本文選題：子宮內(nèi)膜干細(xì)胞 + 細(xì)胞凋亡　； 參考：《貴州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:闡明子宮內(nèi)膜干細(xì)胞(endometrial stem cells,EnSCs)來(lái)源細(xì)胞因子“雞尾酒”(EnSCs derived cytokine cocktail,EdCC)的心肌保護(hù)效應(yīng)與MEK/ERK信號(hào)通路的關(guān)系。方法:用人的EnSCs于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24h后更換培養(yǎng)液,以后每3d換液,生長(zhǎng)融合達(dá)70%左右時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng),培養(yǎng)至第三代,用流式細(xì)胞術(shù)鑒定EnSCs表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物,然后通過(guò)Millipore技術(shù)從培養(yǎng)的EnSCs上清液中獲得EdCC,蛋白定量后供實(shí)驗(yàn)用或-80℃冰箱儲(chǔ)存。用ELISA檢測(cè)EnSCs原培養(yǎng)液中EGF,以結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方式制備心肌缺血再灌注損傷模型。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要通過(guò)小鼠尾靜脈注射不同劑量或不同凍存時(shí)間的EdCC及相應(yīng)對(duì)照組試劑,再灌注24小時(shí)后用TTC/Evans blue染色小鼠I/R心肌,用image pro軟件計(jì)算其梗死面積。以7um厚度冰凍切片留樣,采用TUNEL染色和免疫熒光染色方法檢測(cè)其細(xì)胞凋亡情況,用Western blot檢測(cè)ERK1/2磷酸化水平和cleaved caspase-3表達(dá)。乳小鼠心肌細(xì)胞分為正常組、對(duì)照組和EdCC組,用過(guò)氧化氫(H2O2)造成氧化應(yīng)激,檢測(cè)上清液乳酸脫氫酶(LDH)活性,同樣用TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡,DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧族(ROS)濃度。結(jié)果:1、體外培養(yǎng)的EnSCs貼壁生長(zhǎng),呈紡錘形,融合后形成旋渦樣結(jié)構(gòu)。經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)分析,EnSCs表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD90,不表達(dá)CD34和CD45造血細(xì)胞來(lái)源表面標(biāo)志;用Millipore蛋白超濾技術(shù)可截留近90%EnSCs上清液中的EGF蛋白;2、每15ml EnSCs上清液經(jīng)Millipore超濾技術(shù)超濾濃縮后的體積為(200.5±11.2)μl,蛋白濃度為(5.57±0.95)μg/μl,EdCC的提取效率為每24h(222.4±29.3)μg/106細(xì)胞。3、-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存可導(dǎo)致EdCC蛋白濃度及總量逐漸降低;4、EdCC可以保護(hù)乳小鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激所致細(xì)胞損傷及凋亡;5、EdCC減輕小鼠缺血再灌注損傷注射100μg為最佳劑量;5、-80℃長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存降低EdCC心肌保護(hù)效應(yīng);6、EdCC可促進(jìn)心肌ERK1/2磷酸化;7、EdCC介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化可被PD98059阻斷;8、EdCC通過(guò)MEK1-ERK信號(hào)通路減輕心肌缺血再灌注損傷;9、EdCC通過(guò)MEK1-ERK信號(hào)通路抑制細(xì)胞凋亡10、EGFR部分參與EdCC的心肌保護(hù)作用。結(jié)論:1、從培養(yǎng)人的EnSCs上清液中成功制備了可供直接使用的EdCC;2、該研究結(jié)果對(duì)目前成體干細(xì)胞治療模式從細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞因子具有重要的理論意義;3、從組織壞死、細(xì)胞凋亡和凋亡蛋白表達(dá)三個(gè)方面驗(yàn)證了EdCC對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
[Abstract]:Aim: to elucidate the relationship between myocardial protective effect of endometrial stem cells (stem cells) derived from endometrial stem cell (endometrial stem cell) and MEK/ERK signaling pathway. Methods: human EnSCs was cultured at 37 鈩，

本文編號(hào)：1929271