發(fā)布時(shí)間：2019-01-15 21:19

【摘要】：本文旨在探討TRPC6在低氧高二氧化碳性肺動脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡中的作用。原代培養(yǎng)Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠PASMCs,采用平滑肌α-肌動蛋白免疫熒光染色法鑒定。選用4~6代的PASMCs,加入無血清DMEM饑餓24 h,隨機(jī)分為5組:常氧組、低氧高二氧化碳組、DMSO組、TRPC6抑制劑SKF-96365組和TRPC6激動劑OAG組。常氧組置于37°C常氧培養(yǎng)箱(21%O_2,5%CO_2)中培養(yǎng)24 h,其余4組置于37°C低氧高二氧化碳培養(yǎng)箱(5%O_2,6%CO_2)中,用不同藥物處理24 h。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和Western blot分別檢測TRPC6 m RNA和蛋白的表達(dá);用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況;用原位末端標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡;用Fura 2-AM雙波長法檢測細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度([Ca~(2+)]i)。結(jié)果顯示,低氧高二氧化碳條件下,PASMCs的TRPC6 m RNA和蛋白表達(dá)上調(diào),[Ca~(2+)]i升高,細(xì)胞增殖增加,而凋亡減少;OAG可促進(jìn)低氧高二氧化碳的上述作用,而SKF-96365能夠逆轉(zhuǎn)這些作用。以上結(jié)果提示,TRPC6參與了低氧高二氧化碳對PASMCs增殖和凋亡的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the role of TRPC6 in the proliferation and apoptosis of hypoxic hypercapnia pulmonary artery smooth muscle cells (pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs). Primary cultured Sprague-Dawley (SD) male rats PASMCs, was identified by 偽-actin immunofluorescence staining. Four or six passages of PASMCs, were added to serum free DMEM for 24 h and were randomly divided into 5 groups: normoxic group, hypoxic hypercapnia group, DMSO group, TRPC6 inhibitor SKF-96365 group and TRPC6 agonist OAG group. The normoxic group was cultured in 37 擄C normoxic incubator for 24 hours, the other four groups were placed in 37 擄C hypoxia and hypercapnia incubator for 24 hours, and the other four groups were treated with different drugs for 24 hours in the 37 擄C hypoxic hypercapnia incubator. Reverse transcriptase polymerase chain reaction and Western blot were used to detect the expression of TRPC6 m RNA and protein, CCK-8 method was used to detect cell proliferation, and in situ end labeling method was used to detect cell apoptosis. Detection of intracellular Ca~ (2) concentration ([Ca~ (2)] i). By Fura 2-AM dual wavelength method The results showed that under hypoxia and hypercapnia, the expression of TRPC6 m RNA and protein in PASMCs was up-regulated, [Ca~ (2)] I was increased, cell proliferation was increased, and apoptosis was decreased. OAG can promote these effects of hypoxia and hypercapnia, and SKF-96365 can reverse these effects. These results suggest that TRPC6 is involved in the regulation of PASMCs proliferation and apoptosis by hypoxia and hypercapnia.
【作者單位】： 四川省宜賓衛(wèi)生學(xué)校內(nèi)科教研室;黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院;溫州醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室;愛荷華大學(xué)卡佛醫(yī)學(xué)院心血管醫(yī)學(xué)系;溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心;
【基金】：supported by Science and Technology Project of Zhejiang Province,China(No.2015C37121) the Key Science and Technology Project of Yibin Municipality,Sichuan Province,China(No.2015SF036)
【分類號】：R544.1

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本文編號：2409132