【摘要】：研究背景及目的:亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因定位于染色體1p363,c DNA全長22 kb,共有11個外顯子,參與血清同型半胱氨酸(HCY)代謝過程并起著至關(guān)重要的作用。迄今為止已報道有多種突變類型,最常見的是MTHFR基因在677位點發(fā)生C/T變異,這一突變會產(chǎn)生一種可被Hinf I限制性內(nèi)切酶特異性結(jié)合的序列,使翻譯過程中丙氨酸被纈氨酸替代。由于5,10-亞甲基四氫葉酸代謝使HCY獲得甲基被甲基化,進而轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?因此這一替換進一步造成其轉(zhuǎn)甲基代謝的效率下降,從而使HCY甲基化轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼岬倪^程出現(xiàn)障礙。因MTHFR活性下降及耐熱性降低而導(dǎo)致HCY代謝受阻、血清HCY水平上升,這是造成高同型半胱氨酸血癥的主要原因,增高的血清HCY在體內(nèi)進行蓄積,刺激血小板介導(dǎo)的血管平滑肌細胞的增殖,進而損傷血管內(nèi)皮細胞,導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。同時HCY在代謝過程中可使巰基氧化,產(chǎn)生的自由基可引起DNA損傷和細胞凋亡,具有細胞毒性。血液中HCY濃度的升高受多方面因素影響,如遺傳、環(huán)境、營養(yǎng)等,如不考慮這些外部因素影響,亞甲基四氫葉酸還原酶的基因突變造成代謝能力下降,從而導(dǎo)致血清HCY水平升高被認為是發(fā)病的關(guān)鍵原因之一。心腦血管疾病是目前死亡率最高、嚴重危害人類健康和壽命的疾病,其中冠心病(CHD,coronary heart disease)和腦梗死發(fā)病率較高,動脈粥樣硬化是這兩者共有的病理基礎(chǔ)和關(guān)鍵的發(fā)病因素。影響CHD和腦梗死的因素眾多并且復(fù)雜,其中分為遺傳和環(huán)境兩方面,在對其遺傳因素的探索中,大部分注意力集中在遺傳對脂代謝的影響上。自上個世紀7O年代以來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)各種動脈硬化性疾病與血液中增高的HCY水平有著密不可分的關(guān)系,血清HCY水平上升可刺激血小板介導(dǎo)的血管平滑肌細胞的增殖,進而損傷血管內(nèi)皮細胞,導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。目前不乏研究報道高同型半胱氨酸血癥是獨立于吸煙、年齡、糖尿病、高血壓和高血脂癥之外,引發(fā)動脈粥樣硬化性血管疾病的一個獨立的危險因素。近年來的研究表明,高HCY血癥是腦血管疾病的一個新的、獨立的危險因子。MTHFR在葉酸代謝中發(fā)揮著重要作用,已發(fā)現(xiàn)編碼MTHFR C677T基因存在多態(tài)性,可導(dǎo)致酶活性改變。MTHFR是HCY再甲基化的關(guān)鍵酶,由于MTHFR基因變異,導(dǎo)致該酶活性降低,破壞了HCY和葉酸的正常代謝,可使HCY在體內(nèi)堆積,而HCY具有細胞毒性作用,可誘發(fā)心臟畸形。MTHFR基因677位點T/T基因型作為先天性心臟病的危險因素,國內(nèi)外有很多的報道,攜帶T/T基因型的個體發(fā)生先天性心臟病的風(fēng)險是C/C基因型或C/T基因型個體的3.437倍,MTHFR基因677位點T/T基因型是先天性心臟病的易感因素。同時MTHFR基因C677T位點的多態(tài)性還可能是妊高征發(fā)病的一個遺傳危險因素,攜帶有MTHFR基因C677T位點T/T基因型的孕婦易于發(fā)生高同型半胱氨酸血癥,進而導(dǎo)致妊高征,這為尋找妊高征的病因和防治提供了重要的病理生理學(xué)線索。綜上所述,MTHFR基因677位點基因多態(tài)性及血清HCY水平與多種疾病之間存在復(fù)雜的關(guān)系,目前腦血管疾病及先天性心臟病方面研究較多,而在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中研究尚少,且目前結(jié)論尚不一致,本研究的目的是通過觀察急性冠脈綜合征、穩(wěn)定型心絞痛及合并不同疾病的CHD患者MTHFR基因多態(tài)性及血清HCY水平變化,探討兩者與CHD之間的關(guān)系,為預(yù)測CHD的發(fā)生風(fēng)險及危險分層提供了臨床數(shù)據(jù),為將來進一步推廣MTHFR基因多態(tài)性及血清HCY水平檢測作為CHD患者早期篩查的輔助檢測指標之一提供了試驗依據(jù),具有較好的臨床應(yīng)用價值及廣闊的市場前景。方法:1研究對象及分組本課題研究的資料來源于安徽醫(yī)科大學(xué)深圳二院臨床學(xué)院(深圳市第二人民醫(yī)院)2015年1月至2016年7月各科室門診及病房收集的283名冠心病患者,其中男性198人,女性85人,年齡32~85歲,平均58.80±12.78歲。排除了先天性心臟病、心肌病、心臟瓣膜病、妊娠和哺乳期婦女、肝腎功能不全者。對照組為同期安徽醫(yī)科大學(xué)深圳二院臨床學(xué)院(深圳市第二人民醫(yī)院)體檢部及各專科的非冠心病體檢者160名,其中男性74人,女性有86人,年齡15-94歲,平均48.85±11.54歲,同時排除了冠心病、先天性心臟病、心肌病、心臟瓣膜病、高血壓、腦卒中、妊娠和哺乳期婦女、肝腎功能不全者。將患者分為冠心病組(CHD組,即實驗組)及對照組;需要注意的是,MTHFR基因多態(tài)性及血清HCY水平與心腦血管系統(tǒng)中的多種疾病相關(guān),因此在CHD組中,觀察不同類型及合并不同疾病的CHD患者的MTHFR基因多態(tài)性及血清HCY水平變化就需要對CHD組再進行分類得到各個亞組,這些亞組分別為:穩(wěn)定型心絞痛亞組及急性冠脈綜合征亞組(Acute coronary syndrome,ACS);CHD合并高血壓與不合并高血壓亞組;CHD合并高脂血癥與不合并高脂血癥亞組。同時為評估高同型半胱氨酸血癥是否為中國人CHD的一個獨立危險因素,需要排除MTHFR基因型多態(tài)性的干擾,還要將合并高血壓與不合并高血壓亞組,合并高脂血癥與不合并高脂血癥亞組再根據(jù)MTHFR野生型、雜合型及突變型分為三類,分別進行處理。冠心病診斷標準:本研究患者經(jīng)平板運動試驗、冠脈CTA或冠脈造影證實為CHD。急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS):ACS包括不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina,UA)、急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation of acute myocardial infarction,STEAMI)及急性非ST段抬高型心肌梗死(non-ST-segment elevation of acute myocardial infarction,non-STEAMI)。目前急性心肌梗死CTn I的診斷界值為CTn I≥0.1ng/ml。高血壓的診斷標準:本研究按照《中國高血壓防治指南(2015年修訂版)》所規(guī)定的診斷標準進行診斷,3次不同日安靜狀態(tài)下收縮壓≥140mm Hg和/(或)舒張壓≥90mm Hg即可診斷為高血壓。高脂血癥(血脂異常)的診斷標準:本研究按照《中國成人血脂異常防治指南(2007年版)》所規(guī)定的標準進行診斷�？偰懝檀肌�240mg/dl,或LDL-C≥160mg/dl,或甘油三酯≥200mg/dl,或HDL-C㩳40mg/dl(男性),或HDL-C㩳50mg/dl(女性),即可診斷為高脂血癥(血脂異常)。要特別注意標本的采集和處理方式,要求血液樣本采集后盡快分離血漿,制成無蛋白濾液,并在測定前加入巰基試劑來打開二硫鍵。并且由于HCY在血漿中以多種形式存在,需要檢測三種不同的HCY組分:還原型HCY、氧化型HCY和結(jié)合型HCY。3 MTHFR C677T位點的基因型測定抽取空腹靜脈血,采用天根基因組DNA提取試劑盒,從白細胞提取基因組DNA。用提取的DNA通過限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的方法以及聯(lián)合使用熒光PCR法獲得MTHFR C677T位點的基因型。2血清同型半胱氨酸(HCY)的測定結(jié)果1、CHD組血清HCY水平與對照組血清HCY水平相比有顯著差異(P0.05)2、MTHFR基因型以C/C型為標準,C/T型(OR:5.53,95%CI:3.48-8.80,P:0.05),T/T型(OR:7.69,95%CI:3.89-15.20,P:0.05)以及C/T+T/T型(OR:6.06,95%CI:3.96-9.28,P:0.05)在冠心病患者中比例明顯升高,提示等位基因T與冠心病發(fā)病風(fēng)險增加顯著相關(guān)。3、ACS亞組與穩(wěn)定型心絞痛亞組的血清HCY水平相比也有顯著差異(P0.05)4、MTHFR基因型以C/C型為標準,C/T型(OR:3.02,95%CI:1.52-6.00,P:0.05),T/T型(OR:5.94,95%CI:2.74-12.87,P:0.05)以及C/T+T/T型(OR:3.74,95%CI:1.94-7.22,P:0.05)在ACS患者中的比例較穩(wěn)定型心絞痛患者明顯升高,提示等位基因T與ACS發(fā)病風(fēng)險增加顯著相關(guān)。5、CHD患者中合并高血壓亞組MTHFR C677T的基因型中C/T型及T/T型的比例較不合并高血壓亞組有顯著升高,但是合并高脂血癥亞組與不合并高脂血癥亞組沒有顯著差異。6、血清HCY水平在合并高血壓亞組與不合并高血壓亞組,合并高脂血癥亞組與不合并高脂血癥亞組之間均沒有顯著差異。結(jié)論1、CHD患者血清HCY水平較正常人明顯升高,其MTHFR C677T的基因型中C/T型及T/T型比例較正常人亦明顯升高,其中ACS患者升高更加顯著。提示血清HCY水平與MTHFRC677T位點的基因型均共同與冠心病患病尤其是ACS有良好相關(guān)性;2、CHD患者中合并高血壓亞組MTHFR C677T的基因型中C/T型及T/T型的比例較不合并高血壓亞組有顯著升高,但是血清HCY水平在合并高血壓與不合并高血壓亞組之間沒有顯著差異。提示MTHFR C677T的基因型與高血壓相關(guān)而血清HCY可能因受外界許多因素影響與高血壓無明顯相關(guān);3、CHD患者中合并高脂血癥與不合并高脂血癥亞組在MTHFR C677T位點的基因型多態(tài)性與血清HCY水平中均沒有顯著差異。提示MTHFR C677T的基因型及血清HCY水平均與高脂血癥無關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54

【參考文獻】

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本文編號：2378262