本文選題：慢性腎臟病 + 血管鈣化　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:心血管事件(cardial vessel disease,CVD)是慢性腎臟病患者(chronic kidney disease,CKD)的常見(jiàn)并發(fā)癥,且CVD又是CKD患者死亡的常見(jiàn)原因之一,而血管鈣化(vascular calcification,VC)是CVD的高危因素。既往認(rèn)為血管鈣化是鈣磷單純沉積于血管壁的不可逆、被動(dòng)過(guò)程,現(xiàn)在大量的研究表明血管鈣化是多種因素參與的、與骨代謝異常相關(guān)的、可逆的、可調(diào)節(jié)的生物學(xué)過(guò)程。除年齡、糖尿病、高血壓等傳統(tǒng)因素外,鈣磷代謝異常、氧化應(yīng)激、繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)等非傳統(tǒng)因素也對(duì)CKD患者血管鈣化有著不可忽視的影響。終末期腎臟病(end stage renal disease,ESRD)患者血管鈣化主要發(fā)生于大、中脈的中膜,而動(dòng)脈中膜主要成分之一是血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)。VSMC轉(zhuǎn)分化是血管中膜鈣化的主要機(jī)制之一,即血管平滑肌細(xì)胞在各種因素的刺激下,從收縮表型向成骨/軟骨樣表型轉(zhuǎn)化,同時(shí)合成并分泌Runx2、BMPs、Cbfα-1等蛋白分子調(diào)節(jié)血管鈣化。越來(lái)越多的研究認(rèn)為高磷誘導(dǎo)血管鈣化的機(jī)制與成骨分化轉(zhuǎn)錄因子(runt-related transcription factor,Runx2)有密切關(guān)系。Runx2調(diào)節(jié)骨骼形成相關(guān)基因表達(dá)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,同時(shí)Runx2也受激素、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子及內(nèi)環(huán)境變化的調(diào)節(jié)。Runx2通常不表達(dá)于血管組織,它的高表達(dá)與血管鈣化發(fā)生和進(jìn)展關(guān)系密切,且鈣化愈嚴(yán)重,Runx2表達(dá)水平愈高,基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究常將其作為血管鈣化早期標(biāo)志物。我科前期研究發(fā)現(xiàn)高磷能夠促進(jìn)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈VSMC Runx2表達(dá)增加,進(jìn)而發(fā)生表型轉(zhuǎn)換。Byon等細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,內(nèi)源性敲除Runx2表達(dá)能夠抑制TRAP陽(yáng)性破骨細(xì)胞形成,RANKL表達(dá)和巨噬細(xì)胞遷移,進(jìn)而減弱高脂飲食誘導(dǎo)的血管鈣化,Gangahar等也證實(shí)MGP抑制鈣化也是通過(guò)減低Runx2的表達(dá),抑制其活性實(shí)現(xiàn)MGP鈣化抑制作用。這些均說(shuō)明調(diào)節(jié)Runx2表達(dá)可以抑制VSMC鈣化。凋亡也是血管中膜發(fā)生鈣化的主要機(jī)制之一。許多研究已經(jīng)表明,鈣化始于正在死亡的血管平滑肌細(xì)胞釋放的膜結(jié)合基質(zhì)小泡,即凋亡小體。Mc Nair采用電子顯微鏡觀察透析和非透析患者中動(dòng)脈發(fā)現(xiàn),損傷/死亡的血管平滑肌細(xì)胞可以釋放含納米羥基磷灰石顆粒的基質(zhì)小泡,推測(cè)這些基質(zhì)小泡是鈣化的起點(diǎn),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)透析可以加速基質(zhì)小泡的釋放從而加速透析患者血管鈣化。Schoppet等通過(guò)in situ ligation分析發(fā)現(xiàn),Monckeberg's硬化患者動(dòng)脈中膜存在凋亡,Sachiko等觀察高磷培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈組織也發(fā)現(xiàn)凋亡增加。Kozaki等發(fā)現(xiàn)高磷能夠加速血管平滑肌細(xì)胞凋亡并促進(jìn)鈣化,且這種作用能夠被他汀類藥物以劑量依賴性方式抑制。生長(zhǎng)抑制特異基因-6(growth arrest-specific gene 6,Gas6)是維生素K依賴蛋白家族的一員,其配體為Axl,研究表明他汀類藥物可以增加Gas6 m RNA的穩(wěn)定性,而非增加其轉(zhuǎn)錄活性,從而激活Gas6-Axl信號(hào)通路,抑制人血管平滑肌細(xì)胞凋亡,進(jìn)而減輕高磷誘導(dǎo)的鈣化。而采用RNA干擾技術(shù)或消除Axl細(xì)胞外結(jié)構(gòu)均可導(dǎo)致他汀類藥物對(duì)高磷誘導(dǎo)血管鈣化的抑制作用的消失。鈣化抑制因子MGP(matrix gla protein,MGP)可以抑制鈣磷沉積于血管壁而抑制血管鈣化,進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),于高磷培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞中上調(diào)MGP表達(dá)后,血管平滑肌細(xì)胞Caspase3及細(xì)胞因子表達(dá)減少、活性降低,細(xì)胞凋亡減弱,鈣化減輕。Hyunsoo等研究發(fā)現(xiàn),α-硫辛酸一方面可以通過(guò)穩(wěn)定線粒體功能,抑制細(xì)胞色素c釋放至胞漿激活Caspase3,減弱細(xì)胞凋亡而減輕血管鈣化,另一方面也可以激活Gas6/Axl/Akt信號(hào)通路,增強(qiáng)細(xì)胞增殖能力而減輕血管鈣化�？偨Y(jié)前人的研究我們可以發(fā)現(xiàn),血管平滑肌細(xì)胞凋亡是血管鈣化發(fā)生的重要機(jī)制之一,Gas6/Axl/Akt信號(hào)通路在調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞凋亡和鈣化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。研究表明傳統(tǒng)和非傳統(tǒng)因素通過(guò)不同機(jī)制影響終末期腎臟病(end stage renal disease,ESRD)患者血管鈣化。Kirschbaum等在研究血液透析患者透析液碳酸氫鹽濃度與鈣離子濃度時(shí)發(fā)現(xiàn),透后即刻血PH值明顯升高,僅采用中心靜脈導(dǎo)管透析的患者血清游離鈣和總鈣水平升高,采用自體動(dòng)靜脈內(nèi)瘺或移植血管透析患者體內(nèi)游離鈣和總鈣沒(méi)有顯著改變,且羥基磷灰石形成率均沒(méi)有顯著變化。但透析結(jié)束后兩小時(shí)其發(fā)生遷移性鈣化的風(fēng)險(xiǎn)較透前升高2.8倍,這表明血液PH值,亦或透析液PH可能與血液透析患者血管鈣化風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。Pineda等學(xué)者對(duì)22只5/6腎切除CKD模型大鼠和10只非5/6腎切除大鼠研究發(fā)現(xiàn),CKD模型大鼠血PH為7.57±0.03,非5/6腎切除大鼠血為7.36±0.1,且CKD模型大鼠主動(dòng)脈鈣化顯著增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),血陰離子間隙(anion gap,AG)也與大鼠主動(dòng)脈血管鈣化和主動(dòng)脈磷酸鹽含量具有高度的相關(guān)性。目前,有關(guān)PH值及其波動(dòng)對(duì)慢性腎臟病患者血管鈣化的研究較少見(jiàn)。因此,本課題擬通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究PH值及其波動(dòng)對(duì)CKD血管鈣化的影響,探討其在CKD血管鈣化進(jìn)展中的作用機(jī)制以及干預(yù)Gas6/AXLPI3K/AKT信號(hào)通路能否作為CKD血管鈣化的治療靶點(diǎn)。我們的研究結(jié)果有望進(jìn)一步闡明CKD血管鈣化的發(fā)病機(jī)制以及尋找CKD及ESRD患者治療的新靶點(diǎn)和開(kāi)發(fā)具有潛在治療作用的靶向藥物提供科學(xué)依據(jù)。方法:1終末期腎臟病患者冠脈鈣化影響因素的研究選取2014年至2015年在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院血液凈化中心行規(guī)律血液透析(3次/周)ESRD患者53例,根據(jù)冠脈鈣化評(píng)分(coronary artery calcification score,CACs)分為鈣化陰性組、鈣化陽(yáng)性組(輕度鈣化組、中度鈣化組、重度鈣化組)。收集臨床一般資料,采集一周首次透析前動(dòng)脈血測(cè)定血常規(guī)、肝功能、電解質(zhì)、血脂、C反應(yīng)蛋白(CRP)、β2-微球蛋白(β2-MG)、游離甲狀旁腺素(i PTH)、纖維蛋白原、鐵蛋白等;并同次測(cè)定透析前、透析后動(dòng)脈血PH值,計(jì)算△PH(PH透后-PH透前)。通過(guò)冠脈鈣化評(píng)分與一般資料、上述血生化指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性、Logistic回歸等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,探討ESRD患者冠脈鈣化的發(fā)生情況及其影響因素。2 PH及其波動(dòng)對(duì)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈血管鈣化的影響及機(jī)制研究通過(guò)5/6腎切除術(shù)來(lái)構(gòu)建大鼠慢性腎衰竭的模型,飼喂骨化三醇引起大鼠血管鈣化的發(fā)生,腹腔注射分別注射NH4Cl、Na HCO3和隔天交替注射NH4Cl、Na HCO3構(gòu)建大鼠慢性代謝性酸中毒、慢性代謝性堿中毒和酸堿波動(dòng)的模型。將34只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)數(shù)字法將大鼠隨機(jī)分成6組,即假手術(shù)組(n=6)、慢性腎衰竭組(n=5)、鈣化組(n=5)、酸干預(yù)組(n=6)、堿干預(yù)組(n=6)和酸堿波動(dòng)組(n=6)。30天之后,于大鼠的腹主動(dòng)脈穿刺采血,血?dú)夥治鰷y(cè)定動(dòng)脈血p H,動(dòng)脈血用肝素抗凝,離心后,分離血漿,-80℃凍存?zhèn)溆�。取大鼠胸腹主�?dòng)脈全長(zhǎng),用于組織學(xué)觀察和鈣含量測(cè)定。3胞外PH及其波動(dòng)對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及鈣化的影響選取8~10周齡健康雄性SD大鼠6只,分別體外分離培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈VSMCs,采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定。將VSMCs隨機(jī)分為PH7.4組、PH7.4+磷組、PH6.8+磷組、PH7.7+磷組、PH6.8/7.7+磷組,刺激10天后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鈣含量檢測(cè);茜素紅染色檢測(cè)鈣結(jié)節(jié);刺激6天后進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè),反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2(Runx2)m RNA的表達(dá)。4胞外PH及其波動(dòng)對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究選取8~10周齡健康雄性SD大鼠6只,體外分離培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈VSMCs,采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定。將VSMCs用隨機(jī)抽樣法分為PH7.4、PH6.8+磷、PH7.4+磷、PH7.7+磷、PH6.8/7.7+磷共5組。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)Bcl2 m RNA、Bax m RNA、caspase3m RNA表達(dá),計(jì)算Bcl2/Bax。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。5胞外酸性刺激對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究選取8~10周齡健康雄性SD大鼠6只,體外分離培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈VSMCs,采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定。將VSMCs用隨機(jī)抽樣法分為PH7.4、PH6.8+P、PH7.4+P、PH6.8+P+LY294002共4組。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)Gas6 m RNA、Axl m RNA、caspase3 m RNA和Akt m RNA表達(dá),Western Blot法檢測(cè)Caspase3、cleaved-Caspase3、t-Akt和p-Akt的表達(dá)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:1終末期腎臟病患者冠脈鈣化影響因素的研究(1)入組ESRD患者53例,按照其冠狀動(dòng)脈鈣化的程度分成四組,其中年齡越大、透齡越長(zhǎng)、血磷越高,鈣化程度越強(qiáng),而舒張壓、白蛋白、△PH越小,鈣化程度越重。與陰性組比較,上述指標(biāo)重度鈣化組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其中透齡中度鈣化組與陰性組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)ESRD患者冠狀動(dòng)脈鈣化積分與年齡(r=0.269,P0.05)、透齡(r=0.341,P0.01)、血鈣水平(r=0.358,P0.01)、血磷水平(r=0.186,P0.05)及PH透前(r=0.275,P0.05)呈正相關(guān),與白蛋白(r=-0.192,P0.05)、△PH(r=-0.302,P0.05)呈負(fù)相關(guān);對(duì)其鈣化評(píng)分取對(duì)數(shù)值后,仍有如上的相關(guān)關(guān)系。(3)Logistic回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn):年齡、△PH、透齡和血磷水平是患者發(fā)生冠脈鈣化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2酸、堿性環(huán)境及其波動(dòng)對(duì)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈血管鈣化的影響及機(jī)制研究(1)酸性環(huán)境對(duì)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化的影響:與假手術(shù)組(n=6)大鼠相比,慢性腎衰竭組(n=5)、鈣化組(n=5)及酸干預(yù)組(n=6)大鼠血肌酐和尿素氮水平均顯著增高(P0.05);與假手術(shù)組、慢性腎衰竭組(n=5)、鈣化組(n=6)分別比較,酸干預(yù)組大鼠動(dòng)脈血p H和[HCO3-]水平均下降(P0.05)。von Kossa染色結(jié)果顯示:鈣化組大鼠主動(dòng)脈發(fā)生明顯鈣化,但假手術(shù)組、慢性腎衰竭組和酸干預(yù)大鼠主動(dòng)脈均未發(fā)生主動(dòng)脈鈣化。鈣含量結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比較,慢性腎衰竭組大鼠主動(dòng)脈鈣含量無(wú)明顯增高(2.46±1.23vs2.44±0.56,P0.05);鈣化組大鼠主動(dòng)脈鈣含量較假手術(shù)組和慢性腎衰竭組大鼠均顯著增高(9.73±1.83vs2.44±0.56,9.73±1.83vs2.46±1.23,P0.05);與鈣化組相比,酸干預(yù)大鼠主動(dòng)脈鈣含量明顯降低(9.73±1.83vs5.27±2.12,P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比較,慢性腎衰竭組大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分無(wú)明顯差異(2.95±1.10vs2.25±0.82;2.72±0.86vs1.46±1.22,P0.05);鈣化組大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分較假手術(shù)組和慢性腎衰竭組大鼠均顯著增高(6.16±1.59vs2.25±0.82,6.16±1.59vs2.95±1.10;6.62±1.31vs1.46±1.22,6.62±1.31vs2.72±0.86,P0.05);與鈣化組相比,酸干預(yù)大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分顯著降低(6.16±1.59vs4.11±0.92;6.62±1.31vs3.60±1.43,P0.05)。(2)堿性環(huán)境對(duì)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化的影響:與假手術(shù)組、慢性腎衰竭組、鈣化組分別比較,堿干預(yù)組大鼠動(dòng)脈血PH水平升高(P0.05),假手術(shù)組、慢性腎衰組、鈣化組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與假手術(shù)組大鼠相比,慢性腎衰竭組、鈣化組及堿干預(yù)組大鼠血漿肌酐和尿素氮水平均顯著增高(P0.05)。Von Kossa染色結(jié)果顯示:與假手術(shù)組、慢性腎衰竭組相比,鈣化組、堿干預(yù)組大鼠主動(dòng)脈鈣化明顯。鈣含量結(jié)果顯示,堿干預(yù)組大鼠主動(dòng)脈鈣含量較假手術(shù)組和慢性腎衰竭組大鼠均顯著增高(13.86±3.16vs2.44±0.56,13.86±3.16vs2.46±1.23,P0.05);與鈣化組相比,堿干預(yù)大鼠主動(dòng)脈鈣含量明顯升高(13.86±3.16vs9.73±1.83,P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,堿干預(yù)組大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分較假手術(shù)組和慢性腎衰竭組大鼠均顯著增高(8.96±1.36vs2.25±0.82,8.96±1.36vs2.95±1.10;8.01±0.74vs1.46±1.22,8.01±0.74vs2.72±0.86,P0.05);與鈣化組相比,堿干預(yù)大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分顯著升高(8.96±1.36vs6.16±1.59;8.01±0.74vs6.62±1.31,P0.05)。(3)酸堿波動(dòng)對(duì)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化的影響:Von Kossa染色結(jié)果顯示:與酸干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈鈣化明顯增加;與堿干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈鈣化則顯著降低。鈣含量結(jié)果顯示,與酸干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈鈣含量明顯增加(8.59±1.84vs5.27±2.12,P0.05);與堿干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈鈣含量則顯著降低(8.59±1.84vs13.86±3.16,P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,與酸干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分明顯升高(6.74±1.22vs4.11±0.92;6.41±1.15vs3.60±1.43,P0.05);與堿干預(yù)組相比,波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈Runx2、Caspase3免疫組化評(píng)分則顯著降低(6.74±1.22vs8.96±1.36;6.41±1.15vs8.01±0.74,P0.05)。3胞外PH及其波動(dòng)對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及鈣化的影響(1)不同PH值胞外刺激10天后5組大鼠VSMCs鈣含量比較,PH6.8+磷組低于PH7.7+磷組(P0.05)和PH6.8/7.7+磷組(P0.05);PH6.8/7.7+磷組低于PH7.7+磷組(P0.05)。茜素紅染色結(jié)果與鈣含量測(cè)定結(jié)果一致。(2)不同PH值胞外刺激6天后5組大鼠VSMCs ALP活性比較,PH6.8+磷組低于PH7.7+磷(P0.05)和PH6.8/7.7+磷組(P0.05);PH6.8/7.7+磷組低于PH7.7+磷組(P0.05)。(3)不同PH值胞外刺激6天后5組大鼠VSMCs Runx2 m RNA表達(dá)量比較,PH6.8+磷組低于PH7.7+磷(P0.05)和PH6.8/7.7+磷組(P0.05);PH6.8/7.7+磷組低于PH7.7+磷組(P0.05)。4胞外PH及其波動(dòng)對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究PH6.8+磷組細(xì)胞凋亡率及Caspase3 m RNA均低于PH7.7+磷組(P0.05)和PH6.8/7.7+磷組(P0.05);PH6.8+磷組Bcl2/Bax水平高于PH7.7+磷組(P0.05)和PH6.8/7.7+磷組(P0.05)5胞外酸性刺激對(duì)高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究(1)細(xì)胞外酸性環(huán)境對(duì)大鼠VSMCs刺激10天后進(jìn)行茜素紅染色和鈣含量測(cè)定。與PH7.4組相比,PH7.4+P組鈣含量顯著增加(P0.05),PH6.8+P組鈣含量也顯著高于PH7.4組(P0.05)。隨著PH減低,PH6.8+P組鈣含量明顯低于PH7.4+P組(P0.05)。茜素紅染色結(jié)果與鈣含量測(cè)定結(jié)果一致。(2)VSMCs細(xì)胞凋亡的檢測(cè)使用FACSort血細(xì)胞計(jì)數(shù)器(美國(guó),紐約,FACSCA)。結(jié)果表明,細(xì)胞主要集中在D3、D4、B3、B4、C3、C4。PH 7.4+P組大鼠VSMCs凋亡率顯著高于PH7.4組(P0.05),約為其3倍。PH6.8+P組大鼠VSMCs凋亡率約為PH7.4+P組凋亡率的60%,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)PH7.4組、PH7.4+P組、PH6.8+P組Gas6表達(dá)兩兩之間均無(wú)明顯差異(均P0.05)。PH7.4+P組、PH6.8+P組Axl m RNA的表達(dá)均顯著低于PH7.4組(P0.05)。然而與PH7.4+P組相比較,隨著PH減低,PH6.8+P組Axl m RNA的表達(dá)顯著升高(P0.05)。我們同時(shí)采用Western Blot法對(duì)三組Axl蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)(Fig.4-3C)。Axl蛋白表達(dá)情況與m RNA表達(dá)情況一致,與PH7.4組相比較,PH7.4+P組、PH6.8+P組Axl蛋白表達(dá)量分別減少了45%和66%,且PH6.8+P組Axl蛋白表達(dá)量是PH7.4+P組的1.5倍。(4)PH6.8+P+LY294002組較PH6.8+P組鈣含量明顯下降(P0.05),但仍顯著低于PH7.4+P組鈣含量。三組VSMCs凋亡率與鈣含量變化結(jié)果一致。PH6.8+P+LY294002組和PH6.8+P組凋亡率顯著高于PH7.4+P組(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,PH6.8+P+LY294002組和PH6.8+P組Caspase3表達(dá)明顯增加而Akt表達(dá)明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1 ESRD患者冠脈鈣化受多種因素的影響,年齡、透齡、血磷、△PH是患者發(fā)生冠脈鈣化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,而透前PH在△PH對(duì)冠脈鈣化的影響中起著重要作用。2酸性環(huán)境能夠抑制慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化,而堿性環(huán)境及酸堿波動(dòng)能夠促進(jìn)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化。其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)控Runx2和Caspase3表達(dá)進(jìn)而干預(yù)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和凋亡實(shí)現(xiàn)對(duì)血管鈣化的影響。3胞外酸性環(huán)境能夠抑制高磷誘導(dǎo)的大鼠VSMCs鈣化,而胞外堿性環(huán)境及酸堿波動(dòng)促進(jìn)其鈣化,其機(jī)制可能是通過(guò)升高或降低了Runx2及ALP的表達(dá)而促進(jìn)或抑制了VSMCs成骨成軟骨樣表型轉(zhuǎn)化而實(shí)現(xiàn)的。4胞外酸性環(huán)境能夠抑制高磷誘導(dǎo)的大鼠VSMCs凋亡,而胞外堿性環(huán)境及酸堿波動(dòng)促進(jìn)其凋亡。其機(jī)制可能是通過(guò)影響了Bcl-2、Bax及Caspase3的表達(dá)而導(dǎo)致了其凋亡5胞外酸性刺激可以抑制高磷誘導(dǎo)的血管平滑細(xì)胞鈣化,其機(jī)制可能是Gas6/Axl-PI3K/Akt信號(hào)通路在胞外酸性刺激抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化中起著一定作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：1872024