本文選題：病毒性心肌炎 + 柯薩奇病毒A組16型�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的經(jīng)過細胞培養(yǎng)并經(jīng)RT-PCR技術(shù)鑒定得到柯薩奇病毒A組16型病毒,使用該病毒建立小鼠病毒性心肌炎的模型,通過對病毒性心肌炎小鼠心臟組織及血清學(xué)研究探討:1、病原學(xué)本身及免疫內(nèi)環(huán)境的紊亂與病毒性心肌炎的關(guān)聯(lián),2、利巴韋林在治療感染CVA16小鼠的病毒性心肌炎的適宜劑量。方法1、通過細胞培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)對該病毒敏感的Vero細胞,再用其感染CVA16病毒,觀察病毒的致病變能力,同時通過RT-PCR對病毒進行鑒定,將培養(yǎng)至第9代的病毒進行放大培養(yǎng),經(jīng)離心獲得病毒上清液,進行無菌分裝,同時進行TCID50實驗檢測病毒的濃度,至此獲得已知毒力的CVA16病毒;2、使用上述獲得所需的病毒去感染小鼠,實驗采用腹腔注射,建立與病毒性心肌炎有關(guān)的小鼠模型,將實驗分五組,實驗組(A組)、對照組(B組)、藥物干預(yù)高(C組)、中(D組)、低劑量組(E組),實驗過程記錄小鼠的體重、觀察小鼠四肢活動情況,分別在生后第3,7,11,15天處理小鼠,獲取血清及心臟組織,將獲得的心臟組織部分進行HE染色,另外一部分心臟組織用于提取RNA,進行RT-PCR實驗,進行病毒的鑒定,獲取的血清采用ELASA試劑盒檢測血清中的IL-6數(shù)值。所得定量數(shù)據(jù),采用隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析和完全隨機設(shè)計資料的方差分析進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果1、經(jīng)RT-PCR鑒定所獲病毒為CVA16,并且經(jīng)TCID50計算出該病毒的濃度是106TCID50/ml;2、小鼠的體重隨著日齡增加,對照組小鼠體重及適宜劑量利巴韋林藥物干預(yù)后較實驗組小鼠體重增加的更明顯,而高劑量及低劑量干預(yù)后與實驗組小鼠沒有明顯的改善;3、小鼠的血清IL-6值是先升高,在第7天時最高,后逐漸降低的趨勢,并且較正常組有明顯升高;4、感染CVA16小鼠的心肌組織病理切片中可見明顯的心肌炎性病變,適宜劑量利巴韋林干預(yù)的心肌炎癥有明顯好轉(zhuǎn),高劑量及低劑量利巴韋林藥物干預(yù)后,心肌炎癥較實驗組無明顯改善;5、從實驗組小鼠的心肌組織隨機提取RNA經(jīng)RT-PCR鑒定獲得與感染病原相同大小的條帶。結(jié)論1、柯薩奇病毒A組16型可通過病原本身致病毒性心肌炎的發(fā)生,同時免疫內(nèi)環(huán)境也在心肌有損傷發(fā)揮作用;2、適宜劑量的利巴韋林在治療CVA16有關(guān)的心肌炎中有一定的臨床意義。
[Abstract]:Objective to obtain coxsackie virus group A 16 virus by cell culture and RT-PCR technique, and to establish a mouse model of viral myocarditis by using this virus. Through the study of the heart tissue and serology in mice with viral myocarditis, the relationship between the etiology itself and the disturbance of the immune internal environment and viral myocarditis was discussed. The appropriate dosage of ribavirin in the treatment of viral myocarditis in mice infected with CVA16 was discussed. Methods 1. Vero cells which were sensitive to the virus were cultured by cell culture technique, and then infected with CVA16 virus. The virulence of the virus was observed. At the same time, the virus was identified by RT-PCR, and the virus cultured to passage 9 was amplified. The virus supernatant was obtained by centrifugation, aseptic loading was carried out, and the concentration of the virus was detected by TCID50 experiment, so that the known virulence of CVA16 virus was obtained. The above obtained virus was used to deinfect the mice, and the mice were injected intraperitoneally. A mouse model related to viral myocarditis was established. The mice were divided into five groups: group A, group B, control group, group C, group D and group E, respectively. The body weight of the mice was recorded during the experiment. The activity of limbs of mice was observed. The mice were treated at the 3rd day after birth for 1115 days. The serum and heart tissue were obtained. The obtained heart tissue was stained with HE, and the other part of heart tissue was used to extract RNAs for RT-PCR test. The virus was identified and the ELASA kit was used to detect the value of IL-6 in the serum. The quantitative data were analyzed statistically by ANOVA of random block design data and complete random design data. Results 1. The virus was identified as CVA16 by RT-PCR, and the concentration of the virus was calculated by TCID50 to be 106TCID50 / ml ~ (-2). The body weight of mice increased with the age of day. The weight of control group mice and the appropriate dosage of ribavirin increased more obviously than that of experimental group mice after the intervention of ribavirin. However, after high and low dose intervention, there was no significant improvement in serum IL-6 of the experimental group. The serum IL-6 increased first, reached the highest level on the 7th day, and then decreased gradually. Compared with the normal group, the myocardial tissue of CVA16 infected mice showed obvious myocarditis pathological changes, the myocardial inflammation of the suitable dose of ribavirin was improved obviously, and the high dose and low dose of ribavirin were treated with ribavirin. Myocardial inflammation did not improve significantly compared with the experimental group. RNA was randomly extracted from the myocardial tissue of the experimental group and identified by RT-PCR to obtain the same size bands as the infection pathogen. Conclusion 1. Coxsackie virus group A 16 can cause viral myocarditis by the pathogen itself. At the same time, the immune environment also plays a role in myocardial injury. The appropriate dosage of ribavirin has a certain clinical significance in the treatment of CVA16 related myocarditis.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R542.21

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本文編號：1955884