【摘要】：心肌細(xì)胞是研究心血管疾病的重要工具之一,但是人類心肌細(xì)胞較難獲得和培養(yǎng).為人類胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成心肌細(xì)胞提供一個(gè)有用的實(shí)驗(yàn)方法和鑒定方案.人胚胎干細(xì)胞以其多向分化的特性為體外研究提供了細(xì)胞資源.在人胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的過程中,通過熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測發(fā)現(xiàn),在分化過程中干細(xì)胞標(biāo)記物Cripto,Dnmt3b,Wnt3,KIF4,Oct4,SOX2和Nanog表達(dá)下降,心肌特異性結(jié)構(gòu)蛋白cTnT和α-actinin以及心臟前體細(xì)胞分化標(biāo)記物Nkx2.5表達(dá)上升.分化完成后用免疫熒光檢測心肌特異性結(jié)構(gòu)蛋白Tnn T2和α-actinin,通過分析Tnn T2陽性細(xì)胞的比例,α-actinin陽性細(xì)胞的比例,以及Tnn T2和α-actinin雙陽性細(xì)胞的比例發(fā)現(xiàn),在所提出的胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化體系中,三者比例分別為90.80%,91.00%,90.91%,表明在此誘導(dǎo)分化條件下人胚胎干細(xì)胞可成功分化成為心肌細(xì)胞.成功建立了人胚胎干細(xì)胞來源的心肌細(xì)胞模型以及基于標(biāo)記物熒光定量PCR及免疫熒光系統(tǒng)檢測的鑒定方案,為未來心血管疾病的基礎(chǔ)研究及心臟毒性藥物檢測奠定了一定的基礎(chǔ).
[Abstract]:Cardiomyocytes are one of the important tools to study cardiovascular disease, but human cardiomyocytes are difficult to obtain and culture. To provide a useful experimental method and identification scheme for human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes. Human embryonic stem cells provide cell resources for the study in vitro because of their multidirectional differentiation. In the process of inducing human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes, the expression of Cripto,Dnmt3b,Wnt3,KIF4,Oct4,SOX2 and Nanog, the markers of stem cells, decreased in the process of differentiation by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (polymerase chain reaction,PCR). The expressions of myocardial specific structural proteins (cTnT and 偽-actinin) and cardiac precursor cell differentiation marker (Nkx2.5) were increased. After differentiation, the ratio of Tnn T2 positive cells, 偽 -actinin positive cells and Tnn T2 and 偽 -actinin double positive cells were detected by immunofluorescence. In the system of inducing differentiation of embryonic stem cells, the ratio of the three was 90.80,91.00 and 90.91respectively, which indicated that human embryonic stem cells could be successfully differentiated into cardiomyocytes under the condition of inducing differentiation. The cardiac myocyte model derived from human embryonic stem cells and the identification scheme based on fluorescent quantitative PCR and immunofluorescence system were successfully established. It will lay a foundation for the future basic research of cardiovascular disease and the detection of cardiac toxic drugs.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心臟內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81370280,81570332)
【分類號(hào)】：R54

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10 張家平;絲裂素活化蛋白激酶與心肌細(xì)胞效應(yīng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年11期

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3 孫國根;心肌細(xì)胞的形成和再生有望被誘導(dǎo)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2012年

4 吳偉農(nóng);心肌細(xì)胞能自我修復(fù)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

5 陳丹;移植的人體細(xì)胞可與豚鼠受體心肌同步跳動(dòng)[N];科技日報(bào);2012年

6 記者胡德榮;心肌細(xì)胞能體外培養(yǎng)[N];健康報(bào);2002年

7 楊洋;骨髓細(xì)胞生成心肌細(xì)胞[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

8 吳理茂 李連達(dá);中藥在心肌細(xì)胞移植中的作用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

9 ;急性心梗治療獲重要突破 心肌細(xì)胞可以再生[N];中國保險(xiǎn)報(bào);2003年

10 記者 張曄;基因調(diào)控讓壞死的心肌細(xì)胞“復(fù)活”[N];科技日報(bào);2011年

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4 李娜;PDE5抑制劑Sildenafi1對(duì)心梗后心衰線粒體能量代謝保護(hù)及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳亮;miR-199a對(duì)大鼠心肌細(xì)胞自噬的調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 王曉麗;附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 肖劍鋒;碘化-N-正丁基氟哌啶醇對(duì)缺氧心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)的保護(hù)作用[D];汕頭大學(xué);2011年

8 張翠翠;MG53調(diào)節(jié)心臟輔助亞基KChIP2表達(dá)的分子機(jī)制及在心電穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 張海彬;miR-711在心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2016年

10 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷對(duì)心肌細(xì)胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

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2 黃玉潔;miR-218調(diào)控小鼠胚胎干細(xì)胞體外定向分化心肌細(xì)胞研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 李品雅;華蟾毒精對(duì)心肌細(xì)胞L型鈣電流，鈣瞬變和收縮力的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 劉洋;野薔薇苷對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 朱燕梅;銀杏葉提取物保護(hù)心肌細(xì)胞抗氧化損傷及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用機(jī)制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

6 劉莉;心肌細(xì)胞TLR4促進(jìn)心梗后心臟炎癥反應(yīng)的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

7 盧杏;體外轉(zhuǎn)染CyclinA2基因?qū)υ笫笮募〖?xì)胞增殖的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

8 竇夢怡;缺氧時(shí)心肌細(xì)胞自噬的變化及其機(jī)理的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

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10 李熠;TGR5在高糖誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2362393