【摘要】：目的:利用譜系追蹤技術(shù)研究新生小鼠心肌再生過程中心外膜的分化方向。方法:對野生型小鼠進行心尖切除模型的構(gòu)建,通過蘇木精-伊紅(HE)染色(n=6)觀察再生情況。免疫熒光(n=6)和RT-PCR(n=4)檢測Wt1(Wilm's Tumor Gene 1)心外膜激活情況。應(yīng)用Wt1特異標(biāo)記小鼠(Wt1GFPCre,n=6和Wt1CreERT2;Rosa26RFP,n=6)探究激活的心外膜在心肌再生過程中的激活分化情況。結(jié)果:野生型1天齡小鼠切除心尖(apex resection,AR)的10%-15%后,HE染色(n=6)結(jié)果證實新生小鼠AR后21天心臟可以完全再生,心臟組織的Wt1免疫熒光染色(n=6)和qRT-PCR檢測結(jié)果(n=4)證明新生小鼠AR后7天的切口處心外膜細胞被大量激活。Wt1GFPCre小鼠(n=6)AR后7天的GFP信號(Wt1細胞特異表達)能與上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)換(EMT)的標(biāo)志物(Vimentin)共定位,提示AR后激活的心外膜細胞能夠發(fā)生EMT。Wt1CreERT2;Rosa26RFP譜系追蹤小鼠1天齡行AR手術(shù),7天后RFP信號(Wt1來源的細胞特異表達)在切口附近能夠分別與αActinin(心肌細胞標(biāo)志物)、αSMA(血管平滑肌細胞標(biāo)志物)和FSP1(成纖維細胞標(biāo)志物)共定位,說明AR后Wt1來源的細胞可以分化為心肌細胞、血管平滑肌細胞和成纖維細胞,進而可能參與心肌再生修復(fù)過程。結(jié)論:在新生小鼠心肌再生過程中,心外膜細胞被激活,并可以分化為心肌細胞、血管平滑肌細胞以及成纖維細胞。這些發(fā)現(xiàn)為心臟醫(yī)學(xué)中的心肌細胞以及血管的再生提示了可靠的細胞來源,也為臨床研究心臟再生提供了新思路。
[Abstract]:Objective: To study the differentiation direction of the central outer membrane in the process of myocardial regeneration in neonatal mice. Methods: the apex resection model of wild type mice was constructed and the regeneration was observed by hematoxylin eosin (HE) staining (n=6). Immunofluorescence (n=6) and RT-PCR (n=4) were used to detect the activation of the epicardium in Wt1 (Wilm's Tumor Gene 1). Wt1 specific labelled mice (Wt1GFPCre, n=6 and Wt1CreERT2; Rosa26RFP, n=6) explored the activation and differentiation of the activated epicardium during cardiac regeneration. Results: the wild type 1 days old mice excised the 10%-15% of the apex (apex resection, AR), HE staining (n=6) could completely regenerate the heart 21 days after the neonatal mice. Immunofluorescence staining (n=6) and qRT-PCR test results (n=4) showed that the epicardial cells in the incisional incision at 7 days after AR were activated by a large number of.Wt1GFPCre mice (n=6) AR after 7 days of GFP signal (Wt1 cell specific expression) could be Co located with the marker of epithelial cells converting to mesenchymal cells (EMT), suggesting the epicardial cells activated after AR. EMT.Wt1CreERT2; Rosa26RFP pedigree traced mice at 1 days of age for AR surgery, and 7 days later, RFP signals (specific expression of Wt1 source cells) were able to co localize with alpha Actinin (myocardial cell marker), alpha SMA (vascular smooth muscle cell marker) and FSP1 (fibroblast cell marker) near the incision, indicating that the cells of Wt1 origin after AR can be found. It is differentiated into cardiomyocytes, vascular smooth muscle cells and fibroblasts, and may be involved in the process of regeneration and repair of myocardium. Conclusion: epicardial cells are activated during the regeneration of neonatal mice and can be differentiated into cardiomyocytes, vascular smooth muscle cells and fibroblasts. These findings are cardiac myocytes in cardiac medicine and The regeneration of blood vessels indicates reliable cell source and provides a new idea for clinical research on cardiac regeneration.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R54

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本文編號：2155224