本文選題：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 + N-乙酰半胱氨酸　； 參考：《貴州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:觀察N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-cysteine,NAC)預(yù)處理對內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)活性的影響,探討其減輕血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)和飽和脂肪酸棕櫚酸(Palmitic acid,PA)刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)損傷eNOS活性的作用機制。方法:SABC法進(jìn)行HUVECs細(xì)胞鑒定后分別予以AngⅡ(1.0×10-7M、1.0×10-6M作用12h)和PA(25μM、50μM、100μM、200μM作用24h及100μM作用12h、24h、36h)刺激。此外,給予活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除劑NAC預(yù)處理,隨機分為正常對照(Control)組、AngⅡ組、單純NAC組和NAC+AngⅡ組(1.0×10-3M NAC預(yù)處理1h后給予AngⅡ處理)以及溶媒對照(vehicle control)組、PA(50μM、100μM作用24h)組、單純NAC組和NAC+PA組(1.0×10-3M NAC預(yù)處理1h后給予PA處理)。采用Western Blot方法檢測eNOS蛋白的表達(dá)、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A C亞基Tyr307磷酸化水平以及PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)水平;化學(xué)比色法檢測細(xì)胞結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(constitutive NOS,cNOS)的活性以及培養(yǎng)基中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。結(jié)果:(1)與Control組相比,AngⅡ刺激后eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平明顯降低(p0.05),PP2A-Cα蛋白表達(dá)無明顯變化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表達(dá)水平明顯降低(p0.05),cNOS活力、NO含量明顯降低(p0.05);與vehicle control組相比,PA刺激后eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平明顯降低(p0.05),PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A-c Y307磷酸化水平及I2PP2A蛋白表達(dá)水平均無明顯變化,cNOS活力、NO含量明顯降低(p0.05)。(2)NAC預(yù)處理后,與同濃度AngⅡ組相比,eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平顯著升高(p0.05),PP2A-Cα蛋白表達(dá)無明顯變化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表達(dá)水平均顯著升高(p0.05),cNOS活力、NO含量明顯增加(p0.05);NAC預(yù)處理后,與同濃度PA組相比,eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平顯著升高(p0.05),PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A-c Y307磷酸化水平及I2PP2A蛋白表達(dá)水平仍無明顯變化,cNOS活力、NO含量增加(p0.05)。結(jié)論:(1)NAC預(yù)處理可保護(hù)AngⅡ和PA刺激所引起的eNOS活性降低,NO產(chǎn)生增加,從而發(fā)揮內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用,且保護(hù)作用機制可能不同。(2)AngⅡ和PA刺激均可引起HUVECs中eNOS活性降低,NO產(chǎn)生減少,內(nèi)皮細(xì)胞功能受損,但分子機制不同。AngⅡ可能通過降低PP2A-c Y307和I2PP2A使PP2A活性增加,最終導(dǎo)致eNOS活性降低;PA則可能通過其他機制導(dǎo)致eNOS活性降低。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of N-Acetyl-cysteine (NAC) pretreatment on the activity of endothelial nitric oxide synthase (endothelial nitric oxide). To investigate the mechanism of angiotensin 鈪，

本文編號：2112695