【摘要】：目的構(gòu)建含miR-24基因的重組腺病毒,為后期研究miR-24在大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷所致血管再狹窄(RS)中的作用及分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法 PCR釣取目的基因miR-24,連接入穿梭載體GV139。采用Ad Max腺病毒包裝系統(tǒng),將構(gòu)建的miR-24重組腺病毒穿梭質(zhì)粒與輔助包裝質(zhì)粒(PBHG)共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,通過Cre/lox P重組酶系統(tǒng)的作用實(shí)現(xiàn)重組,得到重組腺病毒,并進(jìn)行重組腺病毒擴(kuò)增、純化及滴度測(cè)定。結(jié)果成功構(gòu)建了大鼠miR-24腺病毒載體,滴度為1×109PFU/ml。結(jié)論成功獲得含miR-24基因的重組腺病毒,為后期順利開展有關(guān)miR-24在血管RS中的作用及分子機(jī)制研究提供了可能。
[Abstract]:Objective to construct recombinant adenovirus containing miR-24 gene and to study the role and molecular mechanism of miR-24 in restenosis (RS) induced by balloon injury of carotid artery in rats. Methods PCR ligated the target gene miR-24, into shuttle vector GV139.. Using the Ad Max adenovirus packaging system, the recombinant adenovirus shuttle plasmid of miR-24 was co-transfected into HEK293 cells with the auxiliary package plasmid (PBHG). The recombinant adenovirus was obtained by the function of Cre/lox P recombinant enzyme system. The recombinant adenovirus was amplified, purified and titer determined. Results the adenovirus vector of rat miR-24 was successfully constructed with a titer of 1 脳 109 PFU / ml. Conclusion Recombinant adenovirus containing miR-24 gene was successfully obtained, which provided the possibility for the study of the role and molecular mechanism of miR-24 in vascular RS.
【作者單位】： 三峽大學(xué)心血管病研究所三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院心內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81170133,81200088,81470387) 三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文培優(yōu)基金(No.2015PY052)
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：2392436