的：多項(xiàng)研究提示冠心病患者較正常對(duì)照外周血白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度縮短。端粒復(fù)合體,包括端粒DNA、端粒相關(guān)蛋白、端粒酶,其中端粒相關(guān)蛋白對(duì)于端粒DNA起保護(hù)作用。TRF1、TRF2、POT1直接和端粒DNA結(jié)合,可能對(duì)于端粒長(zhǎng)度的變化起到更關(guān)鍵作用。本研究目的主要包括：(1)探究早發(fā)冠心病患者及冠造陰性人群外周血白細(xì)胞中TRF1、TRF2、POT1蛋白表達(dá)水平及端粒長(zhǎng)度的差異,及與臨床特點(diǎn)的關(guān)系。(2)探究早發(fā)冠心病患者及冠造陰性組外周血單個(gè)核細(xì)胞及粒細(xì)胞兩種不同細(xì)胞的端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)水平及端粒長(zhǎng)度差異,探究早發(fā)冠心病的外周血白細(xì)胞的特點(diǎn)。(3)培養(yǎng)早發(fā)冠心病患者單核巨噬細(xì)胞,初步探究危險(xiǎn)因素作用前后其端粒長(zhǎng)度及端粒相關(guān)蛋白的動(dòng)態(tài)變化。方法：(1)第一部分納入52例PCAD患者及42例冠造陰性對(duì)照,所有患者均在北京協(xié)和醫(yī)院行冠狀動(dòng)脈造影明確診斷,造影前留取動(dòng)脈全血提取DNA及RNA,測(cè)定外周血白細(xì)胞端粒DNA長(zhǎng)度和三種端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。(2)第二部分納入36例PCAD患者及10例冠造陰性對(duì)照,取動(dòng)脈全血,通過(guò)密度梯度離心法分離外周血PBMC細(xì)胞,剩余細(xì)胞裂解紅細(xì)胞后獲取粒細(xì)胞,從中提取DNA及RNA,分別測(cè)定這兩種細(xì)胞端粒DNA長(zhǎng)度和端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)水平差異。(3)第三部分納入6例PCAD患者及3例冠造陰性對(duì)照,取動(dòng)脈全血,通過(guò)密度梯度離心法分離外周血PBMC細(xì)胞,培養(yǎng)后經(jīng)貼壁的方法分離單核細(xì)胞,PMA刺激48小時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞巨噬化,用空白培養(yǎng)基、50 ug/ml ox-LDL+10-3mol/L尼古丁、10 ug/ml oxLDL、50 ug/ml ox-LDL、10-6mol/L尼古丁、10-3mol/L尼古丁六種不同處理,收獲24小時(shí)、72小時(shí)細(xì)胞,測(cè)定端粒DNA長(zhǎng)度和三種端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：(1)第一部分結(jié)果說(shuō)明PCAD患者較冠造陰性這端粒長(zhǎng)度更短(5.19±0.53 KB vs 6.24±2.54KB)具有顯著性差異(P=0.011)。研究還發(fā)現(xiàn),PCAD組患者TRF1表達(dá)量較冠造陰性組更低(0.03±0.88 vs 0.44±0.78,P=0.024),POT1表達(dá)量更高(-0.64±0.84 vs-1.27±0.91,P=0.001),差異均具有顯著性；兩組TRF2表達(dá)量未見(jiàn)明顯差異。POT1的表達(dá)量和年齡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,POT1表達(dá)量=-0.024×年齡+0.280(r2=0.047,P=0.044)。TRF1、TRF2、POT1表達(dá)量間具有顯著相關(guān)性,除此之外,TRF1表達(dá)量還與高脂血癥顯著負(fù)相關(guān)(P=0.022),POT1與白細(xì)胞中性粒細(xì)胞比例顯著正相關(guān)(P=0.003)。(2)第二部分結(jié)果說(shuō)明全體入選者中,粒細(xì)胞比PBMC細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度DNA相對(duì)更短(差值為(-0.67±2.14)KB, P=0.041), TRF1、TRF2、POT1的表達(dá)量相對(duì)更高,粒細(xì)胞和PBMC細(xì)胞的差值和P值分別為0.55±1.05,P=0.002；0.74±0.90,P=0.000；0.98±1.09,P=0.000。粒細(xì)胞及PBMC細(xì)胞的各種端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)性(P值分別為0.011,0.002,0.000),兩種細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度相關(guān)性則不顯著。冠造陰性組中,粒細(xì)胞比PBMC細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度顯著更短,差值為(-1.43±1.28)KB；P=0.010；而在PCAD人群中,兩者的端粒長(zhǎng)度沒(méi)有明顯差異。 (3)第三部分結(jié)果顯示人外周血單核巨噬細(xì)胞在不同危險(xiǎn)因素刺激下培養(yǎng)72小時(shí)端粒未見(jiàn)明顯改變(P=0.226)；在受到不同刺激時(shí),PCAD組TRF2、POT1表達(dá)較冠造陰性組顯著增加(差值和P值分別為0.002,0.000),TRF1則無(wú)顯著差異(P=0.133)；不同培養(yǎng)時(shí)間TRF1、TRF2、POT1表達(dá)量無(wú)顯著性差異(P值分別為0.126,0.730,0.389)：在冠造陰性組當(dāng)中,10ug/mloxLDL及10-6mol/L尼古丁有抑制TRF1、TRF2、POT1表達(dá)的趨勢(shì),而50 ug/ml oxLDL、10-3mol/L尼古丁有促進(jìn)TRF1、TRF2、POT1表達(dá)的趨勢(shì)；PCAD組中情況類似,10ug/mloxLDL有促進(jìn)TRF2表達(dá)趨勢(shì)：10-6mol/L尼古丁有促進(jìn)POT1表達(dá)趨勢(shì)；50 ug/ml oxLDL、10-3mol/L尼古丁及兩者混合的作用差異不顯著。結(jié)論： (1)TRF1表達(dá)水平降低、POT1表達(dá)水平增高與PCAD的疾病進(jìn)程有一定相關(guān)性;POT1可能是衰老的潛在生物學(xué)標(biāo)記物；高脂血癥可能通過(guò)降低TRF1水平誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的過(guò)程,中性粒細(xì)胞的升高可能通過(guò)升高POT1參與早發(fā)冠心病的疾病過(guò)程。(2) PCAD患者較之普通冠心病患者在發(fā)病過(guò)程中,粒細(xì)胞可能起到更重要作用。 (3)人單核巨噬細(xì)胞危險(xiǎn)因素刺激體外培養(yǎng)72小時(shí)端粒長(zhǎng)度無(wú)顯著變化；受到不同危險(xiǎn)因素刺激,PCAD組TRF2、POT1表達(dá)較冠造陰性顯著增加；較低水平危險(xiǎn)因素刺激即可誘導(dǎo)PCAD組TRF2、POT1的增加,顯示出其易感性。較大劑量危險(xiǎn)因素刺激可能誘發(fā)細(xì)胞凋亡裂解,因此作用差異不顯著。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 柯元南;陳紀(jì)林;;不穩(wěn)定性心絞痛和非ST段抬高心肌梗死診斷與治療指南[J];中華心血管病雜志;2007年04期

2 ;慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南[J];中華心血管病雜志;2007年03期

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本文編號(hào)：2434839