【摘要】：目的模擬體內(nèi)急性心肌梗死缺血缺氧微環(huán)境,探討血清剝奪是否能激活心肌成纖維細胞向內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)分化。方法取新鮮分離的C57BL/6新生小鼠心臟組織,獲取成纖維細胞進行培養(yǎng),用白血病抑制因子(LIF)促進成纖維細胞自我更新、長程維持干性和抑制其向終末分化。將第3代成纖維細胞分為:對照組[DMEM+10%胎牛血清(FBS)培養(yǎng)]、血清剝奪24 h組(不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)24 h)、血清剝奪48 h組(不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)48 h)、血清剝奪72 h組(不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)72 h)。經(jīng)過不同處理后,采用q PCR法檢測各組細胞譜系特異性基因的表達變化,采用體外血管新生實驗和Dil-Ac-LDL吞噬實驗檢測血清剝奪后成纖維細胞的功能學變化,采用ELISA法檢測血清剝奪后成纖維細胞分泌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的情況。結(jié)果血清剝奪不同時間組成纖維細胞形成血管分叉的數(shù)目與對照組相比均增加(P0.05),但均未發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)細胞吞噬Dil-Ac-LDL的現(xiàn)象。與對照組比較,血清剝奪48 h組成纖維細胞中內(nèi)皮特異性基因CD31和VE-herin的表達均升高(P0.05);其中血清剝奪48 h組成纖維細胞中CD31的表達是對照組的13.7倍(P0.05),血清剝奪72 h組是對照組的2倍(P0.05)。ELISA檢測結(jié)果顯示,血清剝奪48h組成纖維細胞分泌的VEGF是對照組的7倍(P0.05),血清剝奪72 h組是對照組的3.7倍(P0.05)。結(jié)論血清剝奪可以激活心肌成纖維細胞向內(nèi)皮細胞譜系的轉(zhuǎn)分化。
[Abstract]:Aim to investigate whether serum deprivation can activate myocardial fibroblasts to differentiate into endothelial cells by simulating the microenvironment of acute myocardial infarction. Methods Fibroblast cells were obtained from freshly isolated heart tissue of C57BL/6 newborn mice. Leukemia inhibitory factor (LIF) was used to promote the self-renewal of fibroblasts and to maintain dryness and inhibit their terminal differentiation for a long time. The third passage fibroblasts were divided into three groups: control group [DMEM 10% fetal bovine serum (FBS) culture], serum deprivation 24 h group (DMEM without FBS culture 24 h), serum deprivation 48 h group) DMEM without FBS culture 48 h), serum deprivation 72 h group (FBS free DMEM culture 72 h).) After different treatments, the expression of pedigree specific genes was detected by Q PCR assay, and the functional changes of fibroblasts after serum deprivation were detected by in vitro angiogenesis test and Dil-Ac-LDL phagocytosis test. The level of vascular endothelial growth factor (VEGF) secreted by fibroblasts after serum deprivation was detected by ELISA method. Results compared with the control group, the number of vascular bifurcation of fibroblasts in different time of serum deprivation increased (P0.05), but none of them found the phenomenon of inducing cells to phagocytosis of Dil-Ac-LDL. Compared with the control group, The expression of endothelium-specific gene CD31 and VE-herin in fibroblasts of 48 h of serum deprivation increased significantly (P0.05), and the expression of CD31 in fibroblasts of 48 h of serum deprivation was 13.7 times higher than that of the control group (P0.05), and the expression of CD31 in 72 h group of serum deprivation was 2 times of that of the control group (P0.05). Times (P0.05). ELISA test results showed that, The VEGF secreted by fibroblasts after 48 hours of serum deprivation was 7 times of that of the control group (P0.05) and 3.7 times of that of the control group after 72 hours of serum deprivation (P0.05). Conclusion Serum deprivation can activate the transdifferentiation of myocardial fibroblasts into endothelial cell lineages.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金(9153910092,91539118,81473445,8151101216)~~
【分類號】：R54

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本文編號：2268962