本文選題：氧連糖基化修飾 + 心肌成纖維細胞��； 參考：《中華高血壓雜志》2017年04期

【摘要】：目的采用腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)心肌成纖維細胞(CF)增殖,探討快速提高細胞內(nèi)氧連糖基化(O-GlcNAc)水平對CF功能及P65、核因子κB信號通路負向調(diào)控因子TNFAIP3蛋白表達的影響。方法胰酶聯(lián)合Ⅳ型膠原酶消化成年小鼠心臟組織培養(yǎng)CF,差速貼壁法分離純化原代CF,波形蛋白免疫熒光染色鑒定細胞類型。將CF分為空白對照組;TNF-α(10μg/L)組;Thiamet-G(150μmol/L)預(yù)處理+空白對照組;Thiamet-G(150μmol/L)預(yù)處理+TNF-α(10μg/L)組�；罴毎嫈�(shù)試劑盒(CCK-8)檢測CF增殖,細胞劃痕實驗評價遷移能力,熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測TNF-α靶基因血管細胞黏附分子1(VCAM-1)、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)mRNA表達,Western blot檢測磷酸化P65(p-P65)、總P65(t-P65)、TNFAIP3蛋白水平。結(jié)果原代培養(yǎng)的心臟細胞經(jīng)波形蛋白免疫熒光染色鑒定為CF,純度95%。Thiamet-G預(yù)處理CF 2h即可觀察到全細胞蛋白O-GlcNAc水平顯著升高(3.22±0.32比1.00±0.22,P0.05);與空白對照組相比,TNF-α處理組可激活核因子κB通路(p-P65增高:3.13±0.27比1.00±0.13,P0.05),誘導(dǎo)靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表達(4.21±0.37比1.00±0.21,11.26±0.98比1.00±0.32,均P0.05),明顯提高CF增殖及遷移能力(1.74±0.21比0.48±0.11,P0.05);與TNF-α處理組相比,Thiamet-G預(yù)處理后TNF-α誘導(dǎo)的CF增殖及遷移被抑制(1.04±0.07比1.74±0.21,P0.05),靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表達減少(2.09±0.13比4.21±0.37,3.13±0.85比11.26±0.98,均P0.05),P65蛋白總水平在12h無明顯變化(1.08±0.13比1.00±0.24,P0.05),但p-P65水平下降(1.82±0.08比3.13±0.21,P0.05),TNFAIP3蛋白表達顯著上調(diào)(5.86±0.61比2.95±0.33,P0.05)。結(jié)論快速提高細胞內(nèi)O-GlcNAc水平對TNF-α誘導(dǎo)的成年小鼠CF增殖和遷移具有抑制作用,其作用機制可能與上調(diào)TNFAIP3的表達有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽) -induced proliferation of cardiac fibroblasts (CFB) on the expression of CF and the negative regulatory factor TNFAIP3 in P65, nuclear factor- 魏 B signaling pathway. Methods CFCs were digested by trypsin combined with collagenase 鈪，

本文編號：2036292