【摘要】：目的:探討在動(dòng)脈粥樣硬化()炎癥反應(yīng)中的作用。方法:收集2015年10月至2016年8月于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心臟科住院的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者74例,以同期住院的50例非冠心病患者作為對(duì)照組,排除惡性腫瘤、血栓栓塞、進(jìn)展中的肝臟疾病、腎功能衰竭、瓣膜性心臟病、擴(kuò)張型心肌病及其他炎性疾病等。所有患者均行血常規(guī)、肝腎功能、心電圖、超聲心動(dòng)圖等檢查。收集入選患者血漿標(biāo)本,利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)入選患者血漿中mi R-21的表達(dá)水平。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿炎癥因子白介素-6(IL-6)水平。采用多元Logistic回歸分析急性STEMI的危險(xiǎn)因素。在Lipo3000的介導(dǎo)下,將mi R-21類(lèi)似物(mimics)/抑制劑(inhibitor)/陰性對(duì)照(NC)及mi R-21靶基因程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)特異性si RNA(si PDCD4)分別轉(zhuǎn)染小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7細(xì)胞6h后,加入終濃度為50μg/ml的氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)繼續(xù)培養(yǎng)48h,同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染且未加入ox-LDL)及ox-LDL組(僅加入終濃度為50μg/ml的ox-LDL)。ELISA法測(cè)定過(guò)表達(dá)mi R-21、抑制mi R-21及沉默PDCD4對(duì)細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6及IL-10水平的影響。采用油紅O染色檢測(cè)RAW 264.7細(xì)胞泡沫化程度,并通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中mi R-21的表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)細(xì)胞中PDCD4蛋白水平。此外,高脂飼料喂養(yǎng)20只Apo E-/-小鼠建立AS模型,隨機(jī)選取6只入組單純高脂喂養(yǎng)AS模型組,并選用正常飼料喂養(yǎng)的7只C57BL/6小鼠作為正常對(duì)照組。余下14只AS模型小鼠按數(shù)字表法隨機(jī)分成兩組:過(guò)表達(dá)mi R-21組及陰性對(duì)照組(NC),通過(guò)鼠尾靜脈注射法向兩組小鼠尾靜脈內(nèi)分別注射膽固醇包裹的mi R-21激動(dòng)劑(agomi R-21)及陰性對(duì)照agomi R-NC建立過(guò)表達(dá)mi R-21組及NC組。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)mi R-21在AS斑塊及正常動(dòng)脈組織中的表達(dá);Western blot及免疫組化分別檢測(cè)PDCD4蛋白水平,免疫組化法檢測(cè)AS斑塊內(nèi)IL-6及IL-10水平。結(jié)果:1、mi R-21、IL-6在急性STEMI患者血漿中的水平較對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001;p0.001)。Logistic回歸分析結(jié)果示年齡、男性為急性STEMI患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,HDL-C升高為保護(hù)性因素。2、mi R-21在泡沫細(xì)胞中的水平較RAW 264.7細(xì)胞明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);PDCD4蛋白在泡沫細(xì)胞中的表達(dá)水平較RAW 264.7細(xì)胞明顯升高。與空白對(duì)照組比較,ox-LDL組細(xì)胞上清液中促炎因子IL-6水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與NC組比較,ox-LDL+mi R-21 mimics組及ox-LDL+si PDCD4組巨噬細(xì)胞泡沫化程度明顯下降,且細(xì)胞上清液中IL-6水平明顯降低,IL-10的水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05);ox-LDL+mi R-21 inhibitor組細(xì)胞泡沫化程度明顯增加,細(xì)胞上清中IL-6水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、mi R-21在單純高脂喂養(yǎng)AS模型斑塊組織中的表達(dá)水平較C57BL/6小鼠動(dòng)脈組織中明顯升高(p0.01);PDCD4蛋白在單純高脂喂養(yǎng)AS模型斑塊組織中的水平較對(duì)照組明顯升高。過(guò)表達(dá)mi R-21組AS斑塊內(nèi)PDCD4蛋白及IL-6水平較NC組明顯減少,IL-10水平較NC組明顯增多,且斑塊較NC組明顯減小。結(jié)論:1、mi R-21、IL-6在急性STEMI患者血漿中的水平明顯升高。年齡、男性為急性STEMI患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2、mi R-21、PDCD4在泡沫細(xì)胞及AS斑塊內(nèi)的水平明顯升高。促炎因子IL-6在泡沫細(xì)胞上清液及AS斑塊內(nèi)的水平較相應(yīng)對(duì)照組明顯升高,而抗炎因子IL-10水平降低。3、過(guò)表達(dá)mi R-21及沉默PDCD4可使細(xì)胞內(nèi)促炎因子IL-6的分泌減少,抗炎因子IL-10增多,并可抑制巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。過(guò)表達(dá)mi R-21可以減少AS斑塊內(nèi)PDCD4及IL-6水平,增加IL-10水平,并可減小粥樣斑塊面積。說(shuō)明mi R-21或可通過(guò)靶向調(diào)控PDCD4的表達(dá),減輕炎癥反應(yīng),從而減緩AS的發(fā)展,起到保護(hù)性作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2428690