【摘要】：目的:研究APN(脂聯(lián)素,adiponectin)在阿霉素所致急性心肌損傷炎性反應(yīng)中的抗炎效應(yīng)及其機(jī)制。方法:1.模型建立選取8周齡體重相近的雄性野生C57、純合APN-KO小鼠,實(shí)驗(yàn)組小鼠一次性腹腔注射累計(jì)量為20mg/kg的阿霉素(adriamycin,ADM)[1],對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水。期間給予充足普通飼料、水。2.實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為四組:野生實(shí)驗(yàn)組(WT+ADM),野生對(duì)照組(WT+saline),脂聯(lián)素實(shí)驗(yàn)組(KO+ADM),脂聯(lián)素對(duì)照組(KO+saline)。3.實(shí)驗(yàn)方法阿霉素干預(yù)5天后,收集血清,檢測(cè)血清CK-MB、c Tn I、IL-6、TNFα、TGF-β水平;剪取心肌組織,取心尖組織固定,用HE染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)改變,免疫組化法(immunohistochemistry,IHC)觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn);剩余心肌組織采用Western blot檢測(cè)心肌組織APPL1、AMPK、PPARγ、OPN蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.心肌損傷標(biāo)志物水平比較:CK-MB、c Tn-I:與WT實(shí)驗(yàn)組相比,APN-KO實(shí)驗(yàn)組CK-MB、c Tn-I血清濃度增加(CK-MB:3.00±0.25 vs 3.35±0.47,P0.05;c Tn-I:77.66±64.30 vs 298.92±212.04,P0.05);與APN-KO對(duì)照組相比,APN-KO實(shí)驗(yàn)組CK-MB、c Tn-I血清水平升高(CK-MB:2.95±0.15 vs 3.35±0.47,P0.05;c Tn-I:54.46±24.58 vs 298.92±212.04,P0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.各組IL-6、TNF-α和TGF-β水平比較:IL-6、TNF-α:與WT實(shí)驗(yàn)組相比,APN-KO實(shí)驗(yàn)組IL-6、TNF-α血清濃度增加(IL-6:30.96±14.34 vs 71.71±51.51,P0.05;TNF-α:54.76±12.96 vs 100.01±19.57,P0.05);與APN-KO對(duì)照組相比,APN-KO實(shí)驗(yàn)組IL-6、TNF-α血清水平升高(IL-6:35.15±25.17 vs 71.71±51.51,P0.05;TNF-α:78.84±12.07 vs 100.01±19.57,P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TGF-β:各組相互比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.各組APPL1、AMPKα、PPARγ和OPN水平比較:APPL1:與WT實(shí)驗(yàn)組相比,APN-KO實(shí)驗(yàn)組心肌組織APPL1表達(dá)明顯降低(0.30±0.06 vs 0.07±0.01,P0.05);與WT對(duì)照組相比,APN-KO對(duì)照組APPL1水平下降(0.28±0.07 vs0.08±0.01,P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AMPKα:僅APN-KO實(shí)驗(yàn)組與APN-KO對(duì)照組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,APN-KO實(shí)驗(yàn)組AMPKα心肌組織表達(dá)水平增加(1.20±0.28 vs 0.69±0.17,P0.05)。PPARγ:與WT對(duì)照組相比,APN-KO對(duì)照組、WT實(shí)驗(yàn)組PPARγ心肌組織表達(dá)水平升高(0.94±0.09 vs 1.61±0.49,P0.05;0.94±0.09 vs 1.69±0.24,P0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OPN:四組之間相互比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組OPN表達(dá)水平增加(WT:1.88±0.09 vs 1.04±0.07,P0.05;APN-KO:3.24±0.40 vs 2.51±0.25,P0.05);APN-KO實(shí)驗(yàn)組OPN心肌組織表達(dá)水平高于WT實(shí)驗(yàn)組(3.24±0.40 vs 1.88±0.09,P0.05),APN-KO對(duì)照組OPN心肌組織表達(dá)水平高于WT對(duì)照組(2.51±0.25 vs1.04±0.07,P0.05)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.HE結(jié)果:除兩個(gè)對(duì)照組之間相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外,其余各組比較差異均有顯著性(P0.01)。巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組血管周圍分布較多,亦散在分布于心肌纖維間。其在各組中的數(shù)量比較:巨噬細(xì)胞除了在WT+ADM與WT+saline兩組間比較無差異外(P0.05),其余各組比較均有差異(P0.05)。CD3陽性T細(xì)胞各組相比差異均有顯著性(P0.01)。結(jié)論:1.與WT+ADM組相比,APN+ADM組促炎因子(IL-6、TNF-α)水平升高,說明APN具有抗炎效應(yīng)。TGF-β血清水平無差別,可能由于損傷早期組織纖維化活動(dòng)不明顯,主要以系統(tǒng)炎癥反應(yīng)為主。2.本實(shí)驗(yàn)提示APPL1-AMPKα-PPARγ-OPN通路參與心肌纖維化病變?cè)缙诘难装Y反應(yīng)。在APN作用下,脂聯(lián)素受體(Adipo R1、2)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與APPL1結(jié)合,促進(jìn)蛋白激酶LKB1的表達(dá),從而活化AMPK;活性AMPK作用于下游靶分子PPARγ,降低局部炎癥反應(yīng),抑制炎性介質(zhì)的釋放;PPARγ調(diào)節(jié)OPN的基因轉(zhuǎn)錄,OPN以RGD—整合素依賴的方式作用于巨噬細(xì)胞、肌母細(xì)胞,引起晚期心肌纖維化。巨噬細(xì)胞也可以產(chǎn)生OPN,如此形成心肌局部的惡性循環(huán)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2413662