【摘要】：在全球范圍內(nèi),動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)具有很高的發(fā)病率和致死率,盡管該病理改變常見(jiàn),但其發(fā)病機(jī)制尚未得到完全認(rèn)知。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊主要呈不規(guī)則樣位于動(dòng)脈血管的內(nèi)膜層,并使內(nèi)膜下增厚。斑塊主要由細(xì)胞、結(jié)締組織、脂質(zhì)以及代謝殘片組成,它是由一系列細(xì)胞分子調(diào)節(jié)應(yīng)答產(chǎn)生的結(jié)果。糖尿病、高血壓、高脂血癥等刺激導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷后,均可誘發(fā)動(dòng)脈粥樣斑塊形成和發(fā)展。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞損傷后,不同類型的細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、炎癥細(xì)胞等),釋放多種介質(zhì),如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子,從而誘發(fā)多重效應(yīng)。這些生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子可促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells, VSMCs)從靜息狀態(tài)下的收縮表型向激活狀態(tài)下的合成表型轉(zhuǎn)化,促進(jìn)VSMCs增殖和遷移,以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積。斑塊的中心部位,是由泡沫細(xì)胞和細(xì)胞外脂滴形成的中心壞死區(qū),它們被由VSMCs以及富含膠原蛋白的基質(zhì)所組成的“纖維帽”所包繞�！袄w維帽”的狀態(tài)決定了斑塊的穩(wěn)定性,而VSMCs是影響“纖維帽”是否完好的重要因素。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,女性在絕經(jīng)前心血管疾病的發(fā)病率較低而在絕經(jīng)后發(fā)病率顯著上升,并且冠心病的發(fā)病率有明顯的性別差異,女性患心血管疾病的平均年齡比男性晚10年,這說(shuō)明雌激素(Estrogen, E2)對(duì)心血管系統(tǒng)有保護(hù)作用。雖然有相反的研究認(rèn)為雌激素替代療法對(duì)心血管并無(wú)益處,但“機(jī)會(huì)窗”假說(shuō)的提出,讓人們重新認(rèn)識(shí),并廣泛的接受了雌激素替代療法,認(rèn)為在絕經(jīng)后早期(絕經(jīng)10年)使用雌激素替代療法對(duì)心血管系統(tǒng)仍有顯著的保護(hù)作用。研究表明,E2可調(diào)節(jié)血脂水平,例如,可降低低密度脂蛋白(LDL),提高高密度脂蛋白(HDL)水平,同時(shí)E2促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮(Nitric oxide,NO)誘導(dǎo)血管舒張,從多途徑抑制血管損傷應(yīng)答以及動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。之前有研究顯示,E2可以保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能,促進(jìn)內(nèi)皮遷移。另外還發(fā)現(xiàn),E2可抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的VSMCs遷移。然而,E2對(duì)炎性分子調(diào)節(jié)的作用機(jī)制仍不明確。最近有報(bào)道顯示,腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)可調(diào)節(jié)心血管功能。TRAIL作為細(xì)胞因子TNF家族的同系物,最早于20年前被發(fā)現(xiàn),也被稱為Apo-2配體(Apo-2L)或TNF超家族10 (TNFSF10)。TRAIL與Fas有23%同源性,與TNG-a有19%同源性。人的TRAIL屬于II型跨膜蛋白,含有281個(gè)氨基酸(鼠科動(dòng)物有291個(gè))。膜結(jié)合的TRAIL可以被半胱氨酸蛋白酶切割,形成可溶性TRAIL進(jìn)入外周循環(huán)。可溶性TRAIL主要來(lái)源于激活的白細(xì)胞,如單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。可溶性的TRAIL通過(guò)其230位的半胱氨酸殘基與二價(jià)鋅離子相互螯合,促進(jìn)TRAIL形成有活性的同源三聚體,進(jìn)而與相應(yīng)的受體結(jié)合發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。TRAIL有強(qiáng)大的抗腫瘤活性,并且作為癌癥治療靶點(diǎn)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。TRAIL除了可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)心血管系統(tǒng)也有強(qiáng)大的保護(hù)效應(yīng),例如TRAIL基因缺失會(huì)增加高血脂小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積。然而在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),一定劑量的TRAIL同樣可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,VSMCs增殖和遷移,泡沫細(xì)胞形成等,這些結(jié)果提示增加TRAIL用量也會(huì)促進(jìn)血管炎癥反應(yīng),導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等不良效應(yīng)。目前已有研究顯示,體內(nèi)血清中TRAIL表達(dá)水平與E2水平呈顯著負(fù)相關(guān),并且體外實(shí)驗(yàn)顯示,給予E2處理后,可明顯降低外周血單核細(xì)胞TRAIL的表達(dá),這表明TRAIL可能是E2的調(diào)控靶點(diǎn)。綜上所述,本研究將探討E2對(duì)VSMCs中TRAIL的表達(dá)影響,并進(jìn)一步闡明E2抑制VSMCs增殖和遷移的作用機(jī)制。第一章E2對(duì)VSMCs中TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)影響為了探討E2對(duì)VSMCs中TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)影響,我們分別采用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)水平,并用MTT法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察E2對(duì)TNF-a誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的影響。1.1 TNF-a通過(guò)TRAIL促進(jìn)VSMCs增殖和遷移首先,我們用不同濃度的TNF-α (1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)處理大鼠的VSMCs 24h,分別用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液中TRAIL蛋白表達(dá)濃度以及VSMCs中TRAIL mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示,TRAIL蛋白表達(dá),與對(duì)照組比較,當(dāng)TNF-α濃度大于等于10ng/ml時(shí)可明顯增加VSMCs中的TRAIL表達(dá),增長(zhǎng)率分別為(56.6±7.8)%、(80.9±9.2)%、(119.1±11.3)%(n=5,*p0.01 vs.CON；**p0.001 vs.CON)；TRAIL mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較,同樣在TNF-α處理濃度大于等于10 ng/ml時(shí)可明顯增加TRAIL mRNA表達(dá),增長(zhǎng)率分別為(110±10.9)%、(180±13.1)%、(220±13.2)%,(n=5,**p0.01 vs.CON)。其次,我們用MTT方法檢測(cè)不同濃度TNF-α(1ng/ml、10 ng/m1、50 ng/m1、100 ng/m1)對(duì)大鼠VSMCs增殖情況。結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,當(dāng)TNF-a濃度大于等于10 ng/ml時(shí)可明顯促進(jìn)VSMCs的增殖,增殖率分別為(48.6±6.7)%、(66.9±6.9)%、(98.6±8.6)%(n=5,*p0.01 vs.CON；**p0.001vs.CON)。最后,我們用TRAIL的中和抗體阻斷TRAIL作用,用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察‘TNF-α對(duì)大鼠VSMCs遷移能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),TNF-α可明顯促進(jìn)劃痕大鼠VSMCs向中間空白的劃痕區(qū)域遷移,而用TRAIL中和抗體(20μg/ml)預(yù)孵育24 h,阻斷TRAIL信號(hào)傳導(dǎo)后,TNF-a促進(jìn)大鼠VSMCs遷移能力明顯受到抑制。1.2 E2呈濃度依賴性抑制TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)為了觀察E2對(duì)TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)的影響,我們用模擬生理濃度的E2(10-9M、10-8M、10-7M、10-6M)預(yù)處理大鼠再用VSMCs 24h,處理24h,分別用TNF-α (100ng/ml)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液中ELISA的蛋白表達(dá)水平以及TRAIL中VSMCs表達(dá)水平。結(jié)果顯示,與TRAIL mRNA空白對(duì)照組比較,明顯增加TNF-α蛋白表達(dá),增長(zhǎng)率為(164±12.5)%(n=5,TRAIL*p0.001 vs.CON),用不同濃度E2(10-9M、10-8M、10-7M、10-6M)預(yù)處理24 h后可明顯抑制誘導(dǎo)的TNF-α蛋白表達(dá),其抑制率分別為(10.3±3.1)%)、TRAIL(35.0±4.8)%、(21.7±4.6)%、(30.7±6.9)%(n=5,#p0.05 vs.表達(dá),與空白對(duì)照組比較,TNF-α; ##p0.01 vs. TNF-α); TRAIL mRNA明顯增加TNF-αmRNA表達(dá),增長(zhǎng)率為(210±±17.0)%(n=5,*p0.001 vs.CON),用不同濃度TRAILE2(10-9M、10-8M、10-7M、10-6M)預(yù)處理24h后可明顯抑制誘導(dǎo)的TNF-α表達(dá),其抑制率分別為(18.7±3.6)%、(51.6±3.3)%、(47.4±5.1)%、TRAIL mRNA(44.2±3.8)%(n=5,#p0.05 vs.##p0.01 vs.TNF-α)。TNF-α;1.3 E2呈時(shí)間依賴性抑制誘導(dǎo)的TNF-α表達(dá)TRAIL我們用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠不同時(shí)間(6 h、12 h、24 h、48VSMCsh),再用處理24 h,分別用TNF-α (100g/ml)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液中蛋白表達(dá)濃度以及TRAIL中VSMCs表達(dá)水平。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,TRAIL mRNA明顯增加TNF-α蛋白TRAIL以及表達(dá),增長(zhǎng)率分別為(157.4±11.7)%和(230±±16.9)%(n=5,**p0.001mRNAvs.CON)；用10-8M濃度E2預(yù)處理12 h、24 h、48 h后可明顯抑制誘導(dǎo)TNF-α的表達(dá),其中蛋白表達(dá)抑制率分別為(18.7±5.7)%、(30.3±6.5)%、TRAIL(41.0±3.4)%(n=5,##p0.01 vs.###p0.001 vs.TNF-α;表達(dá)NF-α), mRNA抑制率分別為(54.5±6.1)%、(50.3±±5.3)%、(48.9±4.2)%(n=5,##p0.01 vs.1.4 E2通過(guò)ERα抑制TNF-α)。誘導(dǎo)的TNF-α表達(dá)TRAILE2能夠抑制誘導(dǎo)的TNF-a表達(dá),為了確定參與此作用的ER類型,TRAIL我們利用E2(10-8M-)、ERa選擇性激活劑PPT(10-9M)以及ERβ選擇性激活劑DPN(10-9M)分別預(yù)處理VSMCs 24 h,或用ER拮抗劑ICI 182,780(10-6M,提前30 min作用)阻斷ER作用后,再用1'NF-α(100 ng/ml)處理24 h,分別用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),TNF-α可促進(jìn)的TRAIL蛋白和mRNA表達(dá),E2和PPT均可抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL蛋白和mRNA表達(dá),蛋白抑制率分別為(32.7±4.7)%、(16.8±3.6)%,mRNA抑制率分別為(52.9±5.6)%、(55.9±3.9)%(n=5,*p0.001vs.CON；#p0.05 vs.TNF-α:##p0.01 vs.TNF-α),單獨(dú)使用DPN則無(wú)此效應(yīng),而ICI182,780可阻斷E2的效應(yīng),說(shuō)明E2是通過(guò)ERa抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)。1.5 E2通過(guò)ERα抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移我們用E2(10-8 M)及PPT(10-9M)分別處理VSMCs 24 h,再用TNF-α(100ng/m1)處理24h后,用MTT檢測(cè)VSMCs的增值率。結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,TNF-α可明顯促進(jìn)VSMCs的增殖,增殖率為(88.44-6.5)%,E2和PPT均可抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMCs增殖,抑制率分別為(23.1±3.5)%、(15.8±3.6)%,(n=5,*p0.001 vs. CON；#p0.01 vs.TNF-α)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣顯示,與對(duì)照組比較,TNF-α可明顯促進(jìn)VSMCs的遷移,而E2和PPT均可抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMCs遷移。小結(jié)：TNF-α可增加VSMCs中TRAIL表達(dá),從而促進(jìn) VSMCs增殖和遷移,此作用可被E2抑制,并由ERa所介導(dǎo)。第二章E2通過(guò)抑制NF-κB通路抑制TRAIL表達(dá)為了探討E2抑制TRAIL表達(dá)上調(diào)的作用機(jī)制,我們用不同的蛋白酶抑制劑篩選出參與此效應(yīng)的信號(hào)通路,并用Western blot方法及活性檢測(cè)試劑盒觀察E2對(duì)此通路的調(diào)節(jié)作用。2.1 TNF-a通過(guò)NF-κB上調(diào)TRAIL表達(dá)我們用不同信號(hào)通路抑制劑：NF-κB抑制劑PDTC (20μM)、p38抑制劑ML 3403(50μM)、JNK抑制劑IQ 1 S(20μM)、MEK抑制劑 PD 98059(5μM)和ERK1/2抑制劑FR 180204(20 μM))提前處理VSMCs 24 h后,再用TNF-a繼續(xù)處理24 h,分別用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),’TNF-a可明顯促進(jìn)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá),而只有NF-κB抑制劑PDTC處理組TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)受到抑制,其中蛋白表達(dá)抑制率為(44.4±3.3)%,mRNA抑制率為(59.1±5.6)%(n=5,*p0.01 vs.CON；#p0.01 vs.TNF-α)。說(shuō)明TNF-a促進(jìn)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)是由NF-kB信號(hào)通路介導(dǎo)的,而與MAPK信號(hào)通路無(wú)關(guān)。2.2 E2抑制TNF-a誘導(dǎo)的NF-kB p65磷酸化和轉(zhuǎn)位用10..8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,再用TNF-a (100ng/ml)處理15 min,用Western blot方法分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)p65磷酸化水平,胞漿p65以及胞核內(nèi)p65蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示,TNF-a可明顯提高p65蛋白磷酸化水平,增加率為(773.0±13.9)%,同時(shí)可增加細(xì)胞核內(nèi)p65蛋白表達(dá),增加率為(698.6±19.7)%,即促進(jìn)p65從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移；用E2預(yù)處理的實(shí)驗(yàn)組,p65磷酸化水平降低,與單純的TNF-a處理組比較,抑制率為(89.8±12.9)%,同時(shí)還可抑制p65向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移,即抑制細(xì)胞核內(nèi)p65蛋白水平,抑制率為(86.2±11.8)%(n=5,*p0.001 vs.CON；#p0.001 vs.TNF-a)。2.3 E2抑制TNF-a誘導(dǎo)的IkBα磷酸化用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,再用TNF-α (100ng/ml)處理15 min,用Western blot方法分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化IkBα水平以及IkBα的總表達(dá)量。結(jié)果提示,TNF-α可明顯提高IkBα蛋白磷酸化水平,增加率為(776.5±17.3)%,此作用可被E2抑制,抑制率為(86.2±6.2)%(n=5,*p0.001 vs.CON,#p0.001vs. TNF-α)。而TNF-P與E2對(duì)總的IKBα蛋白表達(dá)無(wú)顯著影響。2.4 E2抑制‘TNF-α誘導(dǎo)的IKK磷酸化及其活性用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,再用TNF-α (100ng/ml)處理15 min,用Western blot方法分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化的IKKα/β/γ。結(jié)果顯示,TNF-α可明顯提高IKKα/β/γ蛋白磷酸化水平,增加率分別為(626.8±13.6)%、(70I.6±19.6)%、(539.7±16.9)%,此作用可被E2抑制,抑制率分別為(85.0±7.3)%、(86.4±6.5)%、(80.8±5.4)%(n=5,*p0.001 vs.CON,#p0.00 1vs.TNF-α)。IKK活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)IKKα/β/γ活性。結(jié)果同樣顯示,TNF-a可明顯增加IKKa/p/y活性,增加率為(792.0±18.9)%,E2可抑制TNF-a誘導(dǎo)的IKKa/p/y活性增加,抑制率為(86.4±6.1)%(n=5,*p0.001 vs.CON,#p0.001vs. TNF-α)。2.5過(guò)表達(dá)p65蛋白促進(jìn)VSMCs增殖和遷移VSMCs轉(zhuǎn)染p65質(zhì)粒48 h以提高細(xì)胞內(nèi)p65蛋白表達(dá),再用TNF-a (100 ng/mL)或E2(10-8M)處理24 h,作為對(duì)照組,細(xì)胞轉(zhuǎn)染空載體后再做相同處理,通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。結(jié)果顯示,對(duì)照組中,TNF-a明顯促進(jìn)VSMCs增殖,增加率為(122.2±12.4)%,且E2可以抑制TNF-α的促增殖效應(yīng),抑制率為(27.7±6.9)%,(n=5,*p0.001 vs.CON；#p0.01 vs.TNF-α)。轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組中,TNF-α同樣可明顯促進(jìn)VSMCs增殖,增加率為(164.7±5.6)%(n=5,*p0.001vs.CON),但E2抑制作用消失。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,TNF-α處理或過(guò)表達(dá)p65蛋白后,VSMCs遷移能力明顯增強(qiáng),且E2不能逆轉(zhuǎn)此種條件下]fNF-α促VSMCs遷移的效應(yīng)。小結(jié)：E2通過(guò)抑制VSMCs中NF-kB通路,從而抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)。第三章E2通過(guò)促進(jìn)NO釋放抑制NF-kB通路在本部分實(shí)驗(yàn)中,為探討E2抑制NF-kB通路的機(jī)制,我們檢測(cè)了雌激素對(duì)于NO釋放的影響以及阻斷NO后對(duì)于NF-kB活性的調(diào)控作用。3.1不同濃度E2處理VSMCs促進(jìn)NO釋放我們用不同濃度的E2(10-9M、10-8M、10-7M、10..6M)預(yù)處理大鼠VSMCs 24h,測(cè)定其對(duì)NO釋放的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同濃度的E2(10-9M、10-8M、10-7M、10-6M)均能促進(jìn)NO釋放,其增加幅度分別為(146.4±9.3)%、(185.2±11.6)%、(165.2±12.8)%、(137.2±10.5)%(n=5,*p0.05 vs.CON;**p0.01 vs.CON)。3.2 E2呈時(shí)間依賴性促進(jìn)NO釋放我們用10-8M濃度的E2處理大鼠VSMCs不同時(shí)間(6h、12h、24h、48 h)后,檢測(cè)培養(yǎng)液上清中NO的水平。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,E2處理大鼠VSMCs 6h、12 h、24 h、48 h后均可促進(jìn)NO釋放,其增加幅度為(126.4+8.5)%、(165.2±10.4)%、(213.2±15.6)%、(180.2±12.6)%(n=5,*p0.05 vs.CON；**p0.01 vs.CON)。3.3 NO供體硝普鈉(SNP)抑制TNF-α促TRAIL表達(dá)的效應(yīng)我們以NO供體SNP(10..4M)預(yù)處理VSMCs 1 h后,用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,再用TNF-α (100ng/ml)處理24 h,以ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液中TRAIL蛋白表達(dá)濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),SNP可顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL蛋白表達(dá),其抑制率為(63.2±6.7)%(n=5,#p0.01 vs.TNF-α);E2(10-8M)同樣可以抑制TNF-α對(duì)TRAIL蛋白的上調(diào)作用,其抑制率為(60.1±7.3)%(n=5,#p0.01 vs.TNF-α),這一作用與SNP作用并不疊加,表明雌激素主要通過(guò)NO途徑抑制TRAIL蛋白表達(dá)。3.4 NO抑制劑L-NMMA抑制E2對(duì)TRAIL表達(dá)的下調(diào)效應(yīng)我們以NO抑制劑L-NMMA (10-5 M)預(yù)處理VSMCs 1 h后,用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,用TNF-α (100ng/ml)處理24 h,以ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液中TRAIL蛋白表達(dá)濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),L-NMMA對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL蛋白表達(dá)沒(méi)有影響,但其可顯著抑制E2(10-8M)對(duì)TRAIL蛋白的下調(diào)作用,其抑制率為(58.2±8.8)%(n=5,*p0.01 vs.CON)。3.5 SNP、L-NMMA對(duì)于p65/IκBα磷酸化的調(diào)控效應(yīng)我們以NO供體SNP(10-4M)或NO抑制劑L-NMMA(10-5M)預(yù)處理VSMCs’1h后,用10-8M濃度的E2預(yù)處理大鼠VSMCs 24 h,再用TNF-α (100ng/ml)處理24 h,Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化p65、IκBα水平以及其總表達(dá)量。結(jié)果表明,SNP可明顯抑制TNF-a誘導(dǎo)的p65、1κBα磷酸化,而L-NMMA可明顯抑制E2的作用。小結(jié)：E2通過(guò)促進(jìn)NO釋放,抑制VSMCs中NF-κB通路,從而抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL蛋白表達(dá)。結(jié)論：1. TNF-α誘導(dǎo)VSMCs內(nèi)TRAIL表達(dá),并促進(jìn)VSMCs增殖和遷移；2.E2可抑制VSMCs中TNF-a誘導(dǎo)內(nèi)TRAIL表達(dá),并抑制VSMCs增殖和遷移；3.E2通過(guò)促進(jìn)NO釋放,抑制VSMCs中NF-κB通路,從而抑制TNF-α誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)以及VSMCs的增殖和遷移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54

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相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;Association between TRAIL expression on peripheral blood lymphocytes and liver damage in chronic hepatitis B[J];World Journal of Gastroenterology;2005年26期

2 趙n\,王紅祥,毛紅,肖娟,鄒萍;腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體TRAIL及其受體在急性髓系白血病細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2005年01期

3 秦敏;王滿俠;;TRAIL及其相關(guān)受體與中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染[J];山東醫(yī)藥;2010年41期

4 ;Molecular mechanisms of TRAIL-induced apoptosis of cancer cells[J];Chinese Science Bulletin;2001年09期

5 ;Influence of expressed TRAIL on biophysical properties of the human leukemic cell line Jurkat[J];Cell Research;2004年02期

6 Fiona C. KIMBERLEY,Gavin R. SCREATON;Following a TRAIL: Update on a ligand and its five receptors[J];Cell Research;2004年05期

7 Raymond A DANIELS,Helen TURLEY,Fiona C KIMBERLEY,Juthathip MONGKOLSAPAYA,Paul CH’EN,Francesco PEZZELLA,Gavin R SCREATON;Expression of TRAIL and TRAIL receptors in normal and malignant tissues[J];Cell Research;2005年06期

8 胡文獻(xiàn);何超;;干擾素-γ對(duì)腫瘤細(xì)胞TRAIL耐藥的逆轉(zhuǎn)[J];國(guó)際腫瘤學(xué)雜志;2006年03期

9 寧巍巍;白咸勇;;TRAIL及其受體與腫瘤治療[J];四川解剖學(xué)雜志;2009年03期

10 陳劍;孫彥春;李新鋼;;逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL耐藥的研究進(jìn)展[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2011年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;TRAIL在原發(fā)性膽汁性肝硬化肝損傷中的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

2 Ying Ying Huang;Yang Li;Long Jian Pu;Chen Chen Jiang;Xu Dong Zhang;Hao Li;Zhi Wen Jiang;;Down-regulation of RIPl by 2-DG sensitizes breast cancer cells to TRAIL induced apoptosis[A];安徽省藥理學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 孫海燕;李棟博;王季石;;Trail蛋白、地塞米松及其聯(lián)合作用對(duì) 多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的比較性研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

4 ;Construction,expression and identification of recombinant BCG secreting TRAIL[A];2008年浙江省泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 陳金;趙福濤;;TRAIL對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞凋亡的影響[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

6 侯登勇;張英起;顏真;;人TRAIL基因的克隆、表達(dá)、純化和活性測(cè)定[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

7 ;Construction,expression and identification of recombinant BCG secreting TRAIL[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

8 梁艷;楊再興;王皓;張玲珍;孔憲濤;仲人前;;TRAIL在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血的表達(dá)及作用機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

9 田生和;全家嫵;;腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)的研究進(jìn)展[A];湖北省暨武漢市免疫學(xué)會(huì)第八屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

10 ;The roles of caveolin-1 in TRAIL induced apoptosis[A];生物膜與重大疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫艷萍;急性髓系白血病TRAIL耐藥相關(guān)microRNA分子的功能及作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

2 李恒昌;雌激素通過(guò)TRAIL抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

3 吳文俊;Vernodalol增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 劉錚;TRAIL腫瘤生物治療的可控性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

5 郭良然;復(fù)方TRAIL脂質(zhì)體的抗腫瘤作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

6 賴國(guó)旗;TRAIL對(duì)HeLa生物活性及其作用機(jī)理的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 李小安;TRAIL抗腫瘤作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 關(guān)良;重組人TRAIL及突變體的原核表達(dá)和抗腫瘤生物活性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2002年

9 宋改環(huán);TRAIL及其受體在宮頸癌細(xì)胞凋亡中的作用[D];吉林大學(xué);2006年

10 齊世美;磷酸化熱休克蛋白27與腫瘤細(xì)胞TRAIL耐受的分子機(jī)制的研究[D];南京師范大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張鳳喜;TRAIL在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其與耐藥相關(guān)基因的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王雅蕊;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）表達(dá)的調(diào)控及其分子機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 顏丙松;TRAIL在HepG2細(xì)胞表達(dá)及細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];青島大學(xué);2015年

4 王黎明;抗TRAIL單克隆抗體的性質(zhì)研究及抗原表位鑒定[D];南京大學(xué);2013年

5 王櫻霖;TRAIL及其受體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的作用研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

6 闞慶輝;TRAIL及其受體DR5在乳腺癌化療前后的差異性及意義[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

7 潘增凱;TRAIL耐藥的Kasumi-1細(xì)胞耐藥作用再誘導(dǎo)及LBH589對(duì)其逆轉(zhuǎn)耐藥作用的體外研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

8 王曉娜;自噬對(duì)TRAIL誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 閆晶怡;腺病毒fiber-TRAIL融合蛋白的構(gòu)建和抗腫瘤活性研究[D];吉林大學(xué);2016年

10 湯梅;TRAIL蛋白穩(wěn)定性影響因素初步研究[D];華東理工大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：2124816