本文選題：先心病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓 + 蛋白質(zhì)組學(xué)�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文

【摘要】：第一部分：特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究及Transgelin表達(dá)差異驗(yàn)證目的：特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(idiopathic pulmonary arterial hypertension, IPAH)是指由不明原因引起的肺血管疾病,其主要特征是肺血管重塑,肺動(dòng)脈壓力漸進(jìn)性增高,目前發(fā)病機(jī)制尚未清楚。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展和完善,使人們可以組織或細(xì)胞的蛋白質(zhì)整體表達(dá)水平研究疾病。本研究應(yīng)用iTRAQ多重化學(xué)標(biāo)記-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),觀(guān)察分析正常對(duì)照組與特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者肺組織差異蛋白質(zhì),在蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討肺動(dòng)脈高壓形成機(jī)制。方法：入選6例接受肺移植手術(shù)的IPAH患者,在術(shù)中取肺組織標(biāo)本；并入選6名需接受肺部或臨近部位手術(shù),可取得肺組織的患者作為正常對(duì)照組。入選的IPAH患者均進(jìn)行右心導(dǎo)管檢查確診存在肺動(dòng)脈高壓。提取肺組織總蛋白,bradford方法定量。丙酮沉淀蛋白以及胰蛋白酶酶解之后,用iTRAQ試劑標(biāo)記,對(duì)照組,IPAH組分別用114,115標(biāo)記。用AB SCIEX TripleTOF 5600質(zhì)譜儀檢測(cè)差異蛋白,獲得差異蛋白的一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖。對(duì)鑒定到的差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析,進(jìn)行蛋白質(zhì)功能富集分析,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析,以及蛋白質(zhì)相互作用通路分析。根據(jù)生物信息學(xué)結(jié)果和文獻(xiàn)閱讀,選取可能與IPAH發(fā)病機(jī)制有關(guān)的差異蛋白,進(jìn)行免疫組化和免疫印跡研究。結(jié)果：1.共鑒定差異蛋白112個(gè),與正常對(duì)照組相比,在IPAH組上調(diào)≥1.5倍的蛋白48個(gè),下調(diào)≥1.5倍的蛋白64個(gè)。2.蛋白質(zhì)功能富集分析顯示差異表達(dá)蛋白質(zhì)參與的主要生物學(xué)過(guò)程包括對(duì)損傷的反應(yīng)、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)的組織、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞骨架的組織等。蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析顯示,這些蛋白質(zhì)參與的相互作用網(wǎng)絡(luò)主要集中在8個(gè)網(wǎng)絡(luò)模塊：免疫調(diào)節(jié)、對(duì)內(nèi)源性物質(zhì)的反應(yīng)、發(fā)育過(guò)程、對(duì)生長(zhǎng)因子及有機(jī)體的反應(yīng)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)、翻譯蛋白的膜錨定和核膜分解過(guò)程等。差異蛋白相互作用主要通路如下：細(xì)胞骨架相關(guān)通路、凝血相關(guān)通路、血紅素代謝相關(guān)通路和細(xì)胞增殖等。3.蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)IPAH患者肺組織中Transgelin(轉(zhuǎn)凝蛋白)表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(IPAH對(duì)照=5.105倍,P=0.000),免疫組化研究顯示Transgelin在特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者Transgelin表達(dá)明顯升高,且主要表達(dá)于肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,免疫印跡顯示特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者Transgelin表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P=0.017)。結(jié)論本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù),比較了正常對(duì)照和IPAH患者肺組織的差異蛋白,共鑒定112個(gè)差異蛋白,免疫組化和免疫印跡驗(yàn)證Transgelin在IPAH患者肺組織中表達(dá)上調(diào),可能與IPAH的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。第二部分：先天性心臟病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究目的：肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary arterial hypertension, PAH)是先天性體-肺分流性心臟病最常見(jiàn)的并發(fā)癥。大約5%-10%的CHD患者最終發(fā)展為肺動(dòng)脈高壓,對(duì)于已經(jīng)形成PAH,但尚未發(fā)展為艾森曼格綜合癥的先心病患者,在實(shí)施手術(shù)干預(yù)之前,難以準(zhǔn)確判斷肺血管病變的性質(zhì)及是否具有可逆性。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展和完善,使人們可以在組織或細(xì)胞的蛋白質(zhì)整體表達(dá)水平研究疾病。本研究應(yīng)用iTRAQ多重化學(xué)標(biāo)記-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),觀(guān)察分析先心病術(shù)后肺動(dòng)脈高壓可逆的患者與肺動(dòng)脈高壓不可逆的患者肺組織中的差異蛋白,在蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討先心病術(shù)后PAH可逆的分子學(xué)機(jī)制。方法：入選具有外科修補(bǔ)術(shù)適應(yīng)證的先心病患者,并于患者接受外科手術(shù)時(shí)在手術(shù)中切取肺組織；正常對(duì)照組患者在接受胸科手術(shù)時(shí)切取正常肺組織作為正常對(duì)照組肺組織標(biāo)本。對(duì)進(jìn)行外科修補(bǔ)術(shù)的先心病患者進(jìn)行隨訪(fǎng),于術(shù)后一年復(fù)查右心導(dǎo)管,右心導(dǎo)管測(cè)定肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)25 mmHg者為先心病患者肺動(dòng)脈高壓可逆組,mPAP≥25 mmHg者為先心病患者肺動(dòng)脈高壓不可逆組。提取肺組織總蛋白,bradford方法定量。丙酮沉淀蛋白以及胰蛋白酶酶解之后,用iTRAQ試劑標(biāo)記。用AB SCIEX TripleTOF 5600質(zhì)譜儀檢測(cè)差異蛋白,獲得差異蛋白的一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖。對(duì)鑒定到的差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析,進(jìn)行蛋白質(zhì)功能富集分析、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析以及蛋白質(zhì)相互作用通路分析。根據(jù)生物信息學(xué)結(jié)果和文獻(xiàn)閱讀,選取可能與先心病PAH可逆機(jī)制有關(guān)的差異蛋白。結(jié)果：共鑒定差異蛋白160個(gè),與先心病PAH可逆組相比,在先心病PAH不可逆組上調(diào)≥1.5倍的蛋白85個(gè),下調(diào)≥1.5倍的蛋白75個(gè)。蛋白質(zhì)功能富集分析顯示差異表達(dá)蛋白質(zhì)參與的主要生物學(xué)過(guò)程包括細(xì)胞黏附、生物附著、對(duì)損傷反應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)吞正調(diào)節(jié)、肌動(dòng)蛋白絲介導(dǎo)過(guò)程、細(xì)胞基質(zhì)粘附、細(xì)胞骨架組織、肌動(dòng)蛋白骨架組織、急性炎癥過(guò)程、蛋白翻譯過(guò)程、血液凝固、穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)和參與膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)。這些蛋白質(zhì)參與的相互作用網(wǎng)絡(luò)主要集中在15個(gè)網(wǎng)絡(luò)模塊,主要是：免疫調(diào)節(jié)、免疫反應(yīng)信號(hào)通路、細(xì)胞組分結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)發(fā)育、肌肉收縮、正調(diào)節(jié)蛋白代謝、病毒轉(zhuǎn)錄、正調(diào)節(jié)生物過(guò)程、補(bǔ)體激活、免疫反應(yīng)正調(diào)節(jié)和細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的反應(yīng)等。差異蛋白相互作用主要通路如下：免疫反應(yīng)的補(bǔ)體通路、細(xì)胞黏附與遷移通路、細(xì)胞骨架重塑、內(nèi)皮細(xì)胞非縫隙鏈接接觸、凝血通路、HDL介導(dǎo)膽固醇反向轉(zhuǎn)運(yùn)、肺癌中TGF-β通路和整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞骨架重塑通路。結(jié)論本研究對(duì)先心病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓患者的肺組織進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)先心病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓患者術(shù)后PAH不可逆組和PAH可逆組相比,有160種蛋白質(zhì)表達(dá)量存在差異,其中在先心病PAH不可逆組中上調(diào)蛋白85個(gè),下調(diào)蛋白75個(gè)。生物信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn),較多蛋白質(zhì)與細(xì)胞骨架重塑和炎癥反應(yīng)相關(guān),結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),篩選出的Caveolin-1、Filamin A以及Apolipoprotein A-I可能與先心病術(shù)后PAH不可逆相關(guān),需進(jìn)一步研究證實(shí)。第三部分：體重指數(shù)評(píng)價(jià)特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者預(yù)后的研究目的：“肥胖矛盾”,是指雖然肥胖與心血管疾病發(fā)病相關(guān),但體重指數(shù)(body mass Index, BMI)較高的心血管病患者預(yù)后較好。尚未有研究關(guān)于體重指數(shù)與特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(idiopathic pulmonary arterial hypertension, IPAH)患者預(yù)后關(guān)系的研究。本研究探索研究BMI對(duì)IPAH患者預(yù)后的作用。方法：對(duì)入選的173例特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者進(jìn)行隨訪(fǎng),以全因死亡為隨訪(fǎng)終點(diǎn)。將人群按國(guó)際BMI定義分類(lèi),分為低體重組(BMI18.5kg/m2),正常體重組(18.5-24.9kg/m2),超重和肥胖組(25-34.9 kg/m2)。先比較不同BMI水平人口學(xué)特征和各項(xiàng)臨床指標(biāo)的差異,再應(yīng)用Kaplan-Meier曲線(xiàn)及Log-rank檢驗(yàn)對(duì)不同BMI人群的生存率進(jìn)行描述及比較,多因素Cox回歸用于分析BMI對(duì)IPAH患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)作用。結(jié)果：平均隨訪(fǎng)時(shí)間隨訪(fǎng)為31個(gè)月,其中57例死亡。不同BMI水平組的患者在年齡、心功能分級(jí)、左心室舒張末期內(nèi)徑方面存在顯著差異,其中超重肥胖組的年齡較大,心功能分級(jí)較好,左心室舒張末期內(nèi)徑較大。三組人群的右心導(dǎo)管測(cè)試血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)及血清NT-proBNP方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。kaplan-meier生存曲線(xiàn)顯示,相對(duì)于正常體重組和低體重組,超重和肥胖組有更好的生存率(log-rank檢驗(yàn),分別P=0.027,P=0.000)。多元COX回歸分析顯示低體重(P=0.001)、WHO心功能分級(jí)差(P=0.046)、低心臟指數(shù)(P=0.000)、左室舒張末期內(nèi)徑小(P=0.001)、未使用靶向藥物治療(P=0.000)都是預(yù)測(cè)]IPAH患者預(yù)后較差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論：BMI較高的IPAH患者生存率較正常體重和低體重患者好。第四部分：血清乳酸脫氫酶對(duì)特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者全因死亡風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)作用目的：心力衰竭時(shí)肝功能損傷是導(dǎo)致血清乳酸脫氫酶(serum lactate dehydrogenase,S-LDH)增高的因素之一,而特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(idiopathic pulmonary arterial hypertension,IPAH)后期的主要特征是右心衰竭。本研究的目的是探索研究S-LDH對(duì)IPAH患者預(yù)后的作用。方法：連續(xù)入選2007年5月至2012年7月在阜外醫(yī)院住院的173名IPAH患者,男性48例,女性125例,平均年齡31±10歲。按照S-LDH正常界值(250 IU/L),分為S-LDH正常組(S-LDH 250 IU/L)以及S-LDH升高組(S-LDH≥250 IU/L)。對(duì)所有入選的患者都進(jìn)行了右心導(dǎo)管檢查,生化檢查在右心導(dǎo)管檢查的一周內(nèi)進(jìn)行。結(jié)果：入選的173例IPAH患者中,有53例(30.6%)IPAH患者S-LDH≥250 IU/L,為S-LDH升高組,120例患者S-LDH250 IU/L,為S-LDH正常組。兩組在性別、體重指數(shù)、肺毛細(xì)血管楔壓、血清肌酐、谷丙轉(zhuǎn)氨酶以及靶向藥物治療方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但S-LDH升高組與S-LDH正常組相比,前者心功能分級(jí)較差；右心房平均壓、肺動(dòng)脈平均壓、肺血管阻力、尿酸、總膽紅素、谷草轉(zhuǎn)氨酶和NT-proBNP較高；心指數(shù)以及混合靜脈血氧飽和度較低。在平均31.2±17.9個(gè)月的隨訪(fǎng)時(shí)間中,一共57例患者死亡,其中S-LDH正常組中有20例(16.7%)的患者死亡,而S-LDH升高組中有37(69.8%)例患者死亡。kaplan-meier生存曲線(xiàn)顯示S-LDH升高組的預(yù)后顯著差于S-LDH正常組(log-rank檢驗(yàn),P0.001)。在多因素COX生存分析中,低體重指數(shù)(P0.001)、低心臟指數(shù)(P0.001)、WHO心功能分級(jí)差(P=0.030)、高S-LDH(P0.002)以及缺乏靶向藥物治療(P0.001)是IPAH患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ROC曲線(xiàn)進(jìn)一步顯示S-LDH水平增高預(yù)示IPAH患者預(yù)后差,最佳的S-LDH預(yù)測(cè)介值是218.5 IU/1(敏感性,80%;特異性,70%)。曲線(xiàn)下面積0.778[95%可信區(qū)間(CI),0.701-0.855],而NT-proBNP的曲線(xiàn)下面積是0.642(95%CI,0.555-0.730)。結(jié)論：升高的血清乳酸脫氫酶是特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者死亡的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。
[Abstract]:In the first part , idiopathic pulmonary arterial hypertension ( IPAH ) refers to the pulmonary vascular disease caused by unknown causes . The main feature of this study is pulmonary vascular remodeling , increasing pulmonary arterial pressure , and it is not clear . With the development and perfection of the theory and technique of proteomic analysis , the mechanism of pulmonary hypertension formation in normal control group and idiopathic pulmonary hypertension is investigated .
The expression of transgelin in pulmonary tissues of patients with idiopathic pulmonary hypertension was significantly higher than that in the control group ( P = 0 . 017 ) . With the development and perfection of proteomic theory and technique , it is difficult to accurately judge the nature of pulmonary vascular disease and whether it has reversibility . With the development and perfection of the theory and technique of proteomic analysis , it is possible to study the molecular mechanism of the reversible mechanism of PAH in patients with congenital heart disease .
The main biological processes of protein function enrichment and analysis were as follows : immune regulation , immune response signal pathway , cellular matrix adhesion , cellular skeleton tissue , actin skeleton tissue , acute inflammatory process , protein translation process , cellular skeleton tissue , actin skeleton tissue , acute inflammatory process , protein translation process , blood coagulation , steady state regulation , and cholesterol transport . The main pathways of protein function enrichment analysis were as follows : immune response , cell adhesion and migration pathway , cytoskeletal remodeling , endothelial cell non - gap linkage contact , coagulation pathway , HDL - mediated cholesterol reverse transport , and the like . Objective : To study the effect of BMI on prognosis of patients with idiopathic pulmonary hypertension . Results : The average follow - up time was 31 months . The results showed that the mean follow - up time was 31 months , 57 of them died . There was no statistical difference between age , cardiac function and left ventricular end diastolic diameter . Objective : To investigate the effect of S - LDH on the prognosis of patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension ( IPAH ) . Methods : To study the role of S - LDH in patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension ( P = 0.000 ) . Results : Of the 173 IPAH patients , 53 ( 30 . 6 % ) IPAH patients had S - LDH 鈮，

本文編號(hào)：1973312