【摘要】：目的：使用血管內(nèi)皮細胞生長因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)與肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor, HGF)聯(lián)合誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)向淋巴管內(nèi)皮細胞(lymphatic endothelial cells,LECs)方向分化,尋求最適HGF濃度,探索HGF的促分化機制。方法：成功獲得原代培養(yǎng)的第三代BMSCs,用流式細胞儀技術檢測間充質(zhì)干細胞的特異性表面抗原,并且將BMSCs向成骨方向誘導分化鑒定它的干細胞特性,最后取原代培養(yǎng)的第三代細胞進行誘導實驗。設置50ng/mlVEGF-C分別聯(lián)合10,20,40,60,80, 100ng/ml HGF配置誘導培養(yǎng)基的6個聯(lián)合誘導組以及同時設置50ng/ml VEGF-C誘導組、50ng/ml HGF誘導組和空白對照組,誘導10d后利用實時熒光定量PCR(Real-time quantitive PCR, RT-qPCR)檢測各組LECs標志性分子淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體-1(Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1, LYVE-1),同源異形盒蛋白1(Prospero homeobox prot ein 1, Prox1)的表達,得出HGF最適濃度。Western、RT-qPCR檢測HGF誘導組、空白對照組、VEGF-C誘導組的LECs標志性分子LYVE-1、Prox1的表達,以及檢測空白對照組、VEGF-C誘導組、HGF聯(lián)合VEGF-C誘導組的整合素α9受體(integrin alpha9 receptor,integrin α 9)的表達。結果：成功得到離體的原代培養(yǎng)大鼠BMSCs,80ng/ml HGF聯(lián)合50ng/ml VEGF-C誘導組的LYVE-1、Prox1的mRNA表達量最高(PProxl=0.000,PLYVE-1=0.000)同時,HGF誘導組不能探測到特異性LECs標志性分子的表達,HGF聯(lián)合VEGF-C誘導組的integrin α 9的表達較VEGF-C誘導組明顯提(Pwestern=0.001, PRT-qPCR=0.000)。結論：當HGF濃度為80ng/ml時,此時HGF聯(lián)合VEGF-C可更好的促進大鼠BMSCs向LECs分化。同時,在該濃度條件下HGF不具有單獨誘導大鼠BMSCs分化為LECs的能力,但能在誘導分化過程中明顯提高integrin α9的表達,證明在促分化過程中HGF可能是通過間接上調(diào)integrin α9表達發(fā)揮作用。
[Abstract]:Aim: to induce the differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells (bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs) into lymphatic endothelial cells (lymphatic endothelial cells,LECs) by using vascular endothelial growth factor (C (Vascular endothelial growth factor) VEGF-C and hepatocyte growth factor (Hepatocyte growth factor, HGF) to seek the optimal concentration of HGF. To explore the mechanism of promoting differentiation of HGF. Methods: the third generation of primary cultured BMSCs, was successfully obtained to detect the specific surface antigen of mesenchymal stem cells by flow cytometry, and the BMSCs was induced to differentiate into osteoblasts to identify its stem cell characteristics. Finally, the third generation of primary cultured cells were used for induction experiment. Six co-induction groups with 100ng/ml HGF medium, 50 ng / ml HGF induction group with 50ng/ml VEGF-C induction group and a blank control group were set up, respectively. After 10 days of induction, the expression of hyaluronic acid receptor 1 (Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE-1) and homologous cassette protein 1 (Prospero homeobox prot ein 1 (Prox1) were detected by real time fluorescence quantitative PCR (Real-time quantitive PCR, RT-qPCR). The results showed that the optimal concentration of HGF. Western RT qPCR was used to detect the expression of hyaluronic acid receptor 1 (Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE-1) and homologous cassette protein 1 (Prospero homeobox prot ein 1 (Prox1). The expression of LECs marker LYVE-1,Prox1 in VEGF-C induced group and the expression of integrin 偽 9 receptor (integrin alpha9 receptor,integrin 偽 9) in VEGF-C induced group and VEGF-C group were detected. Results: the expression of LYVE-1,Prox1 mRNA was the highest (PProxl=0.000,PLYVE-1=0.000) in the primary cultured rat BMSCs,80ng/ml HGF combined with 50ng/ml VEGF-C induction group, and the expression of specific LECs iconic molecules could not be detected in the HGF-induced group and integrin 偽 9 in the VEGF-C induced group. The expression of Pwestern=0.001, PRT-qPCR=0.000 was significantly higher than that of VEGF-C induced group. Conclusion: when the concentration of HGF is 80ng/ml, HGF combined with VEGF-C can promote the differentiation of BMSCs into LECs. At the same time, HGF could not induce rat BMSCs to differentiate into LECs alone, but could obviously increase the expression of integrin 偽 9 in the process of inducing differentiation. It was suggested that HGF might play a role by indirectly up-regulating the expression of integrin 偽 9 in the process of promoting differentiation.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R551.2

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本文編號：2240818