本文選題：抵抗素 + Apelin�。� 參考：《山西醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的:通過Apelin干預抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大模型,檢測心肌細胞表面積大小、單細胞總蛋白合成量、實時熒光定量PCR技術(shù)檢測心肌細胞肥大標志物BNP和β-MHC的表達,研究其對抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大的影響,探索有效防治心肌細胞肥大的新方法,為其應用于臨床心力衰竭的防治提供理論依據(jù)。方法:H9c2大鼠心肌細胞是源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的亞克隆細胞株,用含10%FBS的DMEM培養(yǎng),每2-3 d換一次培養(yǎng)液,待細胞長到70%-80%時傳代培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察,H9c2大鼠心肌細胞呈圓形或橢圓形,未見心肌搏動。取長勢良好的細胞用于實驗。將1×105個H9c2大鼠心肌細胞分別接種于6孔板內(nèi),加入含10%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng),待細胞貼壁后,換含0.1%FBS的DMEM 3 ml饑餓16 h。根據(jù)實驗目的分為4組,C組(對照組):0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)48 h。R組(抵抗素組):0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)48 h。A組(抵抗素+Apelin組):0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換Apelin濃度為10μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)2 h后,換抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)46 h。N組(抵抗素+Apelin+LKB1抑制劑組):0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換LKB1抑制劑(NHE)濃度為20μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)2 h后,換Apelin濃度為10μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)0.5 h后,換為抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM 3 ml培養(yǎng)45.5 h。培養(yǎng)48 h后,細胞拍照,Image J軟件分析細胞表面積;收集細胞計數(shù),BCA法測總蛋白含量,計算單細胞總蛋白含量;實時熒光定量PCR檢測心肌細胞肥大標志物BNP和β-MHC的相對表達量。結(jié)果:與C組相比,R組心肌細胞表面積、單細胞蛋白合成量以及心肌細胞肥大標志物的相對表達量明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),成功構(gòu)建抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大模型。與R組相比,A組心肌細胞表面積、單細胞蛋白合成量以及心肌細胞肥大標志物的相對表達量明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);與R組相比,N組心肌細胞表面積、單細胞蛋白合成量以及心肌細胞肥大標志物的相對表達量無明顯減小,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:抵抗素可以誘導H9c2大鼠心肌細胞肥大;Apelin有抑制抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大的作用;Apelin抑制抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大的作用機制可能是通過激活LKB1/AMPK信號通路實現(xiàn)的。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of Apelin on cardiomyocyte hypertrophy induced by resistin in H9c2 rats, and to detect the surface area of cardiomyocytes, the total protein synthesis of single cell, and the expression of BNP and 尾 -MHC markers in cardiomyocyte hypertrophy by real-time fluorescence quantitative PCR. To study the effect of resistin on cardiomyocyte hypertrophy induced by resistin in H9c2 rats, to explore a new method to prevent and treat cardiomyocyte hypertrophy, and to provide a theoretical basis for its application in the prevention and treatment of clinical heart failure. Methods the rat cardiomyocytes were subcloned from the embryonic heart tissue of BD1X rats. They were cultured with DMEM containing 10s and cultured in different medium every 2-3 days. When the cells grew to 70% -80%, they were subcultured. The cardiomyocytes of H9c2 rats were round or oval under inverted microscope, and no myocardial pulsation was observed. The cells with good growth were used in the experiment. Myocardial cells of 1 脳 105 H9c2 rats were inoculated into 6-well plates and cultured with DMEM 3 ml containing 10s. After the cells were adhered to the cells, the cells were fed with 0.1 S DMEM 3 ml for 16 h. According to the objective of the experiment, four groups were divided into four groups (control group: 0.1 S DMEM starvation cells were cultured for 48h 路R with DMEM 3 ml containing 0.1 S) (resistin group: 0.1 S DMEM hunger cells were treated with resistin concentration of 50 ng/ml). DMEM 3 ml cultured for 48 h. A group (resistin Apelin group: 0. 1s DMEM starvation cells were cultured for 2 h with 10 渭 mol/3 ml of Apelin containing 0. 1 S DMEM 3 ml for 2 h). When the concentration of resistin was 50 ng/ml, 0.1 S DMEM 3 ml was cultured for 46 h. N group (resistin Apelin LKB1 inhibitor group: 0.1 S DMEM starvation cells were replaced with LKB1 inhibitor 3 ml) 20 渭 mol/3 ml, 0.1 S DMEM 3 ml was cultured for 2 h. When the concentration of Apelin was 10 渭 mol/3 / ml, the DMEM containing 0.1 S was incubated for 0.5 h, and the DMEM containing 0.1 S at the concentration of resistin was 50 ng/ml for 45.5 h. After 48 h culture, the cell surface area was analyzed by image-J software, the total protein content was measured by cell counting method, the total protein content of single cell was calculated, and the relative expressions of BNP and 尾 -MHC markers in cardiomyocyte hypertrophy were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results: compared with group C, the surface area of cardiomyocytes, the amount of single cell protein synthesis and the relative expression of hypertrophic markers of cardiac myocytes in group R were significantly increased. The difference was statistically significant (P 0.01). Resistin induced cardiomyocyte hypertrophy model of H9c2 rats was successfully constructed. Compared with group R, the surface area of cardiomyocytes, the amount of single cell protein synthesis and the relative expression of hypertrophic markers of cardiomyocytes in group A were significantly lower than those in group R, the difference was statistically significant (P 0.01), and the surface area of cardiomyocytes in group N was significantly lower than that in group R. The amount of single cell protein synthesis and the relative expression of hypertrophic markers in cardiomyocytes were not significantly decreased, but the difference was not statistically significant (P 0.05). Conclusion: resistin can induce cardiomyocyte hypertrophy in H9c2 rats. Apelin can inhibit cardiomyocyte hypertrophy induced by resistin in H9c2 rats. The active LKB1/AMPK signal pathway is realized.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.6

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本文編號：1870723