【摘要】：研究背景:人外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌的微顆粒(Microparticles,MP)參與冠心病發(fā)病機(jī)制(脂質(zhì)代謝紊亂、炎癥免疫反應(yīng)等)中所涉及的多種病理生理途徑。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),冠心病患者PBMC來(lái)源的MP(PBMC-MP)中的miR-4306表達(dá)較健康人明顯增加,但PBMC-MP中的miR-4306與冠心病的病情關(guān)系及miR-4306對(duì)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human coronary artery endothelial cells,HCAECs)的作用及機(jī)制仍不清楚。目的:本研究旨在探討冠心病患者PBMC-MP中miR-4306與冠心病的病情關(guān)系及miR-4306對(duì)HCAECs的作用及機(jī)制。方法:1.臨床實(shí)驗(yàn)分組:血液標(biāo)本分別來(lái)自對(duì)照人群(健康人)和冠心病人群。分組如下:對(duì)照組、單支病變組、多支病變組;對(duì)照組、擇期PCI組、急診PCI組。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?分為PBMC-MP對(duì)照組、PBMC-MP擇期PCI組、PBMC-MP急診PCI組;Control組、miR-4306mimics組;Control組、miR-4306 inhibitor組。3.采取實(shí)驗(yàn)對(duì)象全血9 ml,提取PBMC-MP,流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)MP是否來(lái)源于PBMC。qRT-PCR檢測(cè)健康人和冠心病患者PBMC-MP中miR-4306的表達(dá)水平。4.雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試miR-4306對(duì)SLC16A2基因和VEGFA基因是否有靶向調(diào)控作用。5.免疫熒光證實(shí)hcaecs是否吞噬mp,qrt-pcr檢測(cè)不同時(shí)間段hcaecs吞噬mp后mir-4306的表達(dá)水平。westernblot、乳酸試劑盒、transwell小室、cck8分別檢測(cè)hcaecs吞噬mp后slc16a2和vegfa的蛋白表達(dá)水平、hcaecs的乳酸代謝、遷移和增殖能力。6.用negativecontrol,hsa-micro-4306-mimics,micrornainhibitorn.c,hsa-micro-4306-inhibitor分別轉(zhuǎn)染hcaecs,qrt-pcr檢測(cè)hcaecs中mir-4306的表達(dá)水平。westernblot、乳酸試劑盒、transwell小室、cck8分別檢測(cè)hcaecs的slc16a2和vegfa的蛋白表達(dá)水平、乳酸代謝、遷移和增殖能力。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,單支病變組和多支病變組pbmc-mp中的mir-4306表達(dá)明顯增加(p0.05和p0.01),且多支病變組中mir-4306的表達(dá)明顯高于單支病變組(p0.05)。與對(duì)照組相比,擇期pci組和急診pci組pbmc-mp中mir-4306的表達(dá)增加(p0.05和p0.01),且急診pci組中mir-4306的表達(dá)明顯高于擇期pci組(p0.01)。2.雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試結(jié)果表明hsa-mir-4306對(duì)slc16a2基因和vegfa基因有中度靶向調(diào)控作用。3.hcaecs于12~24h和24~36h兩個(gè)時(shí)間段吞噬mp能力最強(qiáng),并且hcaecs吞噬mp后mir-4306的表達(dá)于12h突然增加,于36h達(dá)到最高峰值后開(kāi)始下降。4.slc16a2蛋白表達(dá)在pbmc-mp對(duì)照組、pbmc-mp擇期pci組和pbmc-mp急診pci組之間無(wú)明顯差異(p0.05),同時(shí)hcaecs的乳酸代謝值在三組間無(wú)明顯變化(11.47±0.72 mM、13.4±0.53 mM、14.2±0.39 mM,P0.05)。PBMC-MP擇期PCI組中VEGFA蛋白的表達(dá)明顯低于PBMC-MP對(duì)照組(P0.05);與PBMC-MP對(duì)照組相比,PBMC-MP擇期PCI組中HCAECs的遷移能力明顯下降(P0.05),HCAECs的增殖能力于24~48 h時(shí)下降最顯著(P0.05)。5.與各自對(duì)照相比,miR-4306 mimics組和miR-4306 inhibitor組可明顯增加和降低HCAECs中miR-4306的表達(dá)(P0.01和P0.01),同時(shí)抑制和上調(diào)SLC16A2和VEGFA蛋白的表達(dá)(P0.01和P0.01;P0.05和P0.05)。與各自對(duì)照組相比,miR-4306 mimics組和miR-4306 inhibitor組的乳酸代謝能力沒(méi)有差別(乳酸代謝值分別為12.86±0.29 mM,11.43±0.41 mM,P0.05;12.14±0.18 mM,13.57±0.57 mM,P0.05)。與各自對(duì)照相比,miR-4306 mimics組和miR-4306 inhibitor組分別降低和增加HCAECs的遷移能力(P0.01和P0.01),不改變HCAECs的增殖能力(P0.05和P0.05)。結(jié)論:1、miR-4306抑制HCAECs中靶基因VEGFA的蛋白表達(dá),降低HCAECs的遷移和增殖能力;miR-4306抑制HCAECs中靶基因SLC16A2的蛋白表達(dá),但對(duì)HCAECs的乳酸代謝沒(méi)有影響。2、與健康人相比,冠心病患者PBMC-MP中miR-4306表達(dá)增加,并且與冠脈病變的嚴(yán)重程度和病情急緩呈正相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2315245