【摘要】：在慢性心力衰竭的逐漸發(fā)展過(guò)程中,多伴有腎臟功能損害,腎臟功能損害又會(huì)加重心力衰竭的程度,并嚴(yán)重影響心衰患者的預(yù)后。因此預(yù)防心衰患者的腎臟損害對(duì)于心衰患者的治療及預(yù)后都有重要的臨床意義。目前,血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)被廣泛用于心臟病的治療,但就ACEI用于延緩心衰大鼠的腎臟纖維化進(jìn)程的研究卻很少,因此本實(shí)驗(yàn)主要研究ACEI類(lèi)藥物雷米普利對(duì)腎臟纖維化的影響作用。相關(guān)研究顯示,血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet derived growth factor,PDGF)通過(guò)多種方式出現(xiàn)異常表達(dá)介導(dǎo)腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)的下游作用因子,即結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表達(dá)也被證實(shí)與腎小管間質(zhì)纖維化呈正相關(guān)。因此選定PDGF-B和CTGF作為觀察雷米普利對(duì)腎間質(zhì)纖維化影響作用的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用雷米普利干預(yù)慢性心力衰竭大鼠,觀察其對(duì)心衰大鼠腎臟病理改變的作用,及對(duì)細(xì)胞因子PDGF-B和CTGF表達(dá)的影響。目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹主動(dòng)脈部分縮窄法建立大鼠的心力衰竭模型。造模成功后,應(yīng)用雷米普利對(duì)藥物組大鼠進(jìn)行4周的干預(yù),分別采用HE染色法和Masson染色法對(duì)腎組織進(jìn)行染色,在光鏡下觀察3組大鼠腎臟的病理結(jié)構(gòu)改變,采用SP免疫組化法檢測(cè)3組大鼠腎組織中CTGF和PDGF-B的蛋白表達(dá)水平,采用RT-PCR測(cè)定3組大鼠腎組織中CTGF m RNA和PDGF-B m RNA的水平。通過(guò)觀察各組大鼠腎臟的病理改變及細(xì)胞因子PDGF-B和CTGF的表達(dá)情況來(lái)研究雷米普利對(duì)腎臟纖維化的抑制作用。方法:1采購(gòu)40只雄性清潔級(jí)Wistar大鼠,喂養(yǎng)6天后,應(yīng)用隨機(jī)的方法選取10只大鼠作為假手術(shù)組(開(kāi)腹后僅分離腹主動(dòng)脈,不結(jié)扎);其余30只大鼠采用腎上腹主動(dòng)脈縮窄法制作慢性心衰模型,術(shù)后喂養(yǎng)4周,應(yīng)用隨機(jī)的方法從30只大鼠中選取10只檢測(cè)其血流動(dòng)力學(xué)參數(shù),規(guī)定將左室舒張末壓(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)≥15mm Hg作為成模標(biāo)準(zhǔn);造模成功后隨機(jī)選取10只作為模型組,隨機(jī)選取10只作為雷米普利組。2當(dāng)3組實(shí)驗(yàn)大鼠喂養(yǎng)到觀察終點(diǎn)時(shí),應(yīng)用電生理記錄儀檢測(cè)大鼠心臟的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù):LVEDP和左心室內(nèi)壓上升及下降的最大速率(left ventricular pressure maximum rate of rise and fall,±dp/dtmax),記錄詳細(xì)數(shù)據(jù)。3采用HE染色法和Masson染色法,在光鏡下觀察各組大鼠腎臟的病理結(jié)構(gòu)改變。4采用SP免疫組織化學(xué)法測(cè)定各組大鼠腎組織中CTGF蛋白和PDGF-B蛋白的表達(dá)水平。5采用RT-PCR檢測(cè)各組大鼠腎組織中CTGF m RNA和PDGF B m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較假手術(shù)組、模型組、藥物組的LVEDP分別是:5.16±0.18mm Hg、19.39±0.35mm Hg、11.23±0.30mm Hg。與假手術(shù)組相比,模型組的LVEDP顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。藥物組的LVEDP較假手術(shù)組明顯升高,而較模型組的顯著下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。假手術(shù)組、模型組、藥物組的+dp/dtmax分別是:4346.62±174.29mm Hg/s、2556.17±91.69mm Hg/s、3248.91±55.08mm Hg/s。假手術(shù)組、模型組、藥物組的-dp/dtmax分別是:5555.15±60.70mm Hg/s、4104.70±84.33mm Hg/s、4850.96±76.14mm Hg/s。藥物組的左心室內(nèi)壓最大上升速率及下降速率均明顯低于假手術(shù)組,而明顯高于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2各組大鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)改變2.1 HE染色假手術(shù)組的大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰,組織形態(tài)正常,腎小球形態(tài)規(guī)則,腎小管管腔無(wú)擴(kuò)張,上皮細(xì)胞排列整齊。模型組大鼠腎小管明顯擴(kuò)張,腎間質(zhì)明顯增寬,腎小管上皮細(xì)胞排列紊亂,染色變淺。藥物組可見(jiàn)腎小管輕度擴(kuò)張,腎小管上皮細(xì)胞排列不整齊,腎間質(zhì)輕度增寬。2.2 Masson染色假手術(shù)組大鼠腎小管間質(zhì)及腎小球內(nèi)無(wú)明顯藍(lán)綠色染的膠原纖維;模型組大鼠的腎間質(zhì)可見(jiàn)大面積藍(lán)綠色染的膠原纖維沉積,腎小球內(nèi)無(wú)膠原纖維沉積;藥物組腎間質(zhì)及腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)少量綠染的膠原纖維沉積,腎小球內(nèi)無(wú)明顯綠染的膠原纖維。對(duì)Masson染色進(jìn)行膠原半定量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),藥物組大鼠測(cè)得的相對(duì)間質(zhì)容積值(11.21±0.82%)高于假手術(shù)組(3.88±0.27%)且明顯低于模型組(32.94±1.76%),任意兩組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3各組大鼠腎臟組織中PDGF-B和CTFG蛋白的表達(dá)情況3.1 CTGF免疫組化染色假手術(shù)組大鼠腎小管及腎間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)極少量棕黃色染色,為弱陽(yáng)性;模型組大鼠小管上皮細(xì)胞中可見(jiàn)大量CTGF陽(yáng)性染色,為強(qiáng)陽(yáng)性,間質(zhì)區(qū)少量表達(dá);藥物組大鼠僅腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)黃染區(qū),為陽(yáng)性,但黃染程度比模型組大鼠弱,各組之間兩兩比較的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.2 PDGF-B免疫組化染色假手術(shù)組大鼠腎間質(zhì)和腎小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少量棕黃色染色,為弱陽(yáng)性;跟假手術(shù)組大鼠比較,模型組大鼠黃染程度明顯增強(qiáng);藥物組大鼠腎組織的黃染程度重于假手術(shù)組,而弱于模型組,各組之間兩兩比較的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4各組大鼠腎臟組織PDGF-B和CTFG m RNA的表達(dá)4.1 CTGF基因水平在假手術(shù)組大鼠的腎組織中可檢測(cè)到CTGF m RNA呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài),而模型組大鼠腎組織中CTGF m RNA的表達(dá)明顯上調(diào);藥物組大鼠腎組織中CTGF m RNA的表達(dá)高于假手術(shù)組,而低于模型組;任意兩組之間的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。4.2 PDGF-B基因水平對(duì)比假手術(shù)組大鼠,模型組、藥物組大鼠的PDGF-B m RNA表達(dá)均有上調(diào),以模型組上調(diào)程度更為明顯,三者之間的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論:1慢性心力衰竭可以導(dǎo)致大鼠腎間質(zhì)纖維化。2雷米普利可以延緩慢性心力衰竭所致的腎間質(zhì)纖維化,作用機(jī)制可能與CTGF、PDGF-B的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R541.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2429610