發(fā)布時間：2018-11-19 21:55

【摘要】：近幾年來,大量研究表明表觀遺傳學(xué)途徑是環(huán)境因素、生活方式和遺傳因素間相互影響的橋梁。DNA甲基化,作為表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要領(lǐng)域,在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。而且DNA甲基化水平受到多種因素的影響,如年齡、性別、血漿中同型半胱氨酸的水平等環(huán)境因素。近年來,有研究者發(fā)現(xiàn)遺傳因素特別是特定基因的單核甘酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)與甲基化水平相關(guān)聯(lián),這些關(guān)聯(lián)可能與疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。因此,DNA甲基化的個體差異可能同時受到遺傳、生活方式和環(huán)境等方面因素的控制。碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(Carbohydrate response element binding protein, ChREBP),是葡萄糖代謝信號途徑中的轉(zhuǎn)錄因子,在調(diào)節(jié)哺乳動物體內(nèi)糖代謝和脂代謝方面具有十分重要的作用。前期研究證實ChREBP基因SNPs與冠心病(Coronary Artery disease,CAD)相關(guān),而且發(fā)現(xiàn)外周血白細胞的ChREBP基因CpG島甲基化存在個體差異,ChREBP基因CpG島甲基化影響其啟動子活性。為進一步分析外周血白細胞ChREBP差異甲基化的原因及其與遺傳因素、冠心病風(fēng)險環(huán)境和代謝因素間的相互作用,我們進行了以下實驗：1.年齡、性別、血壓、血液檢測指標與外周血白細胞ChREBP基因甲基化的關(guān)聯(lián)分析；2.ChREBP基因與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)基因的單核苷酸多態(tài)性對ChREBP基因甲基化和整體甲基化的影響；3. DNMT1基因單核苷酸多態(tài)性對外周血白細胞DNMT1表達水平的影響。我們收集了309例表觀正常人群的臨床基本資料,采用全自動生化分析儀常規(guī)方法檢測外周血漿中的血糖(Glucose, GLU)、甘油三脂(Triglycerides,TG)、膽固醇(Cholesterol, TC)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的水平;采用全自動血液分析儀檢測白細胞計數(shù)與分類；收集殘存的血常規(guī)樣本,抽提基因組DNA。采用重亞硫酸鹽克隆測序的方法檢測ChREBP基因CpG島甲基化水平,同時用高溫變性熔解曲線(High-Resolution Melting analysis,HRM)檢測ChREBP基因、DNMT1基因的標簽(Tag)SNPs,并進行關(guān)聯(lián)性分析。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Liquid Chromatography/tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS)的方法檢測了外周血白細胞DNMT1基因整體甲基化水平。采用實時熒光定量PCR (Quantification Real-time PCR, qRT-PCR)檢測正常人群外周血白細胞DNMT1基因的mRNA水平。將年齡、性別、血壓、白細胞計數(shù)、GLU、TC、TG、HDL-C, LDL-C與ChREBP基因進行多元線性回歸分析,發(fā)現(xiàn)年齡(β=0.03,P0.001)、總膽固醇(β=0.409,P=0.007)與ChREBP基因甲基化正相關(guān),可以解釋大約6.6%的個體差異。而DNMT1基因中rs2288349、rs2228611、rs8111085、rs16999593、rs2336691構(gòu)成的GAATG單體型在ChREBP基因甲基化水平高、低組間的分布頻率有顯著性差異(P=0.037331,OR=0.681,95%CI=0.475-0.978);同時,DNMT1基因的單體型GGGTG也與整體甲基化水平相關(guān)聯(lián)(P=0.014113,OR=0.448,95% CI=0.234-0.860).但是,我們未發(fā)現(xiàn)DNMT1基因的SNPs及單體型與基因表達水平的相關(guān)性。綜上所述,本研究結(jié)果顯示ChREBP基因DNA甲基化與年齡、血漿TC濃度顯著相關(guān),并受到DNMT1基因的單體型的影響。而且DNMT1基因的單體型同時也影響整體甲基化水平,但是DNMT1單體型對DNA甲基化指標的影響不是通過影響DNMT1基因的表達水平起作用的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.4

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本文編號：2343536