本文選題：綠色熒光蛋白 + 骨髓增生異常綜合征　； 參考：《中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志》2017年05期

【摘要】：目的:建立穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)白血病的細(xì)胞株,評(píng)價(jià)其生物學(xué)特性及其應(yīng)用。方法:以人骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)化為白血病細(xì)胞系SKM-1為母系細(xì)胞,通過(guò)攜帶GFP基因的慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染,以有限稀釋法獲得GFP陽(yáng)性的單細(xì)胞克隆,并將擴(kuò)大培養(yǎng)后的細(xì)胞通過(guò)皮下注射的方式進(jìn)一步在小鼠體內(nèi)篩選,致瘤后將瘤塊分離,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),獲得SKM-1/GFP細(xì)胞株。通過(guò)熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞熒光表達(dá)水平,應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)特性,將擴(kuò)大培養(yǎng)后的SKM-1/GFP細(xì)胞接種在免疫缺陷小鼠的皮下,致瘤后觀察瘤塊以及各個(gè)臟器組織的浸潤(rùn)情況。結(jié)果:SKM-1/GFP細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特性與SKM-1母系細(xì)胞無(wú)差異,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GFP的表達(dá)率為100%,體外CCK-8法檢測(cè)生長(zhǎng)曲線顯示,SKM-1/GFP細(xì)胞與母系SKM-1細(xì)胞無(wú)明顯差異。將SKM-1/GFP細(xì)胞接種于NOD/SCID小鼠皮下,14d時(shí)可見(jiàn)瘤塊形成。30 d時(shí),在熒光顯微鏡下觀察荷瘤小鼠,可見(jiàn)瘤塊自發(fā)熒光。在熒光顯微鏡下觀察腫塊冰凍切片,可見(jiàn)較為均一的GFP陽(yáng)性細(xì)胞。冰凍切片顯示,小鼠心、肝、胃、腎均有腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論:成功建立了穩(wěn)定表達(dá)GFP的骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)白細(xì)胞株SKM-1/GFP,該細(xì)胞株可以靈敏地追蹤腫瘤細(xì)胞,應(yīng)用于微小殘留病的研究,為研究骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)化的急性白血病提供一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
[Abstract]:Aim: to establish a stable cell line of myelodysplastic syndromes (MDS) transformed into leukemia and evaluate its biological characteristics and application.Methods: human myelodysplastic syndrome (MDS) was transformed into leukemia cell line SKM-1 as matrilineal cell line. Lentivirus carrying GFP gene was transfected to obtain GFP positive single cell clone by limited dilution method.The expanded cultured cells were further screened in vivo by subcutaneous injection, the tumor blocks were separated after tumorigenesis, and the SKM-1/GFP cell lines were obtained.Cell morphology was observed by fluorescence inverted microscope, fluorescence expression level was detected by flow cytometry, cell growth characteristics were detected by CCK-8 method, and expanded cultured SKM-1/GFP cells were inoculated subcutaneously in immunodeficient mice.The tumor mass and the infiltration of various organs were observed after tumorigenesis.Results there was no significant difference in morphology and growth characteristics between the cell lines of 1% SKM-1 / GFP and that of SKM-1 matrilineal cells. The expression rate of GFP was 100 by flow cytometry. The growth curve of SKM-1 / GFP cells was not significantly different from that of matrilineal SKM-1 cells by CCK-8 assay in vitro.When SKM-1/GFP cells were inoculated into NOD/SCID mice subcutaneously for 14 days, tumor blocks formed. 30 days after inoculation, the tumor-bearing mice were observed under fluorescence microscope, and the tumor blocks were observed to be autofluorescence.GFP positive cells were observed under fluorescence microscope in frozen sections of the tumor.Frozen sections showed that tumor cells infiltrated the heart, liver, stomach and kidney of mice.Conclusion: a stable myelodysplastic syndrome transformed leukocyte strain SKM-1 / GFPwas successfully established, which can be used to trace tumor cells sensitively and be used in the study of minimal residual disease.To provide a new experimental platform for the study of acute leukemia transformed by myelodysplastic syndrome.
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院血液科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金:81070404,81100340 上海市第四輪公共衛(wèi)生三年行動(dòng)計(jì)劃重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)慢病流行病學(xué)15GWZK0801
【分類號(hào)】：R551.3

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本文編號(hào)：1745237