發(fā)布時(shí)間：2016-12-15 17:10

  本文關(guān)鍵詞：miRNAs and lncRNAs in vascular injury and remodeling，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中南大學(xué)》 2014年

長(zhǎng)非編碼RNA H19在乳腺癌化療耐藥中的作用與機(jī)制研究

曲辰  

【摘要】：研究背景與目的 乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤。迄今為止,手術(shù)、放療、化療仍然是乳腺癌的主要治療手段。其中化療以其在手術(shù)前控制和縮小病灶,手術(shù)后防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等特殊作用而在乳腺癌綜合治療中占有不可替代的地位。但是幾乎不可避免的化療耐藥一直是有效控制乳腺癌的瓶頸。乳腺癌耐藥與乳腺癌患者復(fù)發(fā)及侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān),但發(fā)生機(jī)制并未明確。因此研究乳腺癌耐藥機(jī)制,尋找新的耐藥標(biāo)志物對(duì)于有效逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥,提高乳腺癌治療水平具有非常重要的理論意義和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 長(zhǎng)非編碼RNA (Long no-coding RNA, LncRNA)是一類長(zhǎng)度在200bp以上的非編碼RNA。許多研究顯示LncRNA可能參與到腫瘤發(fā)生發(fā)展、治療耐受等多種病理過(guò)程。本課題采用LncRNA基因芯片檢測(cè)了我們前期建立的5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞系(MCF7/5FU)和親本細(xì)胞(MCF7) LncRNA表達(dá)差異,旨在構(gòu)建乳腺癌耐藥細(xì)胞與敏感細(xì)胞LncRNA差異表達(dá)譜,篩選和鑒定乳腺癌耐藥相關(guān)LncRNA,為闡述乳腺癌耐藥機(jī)制提供新的理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1.通過(guò)長(zhǎng)非編碼RNA高通量基因芯片分析5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞(MCF7/5FU)與親代乳腺癌細(xì)胞(MCF7)之間的 長(zhǎng)非編碼RNA表達(dá)差異.本項(xiàng)目受國(guó)家自然科學(xué)基金資助(基金資助號(hào)：81272450) 2.熒光實(shí)時(shí)定量PCR從MCF7/5FU及親代MCF7細(xì)胞和12例乳腺癌組織及配對(duì)癌旁組織驗(yàn)證H19等片段的表達(dá)差異； 3.采用靶向H19的siRNA干擾MCF7和T47D細(xì)胞中H19的表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)干擾效果,MTS檢測(cè)H19干擾后細(xì)胞耐藥性變化； 4.構(gòu)建H19表達(dá)慢病毒感染H19低表達(dá)的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞,嘌呤霉素篩選后獲得H19穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞系,MTS檢測(cè)其耐藥性變化； 5. Western blot檢測(cè)H19干擾和過(guò)表達(dá)細(xì)胞中EMT標(biāo)志物的表達(dá)變化情況；Transwell實(shí)驗(yàn)確定這些細(xì)胞侵襲性的變化； 6.實(shí)時(shí)定量PCR確定H19干擾的MCF7、T47D細(xì)胞、H19過(guò)表達(dá)的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞相對(duì)對(duì)照細(xì)胞miRNA200c的表達(dá)變化,western blot檢測(cè)miRNA200c的下游分子ZEB1的表達(dá)變化； 7.將miRNA200c抑制物導(dǎo)入H19過(guò)表達(dá)細(xì)胞,MTS、transwell和western blot檢測(cè)miRNA200c抑制物對(duì)H19表達(dá)的影響,確定miRNA200c在H19參與的調(diào)控過(guò)程中的作用； 8.染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)檢測(cè)H19干擾的MCF7、T47D細(xì)胞、H19過(guò)表達(dá)的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞相對(duì)對(duì)照細(xì)胞miRNA200c啟動(dòng)子組蛋白H3乙�；淖兦闆r,確定H19對(duì)miRNA200c的表達(dá)調(diào)控機(jī)制； 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.基因芯片和實(shí)時(shí)定量PCR提示H19長(zhǎng)非編碼RNA在藥物敏感乳腺癌細(xì)胞MCF7和藥物耐受乳腺癌細(xì)胞MCF7/5FU之間存在明顯的表達(dá)差異。在MCF7/5FU細(xì)胞中H19表達(dá)明顯下調(diào)。另外在先天耐藥的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞中同樣存在明顯的H19表達(dá)下調(diào)； 2.H19的表達(dá)水平在乳腺癌組織中相對(duì)癌旁正常組織存在顯著的表達(dá)下調(diào)； 3.在藥物敏感的上皮表型乳腺癌細(xì)胞MCF7和T47D中干擾H19表達(dá)后這些細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、紫杉醇等三種化療藥物的敏感性出現(xiàn)了一定程度的下降； 4.通過(guò)慢病毒表達(dá)載體在乳腺癌耐藥細(xì)胞系MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞中過(guò)表達(dá)H19,MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)這兩株細(xì)胞的耐藥性出現(xiàn)部分逆轉(zhuǎn)； 5.H19干擾的MCF7和T47D細(xì)胞EMT標(biāo)志物表達(dá)出現(xiàn)變化,上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào),間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達(dá)上調(diào),且侵襲性上升； 6.干擾H19表達(dá)的MCF7和T47D細(xì)胞中miR200c表達(dá)量下降,過(guò)表達(dá)H19的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞中miRNA200c表達(dá)量上升；且H19過(guò)表達(dá)的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞的EMT標(biāo)志物出現(xiàn)變化,上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)上調(diào),間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達(dá)下調(diào),且侵襲性下降； 7.在H19過(guò)表達(dá)的MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞中轉(zhuǎn)入miRNA200c抑制物后,這兩株細(xì)胞的耐藥性上升、侵襲性增強(qiáng)且上皮標(biāo)志物表達(dá)下調(diào),間充質(zhì)標(biāo)志物上調(diào)； 8. CHIP實(shí)驗(yàn)顯示干擾H19后MCF7和T47D細(xì)胞miRNA200c啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3乙�；较陆�,而過(guò)表達(dá)H19后MCF7/5FU和MDA-MB-231細(xì)胞miRNA200c啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3乙�；缴仙�； 結(jié)論 1.H19長(zhǎng)非編碼RNA為乳腺癌多藥耐藥的重要標(biāo)志物,其表達(dá)下調(diào)是乳腺癌化療耐受和侵襲性增強(qiáng)的原因之一； 2.H19長(zhǎng)非編碼RNA通過(guò)激活miRNA200c對(duì)抗乳腺癌細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)增加乳腺癌細(xì)胞藥物敏感性,降低細(xì)胞侵潤(rùn)； 3.H19長(zhǎng)非編碼RNA主要通過(guò)提高miRNA200c啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3乙�；蕉せ頼iRNA200c表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

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【共引文獻(xiàn)】

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4 李瑋;磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)及擴(kuò)散加權(quán)成像與乳腺癌生物學(xué)預(yù)后因子相關(guān)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年

5 李鈺婷;乳腺癌基因分型中三陰性乳腺癌的臨床生物學(xué)行為探討[D];吉林大學(xué);2012年

6 邱鏡丹;三陰性乳腺癌的臨床病理特征及預(yù)后分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

7 曾會(huì)會(huì);晚期乳腺癌的維持治療[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

8 張捷;三陰性乳腺癌的臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后因素分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 白麗園;RNA結(jié)合蛋白QKI-5在乳腺癌中的初步功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 李曦洲;乳腺癌各分子亞型中骨橋蛋白的表達(dá)及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：214096