本文選題：骨髓間充質干細胞 + miRNA-21�。� 參考：《蘇州大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的:通過過表達或抑制micro RNA-21(mi R-21)在SD大鼠骨髓間充質干細胞SD-BMSCs(MSCs)內的表達,評估其在治療心肌梗死的效果上的變化,并研究其作用機制。方法:采用全骨髓差異貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠MSCs至第4代,使用脂質體轉染法轉染mi R21-agomir(過表達)及mi R-21 antagomir(抑制)調控mi R-21在MSCs內的表達,轉染成功后收集細胞并收集條件培養(yǎng)基,用于后續(xù)研究。體內實驗中,建立SD大鼠心肌梗死模型后,采用心肌內注射方法,分別將MSCsmi R-21 agomir組、MSCsmi R-21antagomir組、MSCs未轉染組及PBS移植至心梗及周邊區(qū)域,通過檢測大鼠心梗后心功能變化及心梗面積評估治療效果。體外實驗中,購買原代臍靜脈內皮細胞(HUVEC),心肌細胞系H9C2細胞,子宮頸癌細胞系Hela細胞。以Hela細胞為載體,通過雙熒光素酶報告驗證mi R-21的靶點是否為Jagged1。同時利用收集的MSCs轉染組產生的培養(yǎng)基和MSCs未轉染組產生的培養(yǎng)基及含有10%FBS+雙抗的DMEM/HIGH培養(yǎng)基(空白對照),用作以下兩個實驗,一是處理HUVEC細胞72小時后在Matrigel基質膠上培養(yǎng),于12小時觀察成管樣結構;二是處理H9C2細胞72h后加入CCK-8溶液孵育1個小時,檢測細胞增殖情況。結果:體內實驗中:MSCsmi R-21 antagomir組平均LVEF(%)變化值:17.14±2.63,MSCs mi R-21 agomir組LVEF(%)變化值:13.09±1.74,MSCs未轉染組LVEF(%)變化值:13.34±2.25,三組與對照組LVEF(%)變化值:7.09±4.23相比,心功能恢復效果更佳,差異有統計學意義(P0.05),三組之中,MSCsmi R-21antagomir組與心功能恢復效果最佳,與其他兩組相比差異有統計學意義(P0.05)。通過Masson染色分析心梗面積發(fā)現心梗區(qū)域纖維化組織與正常心肌面積所占橫截面外周徑比值(%):MSCsmi R-21 antagomir組最小,為10.50±3.15,與MSCsmi R-21 agomir15.91+4.12、MSCs未轉染組20.34±3.25、PBS組37.09±6.23均有統計學差異(P0.05)。心梗區(qū)域纖維化組織與正常心肌面積所占橫截面面積比值(%)MSCsmi R-21 antagomir組同樣最小,為8.31±2.35,與MSCsmi R-21 agomir組19.91+4.93、MSCs普通組25.14±2.19、PBS組31.04±5.93均有統計學差異(P0.05)。通過雙熒光素酶報告基因驗證,我們發(fā)現mi R-21可與Jagged1的m RNA 3’UTR段結合,說明mi R-21對Jagged1具有調控作用。q RT-PCR顯示,轉染mi R-21 antagomir的MSCs內的Jagged1、NOTCH、VEGF等基因全部上調。體外管樣生成實驗中,MSCsmi R-21 agomir培養(yǎng)基組體外管樣結構連接長度(11976.14±866.62)與MSCsmi R-21 antagomir培養(yǎng)基組(12196.52±858.00)、MSCs未轉染培養(yǎng)基組(12275.09±561.74)之間均無統計學差異(P0.05),但三組與空白組之間均有統計學差異(P0.01);CCK8實驗中,抑制了mi R-21在MSCs內的表達后,其條件培養(yǎng)基促心肌增殖的能力得到了明顯的增強。結論:抑制了mi R-21在MSCs內的表達后,其治療心肌梗死的能力得到了增強。mi R-21可與Jagged1 m RNA結合,對其產生調控。抑制了mi R-21在SD大鼠MSCs的表達后,Jagged1,Notch,VEGF等基因上調。MSCs產生的條件培養(yǎng)基具有促進心肌細胞增殖的能力,抑制了mi R-21在其內的表達后,這種能力得到了提升。MSCs產生的條件培養(yǎng)基也具有促進管樣結構生成的能力,但這種能力與mi R-21的表達無關。
[Abstract]:Objective: to express or inhibit the expression of micro RNA-21 (MI R-21) in SD rat bone marrow mesenchymal stem cells SD-BMSCs (MSCs), evaluate its effect in the treatment of myocardial infarction, and study its mechanism. Methods: the whole bone marrow differential adherence method was used to separate the MSCs to fourth generations of cultured SD rats, and the liposome transfection method was used to transfect mi R21. -agomir (overexpressed) and MI R-21 antagomir (inhibition) regulated the expression of MI R-21 in MSCs. After the transfection, the cells were collected and the conditioned medium was collected and used for follow-up study. In vivo, the myocardial infarction model of SD rats was established, and the MSCsmi R-21 agomir group and MSCsmi group were not transfected. The group and PBS were transplanted to the myocardial infarction and the surrounding area to evaluate the effect of cardiac function changes and myocardial infarction area after myocardial infarction. In vitro, the primary umbilical vein endothelial cells (HUVEC), myocardial cell line H9C2 cells, and cervical cancer cell line Hela cells were used to verify mi R-21 by the double Luciferase Report with the Hela cell as the carrier. Whether the target is Jagged1. and the culture medium produced by the MSCs transfection group and the culture medium produced by the MSCs untransfected group and the DMEM/HIGH culture medium containing 10%FBS+ double resistance (blank control), it is used as the following two experiments. One is to treat HUVEC cells after 72 hours to culture on the Matrigel matrix, and to observe the tube like structure in 12 hours; two After treating H9C2 cell 72h after adding CCK-8 solution to incubate for 1 hours, the cell proliferation was detected. Results: in the body experiment, the average LVEF (%) change value of MSCsmi R-21 antagomir group was: 17.14 + 2.63, MSCs mi R-21 agomir group LVEF (%) change value: 13.09 + 1.74, 13.34 + 2.25, three group and control group (%) change value: 7.09 Compared with 4.23, the effect of cardiac function recovery was better, the difference was statistically significant (P0.05). Among the three groups, the effect of MSCsmi R-21antagomir group and cardiac function recovery was the best, compared with the other two groups, the difference was statistically significant (P0.05). Through Masson staining analysis of myocardial infarction area, the section of myocardial infarction area and normal myocardial area accounted for the cross section. The ratio of peripheral diameter (%) was the smallest in MSCsmi R-21 antagomir group, 10.50 + 3.15, MSCsmi R-21 agomir15.91+4.12, 20.34 + 3.25 in MSCs untransfected group and 37.09 + 6.23 in PBS group (P0.05). The ratio of fibrotic tissue to normal myocardial area (%) MSCsmi R-21 antagomir group was the same as 8.31 + 2.35. MSCsmi R-21 agomir group 19.91+4.93, MSCs common group 25.14 + 2.19, PBS group 31.04 + 5.93 (P0.05). Through double luciferase reporter gene verification, we found mi R-21 can be combined with Jagged1 m RNA 3. Agged1, NOTCH, VEGF and other genes were all up-regulated. In vitro tube generation experiments, the tube like structure connection length of MSCsmi R-21 agomir medium group (11976.14 + 866.62) and MSCsmi R-21 antagomir medium group (12196.52 + 858), MSCs untransfected medium group (12275.09 + 561.74) had no statistical difference (P0.05), but the three group and the blank group There were statistically significant differences (P0.01); in the CCK8 experiment, the ability of MI R-21 to promote myocardial proliferation was significantly enhanced after inhibiting the expression of MI R-21 in MSCs. Conclusion: after the inhibition of the expression of MI R-21 in MSCs, the ability to treat myocardial infarction is enhanced by the combination of.Mi R-21 with Jagged1 m, and regulation of it. After inhibiting the expression of MI R-21 in the MSCs of SD rats, the conditioned medium of Jagged1, Notch, VEGF and other genes up-regulated.MSCs has the ability to promote the proliferation of cardiac myocytes. After the inhibition of the expression of MI R-21 in it, the ability to enhance the conditioned medium of ascension.MSCs also has the ability to promote tubular structure formation, but this ability It has nothing to do with the expression of MI R-21.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鄭建箏;高聰;謝富華;蒲蜀湘;陳盛強;;SD大鼠實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎模型的建立[J];實用診斷與治療雜志;2006年07期

2 馮建勛;李紅艷;田建偉;;飲食中晚期糖基化終產物對健康SD大鼠腎臟的影響[J];中國臨床康復;2006年36期

3 呂伯東;年建華;黃曉軍;張士更;耿強;陳剛;陳世濤;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌纖維化的影響[J];中華男科學雜志;2011年02期

4 陳衛(wèi)偉;楊留才;潘施文;李仕紅;徐紅濤;;線栓法制備SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年50期

5 張冬冬;張軍;;小腸結腸炎耶爾森氏菌和高碘對SD大鼠的影響[J];濱州醫(yī)學院學報;2012年01期

6 唐軍;鐘琳;姚裕家;陳娟;;SD大鼠少突膠質前體細胞系的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];實用兒科臨床雜志;2006年23期

7 李建國;孟壯志;劉海英;田耕;;降鈣素基因相關肽在受損SD大鼠面神經運動神經元中的表達與定位[J];內蒙古民族大學學報(自然科學版);2008年02期

8 趙振江;趙瑞斌;姚澤忠;;建立幼齡SD大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎模型的一種新方法[J];中國現代醫(yī)生;2009年05期

9 王雪瑩;黃紹平;陳小聰;姜永生;;SD大鼠腦皮層星形膠質細胞的原代培養(yǎng)及純化方法改良[J];陜西醫(yī)學雜志;2009年09期

10 王寒;趙根尚;周玉陽;高峰;張正升;何攀;李明;;SD大鼠骨髓間充質干細胞分離提純及鑒定[J];中華實用診斷與治療雜志;2012年05期

相關會議論文 前10條

1 呂伯東;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞凋亡的影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學術年會論文匯編[C];2009年

2 呂伯東;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞纖維化影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學術年會論文匯編[C];2009年

3 戴旭鋒;林冰;李英姿;劉曉玲;;正常SD大鼠暗適應視網膜電圖及光強-反應函數的研究[A];2006年浙江省眼科學術會議論文集[C];2006年

4 路浩;張浩;趙寶玉;韋冬梅;王占新;宋巖巖;;氯化汞對SD大鼠血液生理生化指標的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物毒物學分會2009年學術研討會論文集[C];2009年

5 周欣榮;原慧萍;王雅;馬春楊;李鴻翼;;不同強度微波輻射對SD大鼠視網膜神經節(jié)細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

6 沈陽;章捷;單治;吳鼎宇;王瑞蘭;;不同補液對急性呼吸窘迫綜合征SD大鼠凝血功能的影響[A];中華醫(yī)學會第五次全國重癥醫(yī)學大會論文匯編[C];2011年

7 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質干細胞生物學特性的研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

8 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質干細胞生物學特性的研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

9 宋哲;黎曉新;于文貞;;可變高氧環(huán)境下SD大鼠形成早產兒視網膜病變模型實驗研究[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學術研討會論文匯編[C];2008年

10 栗炳南;王峰;宋柳江;王冉;田晶;薛金鳳;譚孟群;;SD大鼠骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)鑒定及體外向血管內皮分化的的研究[A];湖南省生理科學會2008年度學術年會論文摘要匯編[C];2008年

相關重要報紙文章 前1條

1 王世煥;利用SD大鼠培育人用皮膚[N];醫(yī)藥經濟報;2001年

相關博士學位論文 前10條

1 周軍;介入硬化劑聚桂醇治療SD大鼠子宮內膜異位囊腫的實驗研究[D];武漢大學;2014年

2 喬婧;青春期重復使用非典型抗精神病藥對SD大鼠藥物敏感性及心理功能的短期和長期影響[D];西南大學;2015年

3 張姍姍;姜黃素對口腔黏膜下纖維性變SD大鼠模型抗纖維化作用及機制的研究[D];中南大學;2012年

4 馬志飛;“中低溫低流量”腦損傷SD大鼠模型的制作以及缺血預適應腦保護作用機制的研究[D];南京醫(yī)科大學;2014年

5 陳會強;SD大鼠主動脈瓣間質細胞自發(fā)鈣化模型的建立及阿托伐他汀和氨氯地平的影響[D];河北醫(yī)科大學;2012年

6 鹿楠;SD大鼠腰2移位修復骶叢撕脫傷的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

7 萬煒;暗飼養(yǎng)對視神經橫斷SD大鼠視網膜內層局部環(huán)路的影響[D];中南大學;2013年

8 蔣樹林;活血化瘀中藥對SD大鼠肝纖維化防治作用及機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2002年

9 葛成;SD大鼠成骨細胞中BMP與PKA/PKC信號途徑的交互作用[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

10 柯荔寧;人參皂苷Rb1通過抑制缺氧誘導小膠質細胞的活化減輕SD大鼠海馬神經元的缺氧損害[D];福建醫(yī)科大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 謝金蘭;硫氫化鈉對SD大鼠骨癌性疼痛影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 李翠;外源性內脂素對SD大鼠子宮內膜容受性的影響[D];河北聯合大學;2014年

3 顧國曉;早期嗅覺剝奪對SD大鼠海馬的影響的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 郭志剛;姜黃素對博來霉素致SD大鼠急性肺損傷中TNF-α和ICAM-1表達的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

5 劉永杰;miR-21對SD大鼠骨髓間充質干細胞治療心肌梗死的影響實驗研究[D];蘇州大學;2015年

6 張峰;推拿對SD大鼠肌腱末端病模型bFGF的影響[D];南京中醫(yī)藥大學;2015年

7 宋麗媛;胰腺脂肪浸潤對營養(yǎng)性肥胖SD大鼠胰島素分泌的影響[D];山東大學;2015年

8 羅翠蓮;藥物保留灌腸防治SD大鼠急性放射性直腸炎預防慢性放射性直腸炎的研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

9 林艷云;射頻電磁輻射對雄性SD大鼠和TM3細胞睪酮分泌的影響研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 萬波;改良組織塊法培養(yǎng)SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞及大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞體外培養(yǎng)表型轉化的研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：2037016