本文選題：AS + APN��； 參考：《首都醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目的:脂聯(lián)素(adiponectin,APN)已被證實(shí)具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、調(diào)節(jié)胰島素抵抗等作用,本研究擬在細(xì)胞水平通過探究APN對巨噬細(xì)胞自噬水平的影響揭示其抗AS的新機(jī)制,為AS的臨床治療提供新靶點(diǎn)。方法:采用在體外培養(yǎng)人THP-1細(xì)胞系誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞,分為對照組,氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)組及ox-LDL+APN組,給予細(xì)胞ox-LDL處理模擬斑塊內(nèi)環(huán)境后,采用Cell Counting Kit(CCK-8)方法檢測ox-LDL對細(xì)胞的毒性,并使用蛋白質(zhì)印跡方法(Western blot,WB)檢測細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況。在給予細(xì)胞APN,ox-LDL及自噬抑制劑3-MA處理后,使用WB方法檢測細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況,應(yīng)用透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)觀察巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬小體的形成情況,使用流式細(xì)胞術(shù)Annexin V Propidium Iodide(Annexin V/PI)雙染色法檢測細(xì)胞凋亡發(fā)生情況。結(jié)果:CCK-8結(jié)果表明巨噬細(xì)胞存活率隨ox-LDL濃度升高明顯下降(P?0.05),WB結(jié)果示給予ox-LDL處理后,細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)記物L(fēng)C3 II的表達(dá)水平明顯升高,呈濃度及時(shí)間依賴性,且在ox-LDL的濃度為30 mg/L和孵育時(shí)間為6 h時(shí)自噬水平最高(P?0.05)。ox-LDL+APN組的巨噬細(xì)胞中LC3 II表達(dá)水平較單獨(dú)給予ox-LDL處理組明顯降低,同時(shí)電鏡結(jié)果也表明ox-LDL+APN組的巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬小體的形成較ox-LDL組有明顯減少(P?0.05)。Annexin V/PI染色結(jié)果顯示APN可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞早期凋亡,且APN對凋亡的抑制作用不依賴于自噬。結(jié)論:ox-LDL可使巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬水平增加,APN可能通過降低巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬水平發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用,為APN應(yīng)用于臨床抗AS的治療奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Background and objective: adiponectin (APN) has been proved to have protective effects on vascular endothelial cells, antiatherosclerosis and regulation of insulin resistance. This study aims to explore the effects of APN on macrophage autophagy at the cellular level to reveal its new mechanism of anti-atherosclerosis and to provide a new target for the clinical treatment of as. Methods: macrophages induced by human THP-1 cell line in vitro were divided into three groups: control group, ox-LDL treated group and ox-LDL APN group. The cytotoxicity of ox-LDL to cells was detected by Cell Counting Kitt CCK-8, and the expression of autophagy related proteins was detected by Western blotWB. After treatment with APNNox-LDL and 3-MA, the expression of autophagy related proteins was detected by WB method, and the formation of autophagy bodies in macrophages was observed by transmission electron microscopy (TEM). Apoptosis was detected by flow cytometry (Annexin V) and Annexin V / Pi staining. Results the survival rate of macrophages decreased significantly with the increase of ox-LDL concentration. The results showed that the expression of autophagy LC3II was increased in a dose-dependent and time-dependent manner after treatment with ox-LDL. The LC3 II expression level in macrophages of ox-LDL concentration of 30 mg / L and incubation time of 6 h was significantly lower than that of ox-LDL treatment group, and that of ox-LDL APN group was significantly lower than that of ox-LDL treatment group, and that of ox-LDL APN group was significantly lower than that of ox-LDL treatment group, and that of ox-LDL APN group was lower than that of ox-LDL group. The results of electron microscope also showed that the formation of autophagy in macrophages in ox-LDL APN group was significantly lower than that in ox-LDL group. The results showed that APN could inhibit the early apoptosis of macrophages induced by ox-LDL, and the inhibitory effect of APN on apoptosis was independent of autophagy. Conclusion the level of autophagy in macrophages increased by% ox-LDL. APN may play a protective role by decreasing the level of autophagy in macrophages, which may lay a theoretical foundation for the application of APN in the treatment of anti-atherosclerosis.
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

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本文編號：2030381