【摘要】：研究背景與目的冠心病(coronary heart disease,CHD)是威脅人類健康的主要疾病。最新統(tǒng)計(jì)顯示,在發(fā)達(dá)國家,CHD的死亡率雖然有所下降,但在發(fā)展中國家,包括中國,CHD的死亡率仍呈上升趨勢(shì)。據(jù)WHO估計(jì),到2020年左右我國將會(huì)迎來CHD的流行高峰。因此提高CHD預(yù)防控制水平是我國一項(xiàng)艱巨任務(wù)。CHD的病因?qū)W說較多,包括脂質(zhì)浸潤學(xué)說、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)說、同型半胱氨酸代謝障礙學(xué)說及與炎癥損傷有關(guān)的血管內(nèi)膜損傷學(xué)說等。這些病理生理過程最終會(huì)引起冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,As),導(dǎo)致心臟供血、供氧等不足、從而危及心臟的正常泵血功能。伴隨生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展,CHD在診斷、治療及預(yù)防等方面都取得了巨大進(jìn)步。在CHD預(yù)測(cè)預(yù)警機(jī)制方面,弗拉明翰心臟研究(Framingham Heart Study)、女性健康研究(the Women's Health Study),明斯特前瞻性心血管研究(the Prospective Cardiovascular Munster study)以及系統(tǒng)冠狀動(dòng)脈風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)劃(the Systematic Coronary Risk Evaluation project)等已為臨床醫(yī)生提供了多個(gè)不同版本的10年期CHD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估策略,希望結(jié)合并發(fā)揮預(yù)防醫(yī)學(xué)手段來降低CHD的患病率及死亡率。最近,各國專家對(duì)這些風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估策略的適用性開始提出異議,主要包括：1)人種代表性；2)CHD風(fēng)險(xiǎn)因子的完整性等。人種代表性上,上述評(píng)估策略主要針對(duì)歐美白種人,不適合其他人種更不適合中國人種；CHD風(fēng)險(xiǎn)因子的完整性上,這些評(píng)估策略主要包括年齡(age)、性別、高血壓及吸煙,而對(duì)血脂、糖化血紅蛋白、糖尿病家族史及身體質(zhì)量指數(shù)等因子在CHD預(yù)測(cè)中的作用還沒有一個(gè)確定的共識(shí)。換言之,結(jié)合并發(fā)揮預(yù)防醫(yī)學(xué)手段來降低CHD的患病率及死亡率這一思路很好,但現(xiàn)有的評(píng)估策略還需要完善和改進(jìn)。從CHD危險(xiǎn)因子角度看, age、性別、家族史及人種屬于經(jīng)典的不可改變危險(xiǎn)因子(unmodifiable risk factors);抽煙、高血壓、血脂異常及糖尿病等屬于經(jīng)典的可改變危險(xiǎn)因子(modifiable risk factors)。完善和改進(jìn)CHD預(yù)測(cè)機(jī)制既要全面科學(xué)地納入這些已知危險(xiǎn)因子,同時(shí),還需要不斷結(jié)合基因醫(yī)學(xué)及計(jì)算醫(yī)學(xué)的發(fā)展,探討并吸納新的危險(xiǎn)因子。從基因角度來看,CHD遺傳基礎(chǔ)可能代表了多個(gè)DNA變異的累積。目前,全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome-wide association studies,GWAS)已在人類基因組報(bào)告目錄中確定了超過100個(gè)與CHD相關(guān)的基因變異。而單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)作為一種理解復(fù)雜疾病遺傳方式的有效研究手段,其在與疾病相關(guān)的遺傳因素中,會(huì)對(duì)不同個(gè)體疾病易感性產(chǎn)生重要影響,且已在多種疾病中顯示出基因多態(tài)性分布的個(gè)體差異及人種差異。近年,基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)在As中的作用逐漸被重視。研究發(fā)現(xiàn),在人的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中檢測(cè)到SDF-1高表達(dá),主要表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,而正常動(dòng)脈壁中未見表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)細(xì)胞在受到炎癥因子刺激后能分泌SDF-1,SDF-1可激活T淋巴細(xì)胞,并能與其受體4(C-X-C hemokine receptortype-4,CXCR4)特異性結(jié)合形成SDF-1/CXCR4生物軸,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部鈣離子及其它化學(xué)物質(zhì)一過性快速升高,從而在個(gè)體炎癥反應(yīng)中扮演著重要角色。表明SDF-1/CXCR4生物軸與As的發(fā)生關(guān)系密切。而編碼SDF-1的基因3’非翻譯區(qū)801號(hào)位點(diǎn)(rs1801157)存在G/A多態(tài)性,會(huì)對(duì)SDF-1表達(dá)產(chǎn)生影響,故而推斷rs1801157位點(diǎn)SNP可能會(huì)與As發(fā)生的易感性相關(guān)。目前對(duì)該位點(diǎn)SNP的研究主要集中在與艾滋病和腫瘤的易感性上,很多研究已證實(shí),該基因位點(diǎn)SNP與急性髓細(xì)胞白血病、散發(fā)性前列腺癌及乳腺癌等多種疾病的發(fā)病相關(guān),經(jīng)檢索較少發(fā)現(xiàn)有與As發(fā)生相關(guān)的研究報(bào)道。此外,研究發(fā)現(xiàn)端�？s短和端粒酶活性增高均是As形成的重要危險(xiǎn)因素。端粒長度由遺傳因素和端�？s短速度決定,而端粒酶除能延長端粒長度外,在維持端粒結(jié)構(gòu)中還起到重要作用。端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)作為端粒酶活性的關(guān)鍵限速成分,其編碼基因多態(tài)性可影響hTERT蛋白合成,在激活端粒酶活性及功能中起關(guān)鍵性作用。編碼hTERT的基因定位于第5號(hào)染色體5p15.33區(qū)域,該區(qū)域上的rs2736100位點(diǎn)位于hTERT編碼基因的1號(hào)內(nèi)含子處,在hTERT蛋白的合成中起著關(guān)鍵性作用,負(fù)責(zé)激活端粒酶,進(jìn)而推斷該位點(diǎn)SNP可能會(huì)影響As的發(fā)生和發(fā)展。但目前的研究也主要集中在與腫瘤的易感性關(guān)系上,最近的研究顯示rs2736100位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌、膠質(zhì)瘤、睪丸生殖細(xì)胞癌及膀胱癌的易感性相關(guān),經(jīng)檢索鮮見有與As發(fā)生相關(guān)的研究報(bào)道。與CHD基因易感性的研究不同,臨床生化檢測(cè)中的很多指標(biāo)能反映人體生理及病理生理代謝的動(dòng)態(tài)過程。一些指標(biāo),如血脂,其與CHD的相關(guān)性已是經(jīng)典話題。近年來,國內(nèi)外在臨床生化指標(biāo)與CHD的相關(guān)性研究方面也取得了一定發(fā)展。傳統(tǒng)運(yùn)用于肝膽疾病、腎臟疾病及痛風(fēng)等疾病診治的經(jīng)典生化指標(biāo)血清總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、血清γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)、血清尿酸(uric acid,UA)等被證實(shí)為CHD新的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但這些傳統(tǒng)的及新的危險(xiǎn)因子卻并沒有在CHD的預(yù)測(cè)機(jī)制中發(fā)揮足夠作用,主要表現(xiàn)為：1)新的生化危險(xiǎn)因子,如TBIL,UA及γ-GT等缺乏嚴(yán)格設(shè)計(jì)的大規(guī)模人群驗(yàn)證；2)對(duì)于傳統(tǒng)指標(biāo),如血脂指標(biāo)中的高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)等,過去的很多相關(guān)性研究對(duì)其在人群中的分布情況缺乏認(rèn)識(shí),數(shù)據(jù)的處理比較單調(diào),如缺乏合理的數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換和綜合。已有研究顯示,通過對(duì)不同指標(biāo)進(jìn)行合理整合,如：LDL-C/(HDL-C+TBIL)或LDL-C/HDL-C在CHD危險(xiǎn)因素中的重要性遠(yuǎn)高于其他單獨(dú)指標(biāo)。另外,研究結(jié)果也顯示,綜合了TBIL結(jié)果的LDL-C/(HDL-C+TBIL)比值與單純血脂LDL-C/HDL-C比值比較,可極大提高診斷CHD的敏感性。以上這些研究說明,通過整合多項(xiàng)指標(biāo)可提高對(duì)CHD的診斷效能,預(yù)示著重新分析整合生化指標(biāo)來提高CHD預(yù)測(cè)效能的可能性。如何利用合適的人群,綜合分析常規(guī)臨床生化指標(biāo)在CHD預(yù)測(cè)中的效能；如何發(fā)現(xiàn)新的CHD易感基因并將基因危險(xiǎn)因子與age、性別及臨床生化指標(biāo)等因子有機(jī)結(jié)合起來；探索一種適合我國漢族人群、具備理想敏感性及特異性的預(yù)測(cè)機(jī)制等問題值得深入研究。我國是一個(gè)多民族的人口大國,在疾病的病理生理過程中存在著民族差異,主要表現(xiàn)為：1)不同民族有著不同的遺傳背景,即使同為漢族人群,其遺傳背景也可能因?yàn)槿丝谶w移、異族間通婚等因素變的更加復(fù)雜；2)不同民族及城鄉(xiāng)人群在生活習(xí)慣、飲食特征上均差異明顯。因此探索一種適合我國人群、具備理想敏感性及特異性的CHD預(yù)測(cè)機(jī)制具有極大挑戰(zhàn)性,不是一個(gè)地區(qū)一個(gè)課題能完成的。為此,本次研究將對(duì)象主要鎖定為玉溪地區(qū)漢族人群,先進(jìn)行一些探索性研究和驗(yàn)證,再將成果進(jìn)行擴(kuò)大和推廣。同時(shí),由于玉溪地處云南,少數(shù)民族眾多,其中的彝族、哈尼族和傣族不論在全省還是全市均為排名前三的少數(shù)民族,具有一定的民族代表性,故也希望通過對(duì)以上三個(gè)少數(shù)民族的研究,進(jìn)而了解民族間基因多態(tài)性的差異。綜上所述,本次研究目的主要有以下幾方面：1.選擇玉溪地區(qū)漢族健康人群及CHD人群,收集人群的常規(guī)生理生化指標(biāo),通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,明確各指標(biāo)與CHD的相關(guān)性及相關(guān)模式,嘗試建立對(duì)CHD具有較高診斷效能的評(píng)估模型。2.通過病例對(duì)照研究,探討SDF-1基因3’端rs1801157位點(diǎn)SNP與玉溪地區(qū)漢族CHD人群間的相關(guān)性,比較玉溪地區(qū)主要民族漢族、彝族、哈尼族和傣族該基因位點(diǎn)基因型及等位基因頻率的差異,并與國內(nèi)外已有研究結(jié)果進(jìn)行比較,了解該基因位點(diǎn)的民族或種族差異性。3.通過病例對(duì)照研究,探討hTERT編碼基因1號(hào)內(nèi)含子rs2736100位點(diǎn)SNP與玉溪地區(qū)漢族CHD人群間的相關(guān)性,比較玉溪地區(qū)主要民族漢族、彝族、哈尼族和傣族該基因位點(diǎn)基因型及等位基因頻率的差異,了解該基因位點(diǎn)的民族差異性。4.通過將第一章基于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子得到的數(shù)學(xué)評(píng)估模型運(yùn)用于第二和第三章研究對(duì)象中,除可再次驗(yàn)證模型的有效性和重復(fù)性,還希望能從中發(fā)現(xiàn)基因易感性與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子間的關(guān)聯(lián)性,探索基因易感性與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子聯(lián)合運(yùn)用的可能性。方法第一章玉溪地區(qū)漢族人群冠心病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型的建立與臨床評(píng)價(jià)1.1研究對(duì)象1.1.1建立數(shù)學(xué)模型所用研究對(duì)象選擇2010年10月至2013年3月我院心內(nèi)科確診的CHD患者男性664例(年齡分布27-87歲,平均年齡62.2歲)為男性病例組；女性385例(年齡分布38-86歲,平均年齡64.9歲)為女性病例組。選擇同期健康體檢者男性400例(年齡分布24-84歲,平均年齡45.5歲)為男性對(duì)照組,女性227例(年齡分布23-71歲,平均年齡43.3歲)為女性對(duì)照組。1.1.2驗(yàn)證數(shù)學(xué)模型所用研究對(duì)象選擇2013年11月至2014年12月我院心內(nèi)科確診的CHD患者男性312例(年齡分布27-82歲,平均年齡61.7歲)為男性病例組；女性119例(年齡分布45-82歲,平均年齡65.5歲)為女性病例組。選擇同期健康體檢者男性198例(年齡分布26-76歲,平均年齡49.4歲)為男性對(duì)照組、女性214例(年齡分布22-77歲,平均年齡46.0歲)為女性對(duì)照組。研究對(duì)象均按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行嚴(yán)格篩選。所有研究對(duì)象均空腹8-12小時(shí)(hour,h),于次日清晨抽取外周靜脈血5mL,置于帶分離膠及促凝劑的生化管(黃色蓋子)中,于2h內(nèi)3000r/min離心10min,分離血清用于生化項(xiàng)目檢測(cè)。1.2方法1.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)以下血清生化指標(biāo)：總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、HDL-C、LDL-C、UA、同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)、載脂蛋白A1(apolipoprotein A-1,APOA1)、載脂蛋白B100(apolipoprotein B-100,APOB100)、脂蛋白a[lipoprotein(a),Lp(a)]、TBIL、直接膽紅素(direct bilirubin,DBIL)、γ-GT。均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c 701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑進(jìn)行檢測(cè)。1.2.2 CHD發(fā)病預(yù)測(cè)模型的建立方法及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。變量按照男女分層,所有納入變量首先需經(jīng)過分布規(guī)律觀察,掌握其集中和離散趨勢(shì)；對(duì)于偏態(tài)分布的變量實(shí)施合理數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換后重新評(píng)估其分布特征;正態(tài)分布變量用XX±s描述,偏態(tài)分布變量用四分位數(shù)M(P25,P7s)描述,兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05；運(yùn)用Pearson Correlation coefficient矩陣來確定變量間的相關(guān)關(guān)系,結(jié)合臨床及生物化學(xué)知識(shí)挑選代表性變量以減少混雜因素對(duì)后續(xù)回歸分析的影響；單變量分析各自變量與應(yīng)變量(CHD)間的差異性,確立P0.1的變量納入后續(xù)logistic回歸模型；采用建模人群,運(yùn)用二分類logistic回歸手段建立各變量與CHD相關(guān)關(guān)系數(shù)學(xué)模型,確認(rèn)各預(yù)測(cè)因子(predictors)與CHD的相關(guān)關(guān)系及相關(guān)系數(shù)；運(yùn)用似然比檢驗(yàn)、比分檢驗(yàn)及受試者工作特性曲線下面積(area under receiver operating characteristic curve,AUC)等了解logistic回歸過程中各變量的似然性、代表性以及各變量在模型中的權(quán)重；運(yùn)用上述結(jié)果推導(dǎo)出本地區(qū)漢族男性和女性CHD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)方程；運(yùn)用驗(yàn)證人群,采用AUC驗(yàn)證上述CHD預(yù)測(cè)方程的有效性和重復(fù)性；將建模人群和驗(yàn)證人群進(jìn)行合并,確立最終具有很高預(yù)測(cè)效能和重復(fù)性的本地區(qū)漢族人群CHD預(yù)測(cè)機(jī)制。第二章玉溪地區(qū)漢族人群基質(zhì)細(xì)胞衍生因子基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究2.1研究對(duì)象收集2013年4月至2013年10月在我院心內(nèi)科確診的漢族CHD患者84例為病例組(其中男性64例,女性20例,年齡分布36-79歲,平均年齡62.4歲)。收集同期進(jìn)行健康體檢的漢族人群257例為對(duì)照組,但有4例樣本實(shí)驗(yàn)中未檢測(cè)出質(zhì)譜信號(hào),故未能成功分型,最終253例(男性152例,女性101例,年齡分布26-60歲,平均年齡33.9歲)納入對(duì)照組研究。以上漢族人群均三代以上居住在玉溪地區(qū),無與其他民族通婚或近親結(jié)婚史。本次研究的少數(shù)民族人群來源于云南省玉溪市元江哈尼族彝族傣族自治縣,標(biāo)本采集于2014年7月,其中彝族人群標(biāo)本采集于洼垤鄉(xiāng)、哈尼族人群采集于因遠(yuǎn)鎮(zhèn)、傣族人群采集于甘莊街道,以上區(qū)域均為該民族自然聚居區(qū)。所有對(duì)象均無與其他民族通婚或近親結(jié)婚史,保證了民族血統(tǒng)的純正性。其中,彝族人群169例(男性75例,女性94例,年齡分布22-84歲,平均年齡43.8歲)、哈尼族128例(男性56例,女性72例,年齡分布20-90歲,平均年齡50.1歲)、傣族215例(男性68例,女性147例,年齡分布21-82歲,平均年齡47.8歲)。所有研究對(duì)象均空腹8-12h,于次日清晨抽取外周靜脈血5mL,置于帶分離膠及促凝劑的生化管(黃色蓋子)中,于2h內(nèi)3000r/min離心10min,分離血清用于生化項(xiàng)目檢測(cè)；另抽取外周靜脈血3mL,置于5mL EDTA抗凝管(紫色蓋子)中,抽血后立即輕輕充分混勻全血標(biāo)本,保存于-20℃冰箱,用于提取全血基因組DNA。本研究獲玉溪市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有受試者均簽定知情同意書。2.2方法2.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c 701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測(cè)了TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、HCY、APOAl、APOB100、Lp(a)、TBIL、 DBIL、γ-GT共計(jì)12項(xiàng)生化指標(biāo)。2.2.2基因組DNA提取、擴(kuò)增及SNP檢測(cè)按照QIAamp DNA Blood Mini Kit(Gaithersburg,MD)廠商說明書從全血中提取100uL基因組DNA,將提取的DNA溶解于20mL含1mmolEDTA的Tris-HCl緩沖液(pH8.0)中,儲(chǔ)存于-30C備用。SDF-1基因多態(tài)性依照Mass Array(San Diego, CA)用戶使用指南進(jìn)行測(cè)定。采用Sequenom Mass Assay Design 4.0(美國sequenom公司)進(jìn)行引物設(shè)計(jì),上海英駿生物公司(invitrogen)負(fù)責(zé)引物合成。上游引物序列為5'ACGTTGGATGTCACACTGCTGCCTCAGCTC3',下游引物序列為5'ACGTTGGATGACCCCCTTCTCCATCCACAT3',延伸引物序列為5'GCCCTCCCAGAAGAGGCAGACC3'。采用25uL的擴(kuò)增反應(yīng)體系,其中PCR擴(kuò)增體系5uL,該體系中含有NanopureH2O1.85uL、PCR Buffer with MgCl2 (10×)0.625uL、MgCl2(25 mM)0.325uL、dNTPmix(25 mM)0.1uL、Primer mix (500nM each)1.0uL、Genomic DNA(5-10ng/uL)1.0uL、Hotstar Taq(?) (5U/uL)0.1uL。上下游引物各2.0uL, DNA模板4.0uL,用雙蒸水將總體積補(bǔ)充至25uL。PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)：94℃預(yù)變性15min,94℃變性20s,56℃復(fù)性0.5min,72℃延伸1min,共45個(gè)循環(huán),72℃延伸3min。利用大小合適的DNA標(biāo)志物在6.0%的聚丙烯酰胺凝膠上電泳確認(rèn)PCR產(chǎn)物。運(yùn)用Mass Array檢測(cè)技術(shù)測(cè)定84例CHD患者和253例健康對(duì)照者SDF-1基因3’端rs1801157位點(diǎn)的基因型。Mass Array是基于單堿基引物延伸技術(shù)。Mass Array技術(shù)使用matrix-assisted激光分解電離time-of-flight (MALDI-TOF)質(zhì)譜,可直接測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物的大小,其檢測(cè)產(chǎn)物的大小與特定的基因型相關(guān)。具體方案細(xì)節(jié),可參閱Sequenom Mass Array iPLEX平臺(tái)對(duì)于SNP基因分型的使用說明。2.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。根據(jù)質(zhì)譜結(jié)果,計(jì)算基因位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率,應(yīng)用Hardy-Weinberg平衡方程計(jì)算出人群中每個(gè)等位基因3種基因型的理論值,然后與實(shí)際值進(jìn)行比較(x2檢驗(yàn)),以明確其分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料符合正態(tài)或近似正態(tài)分布的以X±s表示,偏態(tài)分布指標(biāo)用M(P25,P75)表示,將偏態(tài)分布資料進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換(ln),使之符合正態(tài)或近似正態(tài)分布,兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。第三章玉溪地區(qū)漢族人群端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究3.1研究對(duì)象研究對(duì)象中病例組情況同第二章。對(duì)照組257例樣本在該位點(diǎn)均成功分型,故全部納入對(duì)照組研究,其中(男性153例,女性104例,年齡分布18-58歲,平均33.9歲)。研究對(duì)象入選及排除標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)本的采集及處理同第二章。3.2方法3.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c 701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測(cè)了TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、HCY、APOAl、APOB100、Lp(a)、TBIL、 DBIL、γ-GT共計(jì)12項(xiàng)生化指標(biāo)。3.2.2基因組DNA提取、擴(kuò)增及SNP檢測(cè)基因組DNA提取及擴(kuò)增方法同第二章。hTERT基因1號(hào)內(nèi)含子rs2736100位點(diǎn)用于擴(kuò)增的上游引物序列為5'ACGTTGGATGTGACACCCCCACAAGCTAAG3’,下游引物序列為5'ACGTTGGATGACAAAGGAGGAAAAGCAGGG3延伸引物序列為5'TCCGTGTTGAGTGTTTCT3'.同樣采用Mass Array檢測(cè)技術(shù)測(cè)定hTERT基因1號(hào)內(nèi)含子rs2736100位點(diǎn)基因型在84例CHD患者和257例健康對(duì)照者中的分布情況。2.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理同第二章。第四章基因易感性與數(shù)學(xué)評(píng)估模型聯(lián)合運(yùn)用探索4.1研究對(duì)象分別為第二章中的病例組84例漢族CHD患者,對(duì)照組253例健康體檢漢族人群；第三章中的病例組84例漢族CHD患者,對(duì)照組257例健康體檢漢族人群。4.2方法4.2.1研究方法將第一章基于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子得到的數(shù)學(xué)評(píng)估模型運(yùn)用于第二和第三章研究對(duì)象中,計(jì)算每例樣本的模型值,按不同性別,分別比較兩組人群病例組和對(duì)照組的差異,以及不同等位基因或基因型間模型值的差異。4.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包,建立數(shù)據(jù)庫。計(jì)量資料用X±s表示,多樣本均數(shù)間比較采用方差分析,兩樣本均數(shù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果第一章玉溪地區(qū)漢族人群冠心病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型的建立與臨床評(píng)價(jià)通過嚴(yán)格質(zhì)量控制的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)臨床生化指標(biāo)實(shí)施合理篩選,可極大提高預(yù)測(cè)CHD的診斷效能,研究結(jié)果最終顯示在本地區(qū)漢族人群中：age和lnHCY為男性和女性共同的危險(xiǎn)因子,HDL-C為共同的保護(hù)因子,lnTBIL、lnTG和lnLp(a)為男性特有獨(dú)立相關(guān)因子,lnγ-GT為女性特有獨(dú)立相關(guān)因子。最終的男性CHD預(yù)測(cè)模型方程為：Probability(CHDmale final)=1/{1+exp-(-6.846+0.102 age-3.316HDL-C-0.677lnTG+0.481lnLp(a)+2.195lnHCY-0.725lnTBIL)}；最終的女性CHD預(yù)測(cè)模型方程為：Probability(CHDfemalefinal)=1/{1+exp-(-15.356+0.180age-3.105HDL-C+2.938lnHCY+0.904lnγ-GT)}.第二章玉溪地區(qū)漢族人群基質(zhì)細(xì)胞衍生因子基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究rs1801157位點(diǎn)病例組基因型分布頻率如下：G/G為50例(59.5%),G/A為30例(35.7%),A/A為4例(4.8%)。對(duì)照組基因型分布頻率如下：G/G為120例(47.4%),G/A為111例(43.9%),A/A為22例(8.7%)。各基因型間差異無顯著性。病例組G和A等位基因分布頻率分別為77.4%和22.6%,對(duì)照組G和A等位基因分布頻率分別為69.4%和30.6%。病例組G等位基因頻率高于對(duì)照組(P=0.047),差異存在顯著性。玉溪地區(qū)主要民族傣族、哈尼族、彝族、漢族(對(duì)照組)間該位點(diǎn)基因型和等位基因頻率差異均存在顯著性,漢族對(duì)照組等位基因頻率還與國內(nèi)外已有研究的多個(gè)民族或種族間差異存在顯著性。第三章玉溪地區(qū)漢族人群端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究rs2736100位點(diǎn)病例組基因型分布頻率如下：G/G為15例(17.9%),G/T為48例(57.1%),T/T為21例(25.0%)。對(duì)照組基因型分布頻率如下：G/G為25例(9.7%),G/T為171例(66.5%),T/T為61例(23.7%)。病例組G/G基因型頻率高于對(duì)照組(P=0.044),差異存在顯著性。病例組G和T等位基因分布頻率分別為46.4%和53.6%,對(duì)照組G和T等位基因分布頻率分別為43.0%和57.0%,等位基因分布頻率兩組間無顯著性差異。玉溪地區(qū)主要民族傣族、哈尼族、彝族、漢族(對(duì)照組)間該位點(diǎn)基因型和等位基因頻率差異均存在顯著性。第四章基因易感性與數(shù)學(xué)評(píng)估模型聯(lián)合運(yùn)用探索在rs1801157和rs2736100兩個(gè)基因位點(diǎn),男性和女性病例組模型計(jì)算值均高于對(duì)照組,差異有顯著性意義；在rs1801157位點(diǎn),男性G等位基因組模型計(jì)算值高于A等位基因組模型計(jì)算值,而女性G等位基因組模型計(jì)算值低于A等位基因組模型計(jì)算值；在rs2736100位點(diǎn),男性和女性均為易感基因型G/G組模型計(jì)算值最高。結(jié)論1.通過嚴(yán)格質(zhì)量控制的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)常見生化指標(biāo)實(shí)施合理篩選,可以得到較為理想的CHD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型。2.病例對(duì)照研究顯示,SDF-1基因rs1801157位點(diǎn)G等位基因可能為玉溪地區(qū)漢族人群CHD的相關(guān)危險(xiǎn)因素,該基因位點(diǎn)SNP存在民族或種族差異性。3.病例對(duì)照研究顯示,hTERT基因rs2736100位點(diǎn)G/G基因型可能為玉溪地區(qū)漢族人群CHD的相關(guān)危險(xiǎn)因素,不同民族間該位點(diǎn)SNP存在差異性。4.基因易感性與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型間存在一定關(guān)聯(lián)性,將基因易感性因素與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子進(jìn)行有機(jī)結(jié)合,可能會(huì)完善和提高對(duì)CHD評(píng)估的效能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4;R446.1

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5 錢曉燕;EGFR及KRAS基因突變臨床檢測(cè)方法學(xué)比較及其影響因素分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 顧棚;偶蹄目TLR1-4基因的分子進(jìn)化研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 王薇;ARVC患者和正常人群橋�；蛲蛔兗癝NP比較研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

8 郭秀;92例骨髓增殖性腫瘤JAK2V617F基因的檢測(cè)及其臨床意義[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

9 蔡浩;青海晚期NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)與臨床病理特征及療效的關(guān)系[D];青海大學(xué);2016年

10 陳興旺;TTR基因突變c.-743A＞T對(duì)該基因表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

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本文編號(hào)：2176106