【摘要】：目的:房顫是心血管領域急待解決的課題,本研究希望探索既能夠根治房顫又副作用小的有效治療途徑。既能夠根治房顫又副作用小的有效治療途徑。房顫發(fā)生機制的研究表明:心房電重構和結構重構是房顫發(fā)生維持的主要原因,其中鈣超載發(fā)揮重要作用,而心房肌細胞SERCA 2a表達不足是鈣循環(huán)失衡的關鍵,本課題在制作穩(wěn)定的動物房顫模型基礎上,通過心臟特異性感染AVV9病毒載體,應用分子學方法轉SERCA 2a基因對房顫心房肌細胞進行基因調(diào)補,觀察SERCA2的蛋白表達,檢測轉基因前后房顫誘發(fā)率、應用膜片鉗技術記錄心房肌細胞的動作電位及其離散度、L-型鈣電流,評估轉SERCA 2a基因對房顫心房肌細胞電生理、病理生理的影響。評價轉基因的病毒載體AAV9的安全性及轉SERCA 2a基因治療房顫的分子學機制,為房顫的機制研究和治療提供理論依據(jù)和新的思路。本研究課題包括:(1)比較不同轉染方式轉導9型腺相關病毒介導肌漿網(wǎng)鈣ATP酶基因的有效性和安全性。(2)研究AAV9-SERCA 2a基因轉染對心房顫動物模型心房結構重構和電重構的影響。(3)研究AVV9-SERCA 2a基因轉染后對急性房顫模型心肌細胞L-型鈣電流影響。方法:本課題第一部分采用60只雄性SD大鼠根據(jù)基因轉染方式不同,隨機分為2組:心包腔注射組(IPI)、心肌注射組(IMI),各組再根據(jù)轉染對象不同各分為三個亞組:AAV9-SERCA 2a-EGFP組、AAV9-EGFP組和生理鹽水組。檢測不同方法轉染的有效性和安全性。本課題第二部分采用60只新西蘭大白兔根據(jù)轉染對象不同,隨機分為4組,房顫組、轉染熒光蛋白房顫組、轉染SERCA 2a基因房顫組和對照組。轉染后建立急性房顫模型。檢測動物模型的、房顫誘發(fā)率測定、右心房有效不應期、SERCA 2a和LVDCCa1c蛋白表達情況。本課題第三部分采用9只新西蘭大白兔根據(jù)轉染對象不同,分為房顫組、轉染SERCA 2a基因房顫組,對照組3個組。檢測SERCA 2a基因轉導對急性房顫模型L-型鈣電流的影響。結果:本課題第一部分結果:1)SERCA 2a蛋白的WesternBlot結果心肌轉染基因表達明顯高于肝、腎,IPI組轉染表達高于IMI組(P0.01)。2)基因導入28d,IPI組大鼠心電圖正常,觀察時間內(nèi)無心律失常發(fā)生,IMI組2只大鼠(其中轉染NS組1只,轉染AAV9-SERCA 2a-EGFP組1只)出現(xiàn)室性早搏。3)基因導入28d,各組大鼠轉染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA 2a-EGFP與轉染NS相比,血液生化學指標AST、ALT、CRE、BUN差異無統(tǒng)計學意義。本課題第二部分結果:1)房顫組和轉染熒光蛋白房顫組起搏4h后AERP150較起搏前及對照組縮短(P0.05),隨起搏時間延長呈進行性加重。AERP在AF組和rAAV9+EGFP+AF組間無明顯差異(P0.05),rAAV9+EGFP+SERCA 2a+AF組自起搏8h后AERP150較對照組縮短(P0.05),起搏12h后AERP150較AF組和rAAV9+EGFP+AF組縮短程度減輕(P0.05)2)與AF組相比,rAAV9+SERCA 2a+EGFP+AF組兔左右心房直徑有一定程度的增大,但未達到統(tǒng)計差異(P0.05),EF值明顯降低,降低了32.56%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。而rAAV9+EGFP+AF組各項參數(shù)與AF組相比并未顯著改善(P0.05)。本課題第三部分結果:房顫24h后,可見心房肌細胞L-型鈣電流幅值和電流密度明顯減小。房顫24h組轉峰值電流密度比SERCA 2a基因組明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1)心肌注射法、尾靜脈注射法及心包腔內(nèi)注射法轉導滴度AAV9-SERCA 2a基因28天時,實驗大鼠無明顯肝腎毒性和心功能損害,未引起炎性反應。兩種轉染方式均是安全有效的。IPI法在轉染效率及副作用方面均優(yōu)于IMI法。2)AAV9-SERCA 2a基因轉染可明顯改善急性房顫模型的心房肌結構重構和電重構。3)轉SERCA 2a基因治療可減少急性房顫模型心細胞鈣超載,減少房顫對Ica-L的電流密度的影響,對防止心臟電重構具有積極的意義。本研究結果提示轉SERCA 2a基因治療可減少急性房顫模型心細胞鈣超載,減少房顫對Ica-L的電流密度的影響,對防止心房電重構和機械重構具有積極的意義,從而減少了房顫的發(fā)生和維持,為發(fā)現(xiàn)房顫新的防治途徑提供了有在益的探索。
[Abstract]:Objective : To study the effect of AVV9 gene on atrial fibrillation ( AF ) in patients with atrial fibrillation ( AF ) . ( 3 ) The effect of AVV9 - SERCA 2a gene transfection on L - type calcium currents in rats with acute AF model was studied . Compared with AF group , there was no significant difference between AF group and AF group ( P0.05 ) .
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.75

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本文編號：2136480